异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白标记物的化学发光反应

采用反相流动注射法 ,系统地研究了碱性介质中和阳离子在表面活性剂CTMAB存在下 ,NaClO氧化异硫氰酸荧光素 牛血清白蛋白标记物的化学发光行为和化学发光反应的条件 ,提出了反相流动注射化学发光测定牛血清白蛋白的新方法。该法测定牛血清白蛋白线性范围为 0 .0 8～ 16mg L ;检出限为 0 .0 32mg L。讨论了蛋白质标记物化学发光增强作用的原因。

异硫氰酸荧光素标记抗体的固体基质室温磷光性质研究

研究了异硫氰酸荧光素 (FITC)标记的羊抗人抗体 (GAHAb FITC)和兔抗羊抗体 (RAGAb FITC) ,及其以三种免疫方式与人免疫球蛋白 (IgG)反应所得免疫复合物在多种固体薄膜基质上发射室温磷光 (RTP)的适宜条件及其光谱、强度和寿命等性质。研究发现 ,标记抗体及其免疫复合物保留了FITC优良的固体基质室温磷光性质 ,λ(max)ex λ(max)em =5 2 5 6 5 0nm ,其RTP强度与其浓度线性相关 ,并有很高的灵敏度。更为重要的是 ,免疫反应及其RTP检测能结合于同一基质 ,方便地相继完成。在聚酰胺膜 (PM )上 ,以Pb(Ac) 2 为重原子微扰剂 ,稀释比为 1∶10 (φ)的GAHAb FITC ,RAGAb FITC及其与人IgG形成的免疫复合物均能发射较强的RTP信号并有较长的RTP寿命。本结果为建立相应的固体基质室温磷光免疫分析 (SS RTP IA)新方法奠定了相应的实验基础。

异硫氰酸荧光素标记鳗弧菌条件优化及应用条件对荧光信号的影响

为了实现对目标细菌的有效示踪，实验以异硫氰酸荧光素（FITC）为标记物，分别设置FITC标记浓度0．2、2、20、50、100、200ixg／mL，标记时间1、15、30、60、120、240min，研究了FITC标记浓度与标记时间对鳗弧菌标记效果的影响，同时对在不同温度（25、4、-20、-70℃）及不同时间（24、48、96、192h）存储条件下鳗弧菌标记荧光的稳定性进行了比较，对标记鳗弧菌经甲醛灭活后的荧光变化进行了观察，研究了不同光照条件（0、150、1500、25000lx）对标记鳗弧菌的荧光衰减影响，以及在-20和-70℃条件下反复冻融对标记鳗弧菌荧光强度的影响。结果表明，FITC的最适标记浓度范围为20—100ug／mL，最适标记时间范围60—120min，储藏在-20和-70℃条件下，标记后的鳗弧菌荧光信号比储藏在4和25℃条件下稳定，标记后的鳗弧菌经甲醛灭活后的荧光信号稳定性优于对照组，不同强度自然光照对标记鳗弧菌的荧光衰减效果不明显，标记细菌经3次冻融，发现在一70℃条件下冻存的细菌荧光信号稳定性保持良好。本研究结果为FITC用于标记海洋细菌提供了实用的技术参数。

异硫氰酸荧光素标记壳聚糖的研究

[目的]探究FITC和壳聚糖不同物料比对反应产物标记率和特性粘数的影响,并研究2种不同pH值下FITC-Chitosan吸收光谱和荧光光谱的变化。[方法]采用异硫氰酸荧光素对壳聚糖进行荧光标记,考查不同物料比时荧光素与壳聚糖的结合情况、产物的特性粘数以及标记物在pH值1.0、6.0的吸收光谱和荧光光谱。[结果]结果表明,物料比在小于0.5%时,标记物的特性粘数变化较小,适合用于标记壳聚糖;FITC-Chitosan在pH值1.0时可见吸收波长为438 nm,荧光激发波长440 nm,发射波长520 nm;在pH值6.0时可见吸收波长为488 nm,荧光激发波长493 nm,发射波长515 nm。[结论]该研究为FITC-Chitosan获得更深入的关注和更广泛的应用提供了试验依据。

异硫氰酸荧光素-人血清白蛋白标记物化学发光反应的研究

采用反相流动注射分析方法 ,研究了异硫氰酸荧光素 ( FITC) -人血清白蛋白( HSA)标记物的化学发光性能和反应的最佳条件 ,建立了化学发光测定人血清白蛋白的新方法。体系的化学发光强度与人血清白蛋白的含量在 0 .0 8～ 1 6μg/m L内呈线性关系 ,方法的检出限为 0 .0 4μg/m L。

利用异硫氰酸荧光素标记亲合素荧光法测定生物素含量

利用异硫氰酸荧光素标记亲合素与生物素反应能引起荧光强度增强，在一定范围内，生物素与荧光强度存在一定函数关系。该方法灵敏度高（０．５ｎｇＶＨ／ｍｌ）、测定范围为５．０～６０．０ｎｇＶＨ／５ｍｌ。大孔吸附树脂对玉米浆，谷氨酸发酵液进行预处理，其生物素的回收率达９０％。

异硫氰酸荧光素标记的蚓激酶纳米粒的分离

目的 :分离除去蚓激酶白蛋白纳米粒溶液中未成粒的BSA ,利于FITC标记在纳米粒上 ;分离除去未与蚓激酶纳米粒结合的FITC ,降低FITC对检测荧光纳米粒的影响。方法 :采用SephadexG - 1 0 0和SephadexG - 5 0凝胶柱分离纯化。结果 :流速为 3ml/min时 ,SephadexG - 1 0 0柱 (2 1 .5cm ,φ1 .9cm)能够分离除去 (2 9.3± 3.6 ) %未形成纳米粒的BSA ;流速为 0 .2 5ml/min时 ,SephadexG - 5 0凝胶柱 (1 0cm ,φ2cm)可以完全分离除去未与纳米粒结合的FITC。结论 :通过分离 ,FITC有效地标记在纳米粒上 ;降低了背景荧光 ,使荧光纳米粒在荧光显微镜下清晰显现。

异硫氰酸荧光素-酚藏花红双发光磷光探针测定DNA

以Pb2+为离子微扰剂时,酚藏花红(PF)与异硫氰酸荧光素(FITC)均能在滤纸上分别发射强而稳定的室温磷光(RTP)信号;当两者混合时,发现PF和FITC的RTP信号均显著增强;而1.12 ag DNA spot-1均使PF和FITC的RTP信号剧烈增强,在634与659 nm处PF和FITC的ΔIp与DNA含量成线性关系,据此建立了FITC-PF双发光磷光探针测定蛋白质的新方法.该方法的检出限(LD)分别为14zg DNA spot–1(PF)和18zg DNA spot–1(FITC),灵敏度高,并成功用于花蜜样品中DNA含量的测定.同时探讨了FITC-PF双发光磷光探针测定痕量DNA的反应机理.

异硫氰酸荧光素发光纳米微球标记双抗夹心固体基质室温燐光免疫分析法测定人IgG

基于Sol-gel技术合成了粒径为20nm、包含了异硫氰酸荧光素（FITC）的SiO2纳米微球（简写作FITC-SiO2）.该发光纳米微球在聚酰胺膜（ACM）基质上可发射强而稳定的室温燐光.研究发现,由该发光微球标记的羊抗人IgG抗体（简记为FITC-SiO2–Ab1）,不仅能在ACM固体基质上与人IgG发生定量的特异性免疫反应,并能在免疫反应后保持优良的燐光特性,且室温燐光信号进一步增强.据此建立了固体基质室温燐光免疫分析（SS-RTP-IA）测定人IgG的一种新方法.本方法线性范围为0.08~20.0pg人IgG/斑（样品体积0.4μL/斑,对应浓度0.20~50.0 ng/mL）,工作曲线的回归方程△Ip=19.97＋15.92mIgG（pg/斑）、相关系数r=0.9997,按3Sb/k计算本方法的灵敏度,其检出限为0.015 pg/斑.与用FITC标记羊抗人IgG的方法相比,灵敏度有较大提高.分别对0.20和50.0ng/mL样品重复测定11次,RSD为3.45%和4.1%,表明本方法的重现性好.

异硫氰酸荧光素标记尿激酶的制备与性能研究

用异硫氰酸荧光素(FITC)对溶栓蛋白药物尿激酶(uPA)进行了荧光标记,制备了荧光素标记的尿激酶(FITC-u PA),经核磁谱及红外谱表征证实了反应能有效进行,其荧光素/蛋白值(F/P)值为0.45.尿激酶经荧光素标记后,具有良好的荧光性质,其荧光检测下限低达10-6 g?m L^(-1).在1~100mg?m L^(-1)范围内,荧光强度与溶液浓度具有很好的线性关系,可用于微/痕量蛋白质的定量/定性检测和跟踪标记.荧光素标记后的尿激酶,其流体力学直径与未标记的尿激酶基本一致,其体外溶栓能力也与未标记的尿激酶相当,说明FITC标记基本不影响尿激酶的生物活性,是一种简单、有效的溶栓药物标记方法.

耳后注射异硫氰酸荧光素标记葡聚糖的可能转运途径

目的探讨耳后注射异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)进入内耳的可能途径。方法以异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(分子量为3 000~5 000,20μl)为示踪剂,将200只出生24h内的昆明乳鼠随机分为耳后对照组[5mg/ml的葡聚糖(Dextran)20μl耳后注射]、耳后实验组(5mg/ml的FITC-Dextran 20μl耳后注射)、肌注对照组(5mg/ml的葡聚糖20μl肌肉注射)、肌注实验组(5mg/ml FITC-Dextran 20μl肌肉注射),每组50只;于给药后0min、5min、15min、30min、1h、3h、5h、7h、12h、24h处死动物,取其头颅做冰冻切片,应用激光共聚焦成像技术观察分析荧光示踪剂在乙状窦、内淋巴囊及耳蜗的分布及强度变化,以实验组与相应对照组荧光强度比值为强度值。结果肌注实验组乙状窦在给药后3h、内淋巴囊及耳蜗在给药后12h可检测到荧光强度轻度增高,其余各部位各时间点均未检测出明显荧光增强。耳后实验组耳后注射示踪剂后,乙状窦、内淋巴囊分别在给药后即刻、耳蜗在给药后30min可观察到荧光信号,随后荧光强度随时间延长依次升高,乙状窦、内淋巴囊、耳蜗的荧光强度达峰值时间分别为给药后5~15、30、60min,到12小时强度均再次小幅度升高。结论药物在耳后注射较肌肉注射更易于进入内淋巴液,可能径路为:示踪剂首先通过局部循环和局部渗透至乙状窦内富集,随后通过乙状窦与内淋巴囊间的脉络关系进入内淋巴液,最终逆内淋巴浓度梯度作用于内耳。

异硫氰酸荧光素-牛血清蛋白-Pb^(2+)“开关”型荧光探针测定尿液中胰蛋白酶

本文研究了"开关"型异硫氰酸荧光素(FITC)-牛血清蛋白(BSA)-Pb2+荧光探针测定胰蛋白酶。实验发现,FITC-BSA探针在Pb2+和十二烷基苯磺酸钠(DBS)存在下,可以发出较强的荧光,此时体系处于"打开"状态。当在pH=7.8的Tris-HCl缓冲溶液中加入胰蛋白酶后,FITC-BSA-Pb2+发生荧光猝灭,探针被"关闭",并且胰蛋白酶的浓度在一定范围内与探针的荧光猝灭程度呈良好的线性关系。实验表明,胰蛋白酶浓度与体系荧光猝灭程度在2.4~24μg/mL间呈良好线性关系,相关系数r=0.9972,方法检出限(3σ/k)为0.80μg/mL。该方法应用于尿液中胰蛋白酶的检测,其相对标准偏差(RSD)≤3.0%,回收率范围为102.1%~106.0%。

异硫氰酸荧光素标记万古霉素的制备及其与细菌相互作用的荧光检测

以异硫氰酸荧光素(FITC)标记万古霉素(Vanco)制备了FITC-Vanco(FV),FV经高效液相制备色谱纯化后,进行了质谱结构鉴定。分别通过荧光分光光度计和流式细胞仪(FCM)测定不同浓度FV培养基中培养细菌细胞的荧光强度。结果显示,所制备的荧光探针对5种细菌有特异性结合,用荧光强度可表征细胞结合抗生素的数量,对细菌耐药机制研究和细菌对万古霉素作用敏感性的测试有应用价值。

异硫氰酸荧光素在荧光标记领域的应用

异硫氰酸荧光素是近年来在荧光标记技术领域应用最广泛的荧光标记物,借助于荧光显微镜、流式细胞仪、激光扫描共聚焦显微镜等荧光检测技术和仪器,可将其用于蛋白质、核酸、多糖、小分子药物及纳米粒、微球等靶向制剂的荧光标记及活性示踪.因此,阐述了近5 a来异硫氰酸荧光素在荧光标记领域的应用进展,并对其研究趋势和应用前景进行展望.

扁豆碳量子点/异硫氰酸荧光素比率荧光探针测定氯诺昔康的研究

以天然生物质扁豆为唯一碳源,一步水热法合成了荧光性能优良、水溶性好的扁豆CQDs(HBCQDs)。在pH 5.80的HAc-NaAc缓冲溶液中,该HB-CQDs可与异硫氰酸荧光素(FITC)复合,在λ_(ex)=326 nm单一波长激发下,HB-CQDs/FITC复合物于400 nm和510 nm处呈现两个独立的荧光峰。MnO^(-)_(4)的加入可使该两处的荧光信号发生明显猝灭,信号“关闭”;加入氯诺昔康(LNXC)后,510 nm波长处的信号重新“开启”,荧光恢复;而400 nm处的荧光强度维持不变,由此构建了基于HB-CQDs/FITC双发射比率荧光探针测定LNXC的新方法。实验探讨了MnO^(-)_(4)对HB-CQDs/FITC探针的荧光猝灭机理。对体系分析特性进行了优化,LNXC在1.0×10^(-7)~1.0×10^(-5) mol/L浓度范围内与探针HB-CQDs/FITC于510 nm和400 nm两处的荧光强度比值(I_(510 nm/400 nm))有良好的线性关系,检出限为9.0×10^(-8) mol/L(3σ/k)。此探针可用于实际样品中LNXC的测定。

一种新的荧光素类荧光探针的设计合成及其对血清中组氨酸的选择性标记

The synthesis of a novel long-wavelength fluorescent probe, 3-epoxypropoxy fluorescein, and its properties for labeling of histidine are briefly described in this communication. The probe is highly selective for histidine, and other amino acids with a concentration of 1 000 times higher than that of histidine did not show noticeable interferences. As an application of this probe, fluorescent labeling of histidine in human serum was attempted and the obtained results were in agreement with those given by using histidine-nickel complex adsorptive voltammetry, both of which were within the normal range of the results reported in literatures.

用异硫氰酸荧光素标记葡萄球菌A蛋白检测抗核抗体

旨在建立一种血清抗核抗体检测的新方法.首先以异硫氰酸荧光素标记葡萄球菌A蛋白,将冰冻于燥的葡葡球菌A蛋白溶解于缓冲液中,4℃磁力搅拌下逐滴加入异硫氰酸荧光素,并持续搅拌24h,然后SepheadexG25柱层析一次.得到异硫氰酸荧光素标记葡萄球菌A蛋白试剂.

荧光素标记JH12．6探针进行的人DNA指纹图分析

采用荧光素标记和鲁米诺化学发光技术，建立了ＤＮＡ指纹图的分析方法。用该方法标记ＪＨ１２．６探针获得了清晰易读、分辨率高的人ＤＮＡ指纹图。经对云南省７８名无关个体进行ＤＮＡ指纹图分析，计算出无关个体的相关机率为７．４×１０（－１１），平均等位基因频率为０．０９。比较同位素（３２）Ｐ标记方法表明，用荧光素标记ＪＨ１２．６探针进行人ＤＮＡ指纹图分析，具有简便、快速、安全、经济的特点，可在法医学鉴定及其它领域里推广应用。

利用荧光素异硫氰酸酯检测季铵盐阳离子表面活性剂的方法

使用荧光素异硫氰酸酯(FITC)实现了对季铵盐阳离子表面活性剂(QAS)在水溶液中临界胶束浓度(CMC)的准确测量及其在CMC以下的浓度定量。用该法测得十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)在水中的CMC分别为12～13mmol·L-1和0.70～0.96mmol·L-1,与电导率法、表面张力法和芘荧光法的检测值相近。对DTAB和CTAB的检测下限分别是0.11mmol·L-1和1.7μmol·L-1,定量范围分别为0.11～9.73mmol·L-1(0.034～3.0g·L-1)和1.7μmol·L-1～0.27mmol·L-1(6.2×10-4～0.1g·L-1)。结果表明,使用FITC荧光探针检测QAS具有安全、简便、灵敏度和准确度高的优点。

异硫氰酸荧光素-溶菌酶的制备及晶体生长预研究

迄今尚未有适用于光源为488nm激光扫描共聚焦显微镜研究用的溶菌酶.为此,用异硫氰酸荧光素作为探针标记了溶菌酶,测定了溶菌酶标记物的紫外-可见吸收光谱和荧光光谱,摸索了其晶体的生长条件.实验结果表明,在标记过程中异硫氰酸荧光素没有影响溶菌酶的生化性质,标记后的溶菌酶可用于激光扫描共聚焦显微镜进行后续研究.