异硫氰酸荧光素-葡聚糖眶后注射观察鼠视网膜血管的可行性研究

背景糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等视网膜血管性疾病的发病率逐年提高，客观有效地评价视网膜的血管情况是视网膜血管性疾病防治研究的关键。异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC—dextran）眶后注射法是评价C57BL／6J小鼠视网膜血管的新方法，但目前少有关于此方法是否适合于其他小鼠及大鼠研究的报道。目的评估用FITC—dextran眶后注射法观察实验常用鼠种视网膜血管的可行性，为相关的实验研究提供参考依据。方法选择SPF级C57BL／6J小鼠、昆明小鼠、SD大鼠、Wistar大鼠各12只，均分为实验组和对照组各6只。实验组动物右眼眶后注射9ml／kgFITC—dextran溶液，对照组右眼眶后注射等体积PBS溶液。注射10S后大鼠以过量麻醉法处死，小鼠以颈椎脱臼法处死，摘取双侧眼球，荧光显微镜下行双侧眼球后组织以及视网膜铺片检查。结果C57BL／6J小鼠、昆明小鼠实验组双眼均可以观察到FITC—dextran绿色荧光标识的视网膜血管，但对照组各眼均观察不到视网膜血管形态；SD大鼠、Wistar大鼠实验组及对照组受检眼在荧光显微镜下均未观察到FITC—dextran标识的视网膜血管。小鼠、大鼠实验组右眼均可见由FITC—dextran浸染的绿色球后组织，而左眼球后组织均未见荧光。结论FITC—dextran眶后注射法适合于观察小鼠的视网膜血管，不适于观察大鼠的视网膜血管。

耳后注射异硫氰酸荧光素标记葡聚糖的可能转运途径

目的探讨耳后注射异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)进入内耳的可能途径。方法以异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(分子量为3 000~5 000,20μl)为示踪剂,将200只出生24h内的昆明乳鼠随机分为耳后对照组[5mg/ml的葡聚糖(Dextran)20μl耳后注射]、耳后实验组(5mg/ml的FITC-Dextran 20μl耳后注射)、肌注对照组(5mg/ml的葡聚糖20μl肌肉注射)、肌注实验组(5mg/ml FITC-Dextran 20μl肌肉注射),每组50只;于给药后0min、5min、15min、30min、1h、3h、5h、7h、12h、24h处死动物,取其头颅做冰冻切片,应用激光共聚焦成像技术观察分析荧光示踪剂在乙状窦、内淋巴囊及耳蜗的分布及强度变化,以实验组与相应对照组荧光强度比值为强度值。结果肌注实验组乙状窦在给药后3h、内淋巴囊及耳蜗在给药后12h可检测到荧光强度轻度增高,其余各部位各时间点均未检测出明显荧光增强。耳后实验组耳后注射示踪剂后,乙状窦、内淋巴囊分别在给药后即刻、耳蜗在给药后30min可观察到荧光信号,随后荧光强度随时间延长依次升高,乙状窦、内淋巴囊、耳蜗的荧光强度达峰值时间分别为给药后5~15、30、60min,到12小时强度均再次小幅度升高。结论药物在耳后注射较肌肉注射更易于进入内淋巴液,可能径路为:示踪剂首先通过局部循环和局部渗透至乙状窦内富集,随后通过乙状窦与内淋巴囊间的脉络关系进入内淋巴液,最终逆内淋巴浓度梯度作用于内耳。

荧光素钠法测定β-葡聚糖含量研究

该试验通过研究荧光素钠与β-葡聚糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖等结合后荧光最大激发和发射波长发生变化，探索在有多种糖存在溶液中鉴别测定β-葡聚糖含量一种方法。结果显示，荧光素钠与β-葡聚糖混合前后紫外吸收分别为436．5nm和510．6mn，荧光素钠与β-葡聚糖结合后荧光最大激发和发射波长发生变化，激发和发射波长分别由487．3nm，517．6nm变为475．9nm和510．6nm．而与其它糖类，如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等结合后荧光性质不发生变化，荧光素钠与β-葡聚糖结合适合比例为6：1（百分含量比）、线性浓度范围在0．1～0．25μg／mL，回归方程为V=-2．014×＋1．0757，回归系数为R2=0．9978，用此工作曲线测定青稞粗品中β-葡聚糖粗提物纯度为95％（标；住酶法测定结果为96％）。

改进荧光法测定β-葡聚糖含量研究

本研究尝试了用 930荧光光度计为测定仪器 ,利用改进荧光法快速测定 β -葡聚糖含量 ,并对该测定方法的测定条件、准确度及精密度进行了深入研究 ,证明该测定方法是一种简单。

酿酒酵母β-葡聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响

为了探索β-葡聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞(ruminal epithelial cells,RECs)β-防御素-1(sheepβ-defensin-1,SBD-1)表达的影响。本研究首先建立绵羊RECs培养体系作为体外试验模型,用不同浓度(0、5、10、20、50和100μg·mL^(-1))的β-葡聚糖刺激RECs 8h后,利用qPCR和ELISA方法检测RECs中SBD-1的表达变化,选出诱导SBD-1表达最高的β-葡聚糖浓度。然后用β-葡聚糖的最佳刺激浓度对RECs分别刺激0、2、4、8、12和24h,同样利用qPCR和ELISA方法对RECs SBD-1的表达变化进行检测,从而筛选出诱导SBD-1表达最高的刺激时间。qPCR和ELISA结果显示,β-葡聚糖(5～100μg·mL^(-1))刺激RECs 8h后,SBD-1mRNA和蛋白的表达随着β-葡聚糖浓度的升高均呈现先升高后降低趋势,且当β-葡聚糖浓度为10μg·mL^(-1)时SBD-1mRNA和蛋白的表达量极显著高于对照组(P<0.01)。当用10μg·mL^(-1)的β-葡聚糖刺激RECs 0～24h后,qPCR结果显示,10μg·mL^(-1)的β-葡聚糖刺激RECs 2h时SBD-1mRNA的表达量最高(P<0.01),之后呈下降趋势,而ELISA结果显示,在β-葡聚糖浓度为10μg·mL^(-1)刺激RECs 4h后SBD-1蛋白分泌水平达到最高(P<0.01)。MTT测定结果显示,100μg·mL^(-1)β-葡聚糖会对绵羊RECs活力产生显著的影响(P<0.05)。本研究结果表明,β-葡聚糖能够提高绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,且用浓度为10μg·mL^(-1)的β-葡聚糖分别刺激RECs 2和4h后SBD-1的mRNA和蛋白表达达到最高。

桑黄中β-葡聚糖快速荧光光谱检测方法研究

建立了以海带多糖为标准样品,与苯胺蓝特异结合,荧光光谱法测定桑黄多糖中β-D-葡聚糖含量的准确、经济、快速的检测方法.对96孔板、标准样品、回收率、精密度及稳定性进行考察.结果表明：在激发波长为398 nm,发射波长为503 nm测试条件下,海带多糖质量浓度在0～15μg/mL范围内与荧光强度呈现良好的线性关系,桑黄粗多糖中β-D-葡聚糖含量测定结果为19.86％,平均回收率为98.39％.并对市售酵母葡聚糖粉中β-葡聚糖含量进行了测定,质量分数为82.29％,与产品标识含量相符.

燕麦麸中β-葡聚糖的提取及荧光法测定

以燕麦麸为原料,分别进行灭酶和不灭酶处理,通过水提法提取β-葡聚糖,并采用荧光光度法测定原料中β-葡聚糖含量。结果表明,Calcofluor的荧光强度与β-葡聚糖含量呈良好的直线关系(r=0.9977),原料经两种工艺处理后,β-葡聚糖含量分别为8.54%,7.92%

葡甘聚糖对大鼠口服荧光素钠吸收的影响

目的 :研究葡甘聚糖对大鼠口服荧光素钠药动学的影响。方法 :利用荧光素钠作为示踪药物 ,HPLC反相柱色谱分离原药 ,荧光高效液相法定量分析血清荧光素钠含量。结果 :大鼠灌胃荧光素钠溶液T12 α为 (5 .0± 0 .9)min ,T12 β为 (43± 9)min ,Tmax为 (7.5± 0 )min ,Cmax为 (192± 7)mg·L- 1,AUC为 (83± 17) μg·h- 1·L- 1。以 0 .4 %或 0 .8%的葡甘聚糖为制剂时T12 α分别为 (2 0± 6 )min和 (38± 13)min ,T12 β为 (6± 3)h和 (2 5± 12 )h ,Tmax为(19± 9)min和 (40± 16 )min ,Cmax为 (92 .3± 2 .0 )mg·L- 1和 (5 2± 3)mg·L- 1,AUC为 (6 14± 10 5 ) μg·h- 1·L- 1和 (30 1± 2 2 ) μg·h- 1·L- 1。结论 :葡甘聚糖能明显改变口服药物的药动学参数 ,如降低血药峰值浓度 ,提高AUC。

巯基葡聚糖凝胶分离富集-萃取-氢化物发生原子荧光法测定染发剂中的砷、铅

目的：建立染发剂中砷、铅在盐酸介质下，氢化物发生原子荧光法测定的方法。方法：采用HNO3-H2O2消解样品，以硫基葡聚糖凝胶分离富集Pb^2＋，以2．0mol／LHCl溶液洗脱，在样品溶液中，以双-（α-乙基已基）-二硫代磷酸癸烷溶液萃取As，然后以NH4OH和（NH4）2SO4反萃取后，酸性介质中，在硫脲和碘化钾、革酸和铁氰化钾存在下，氢化物发生原子荧光法测定其含量。结果：方法的检出限为0．40、0．35μg／L；线性范围为0—100μg／L，0—80μg／L；加标回收率为96．0％-105．0％。结论：本法由于有效地分离了干扰物质，所以具有灵敏度高、结果准确可靠的优点，应用于样品的检测并与其它方法相比较，结果满意。

荧光法研究魔芋葡甘聚糖(KGM)水溶液的溶胶-凝胶转变机理

魔芋葡甘聚糖(KGM)是一种中性多糖,长期以来用于食品中的增稠剂和胶凝剂。由于KGM的使用经常涉及胶凝过程,因此KGM的胶凝机理显得尤为重要,特别是在稀水溶液中。本研究以KGM稀释水溶液为催化剂,在碱性条件下制备KGM水凝胶,并通过傅立叶变换红外光谱(FTIR)和广角X射线衍射(WAXRD)对KGM水凝胶的化学结构进行了表征。通过稳态荧光(SSF)法研究稀水溶液中KGM的溶胶-凝胶转变机理和脱乙酰动力学。观察KGM溶液的浓度、pH值和温度对脱乙酰过程的影响。结果表明,KGM链的去乙酰化在KGM凝胶化的早期阶段起着重要作用,由于KGM超分子在脱乙酰基过程中的氢键位点组合而形成的疏水核心,使得KGM水凝胶中堆积的分子链比纯KGM中的分子链更规则。基于第一反应动力学模型,计算得到脱乙酰基的活化能(Ea)为83.1 kJ/mol。本文旨在研究天然多糖溶胶-凝胶的相变和在稀水溶液中的凝胶化机理,尤其是在早期凝胶化阶段。

米诺环素治疗大鼠肺部白念珠菌感染中血浆β-葡聚糖变化的探讨

目的探讨肺部白念珠菌感染的大鼠通过米诺环素治疗前后血浆β-葡聚糖的变化,评价米诺环素的抗念珠菌活性。方法成年SD大鼠60只分为3大组(健康组、感染未治疗组、治疗组),其中治疗组又分为口腔给药一周、鼻腔给药一周、口腔给药两周和鼻腔给药两周4组,通过气管插管滴入白念珠菌混悬液,建立大鼠肺部白念珠菌感染模型,再进行米诺环素治疗,检测大鼠感染前、治疗前和治疗后的血浆1,3-β-D-葡聚糖。统计方法采用T检验。结果口腔和鼻腔给药一周后与阈值比较P<0.01有显著差异,经两种途径治疗两周后与阈值比较P>0.05,没有差异。鼻腔给药一周和给药两周P<0.01有显著差异,与感染组比较:鼻腔给药一周P=0.081,没有差异,给药两周P=0.000,有显著差异,口腔给药一周P=0.446,没有差异,给药两周P=0.001,有显著差异;口腔给药一周与两周比较P=0.002有显著差异。鼻腔和口腔给药一周P=0.314没有差异,与感染组比较P=0.351,没有差异;鼻腔和口腔给药两周P=0.680没有差异,与感染组比较P=0.007有显著差异。结论米诺环素对大鼠肺部白念珠菌感染有抗菌活性,且疗效与治疗途径和时间有关。

真菌荧光染色联合呼吸道标本培养与鉴定和血清1,3-β-D葡聚糖检测诊断侵袭性肺部真菌感染的应用价值

目的评估实验室常用三种真菌检测方法对侵袭性肺部真菌感染(IPFI)的诊断效能,为IPFI的诊疗提供依据。方法回顾性分析2020年1月至2020年12月昆明医科大学第一附属医院呼吸内科收治的具有高危IPFI因素的住院患者301例,其中临床出院诊断为侵袭性肺部真菌感染患者83例作为观察组,肺部细菌感染患者218例作为对照组,分别进行真菌荧光染色、血清1,3-β-D葡聚糖、呼吸道标本培养与鉴定联合检测,评估联合三种检测方法对IPFI的诊断效能。结果真菌荧光染色检测、血清1,3-β-D葡聚糖、呼吸道标本培养与鉴定检测对IPFI的检出率分别为36.9%(111/301)、9.6%(29/301)、18.6%(56/301)。在观察组中三种方法的阳性率分别为80.7%(67/83),15.7%(13/83),45.8%(38/83),高于对照组的20.1%(44/218),7.3%(16/218),8.3%(18/218),差异均有统计学意义(P<0.05)。真菌荧光染色检测灵敏度、特异度、曲线下面积(AUC)分别为80.7%、79.8%、0.803;血清1,3-β-D葡聚糖检测分别为15.7%、92.7%、0.542;呼吸道标本培养与鉴定检测分别为45.8%、91.7%、0.688;三项指标联合检测分别为86.7%、77.5%、0.855,优于任何一类单项检测效能。结论真菌荧光染色法在IPFI检测中更具优势,是一种快速可靠,敏感性高的IPFI的诊断方法;但三项指标联合检测对诊断IPFI的应用价值更显著,可以提高诊断效率。

燕麦及其制品β-葡聚糖含量测定方法比较

为了准确测定燕麦及其制品中β-葡聚糖的含量,筛选品质更为突出的燕麦品质提供实验依据,分析比较了测定β-葡聚糖的多种方法。分别用刚果红法、酶法和荧光法测定了国内11种燕麦的β-葡聚糖含量,并分析了3种方法之间的相关性。结果表明,3种测定方法所得结果不一致,但其之间具有较好的线性关系,刚果红法与酶法的相关系数为0.9921,刚果红法与荧光法之间的相关系数则为0.9837,而酶法与荧光法之间的相关系数则达0.9914。

利用活体成像技术研究海茸β-1,3/1,6-葡聚糖在小鼠体内的分布

以海茸β-1,3/1,6-葡聚糖(DAG)为研究对象,首先经还原胺化反应在DAG还原端引入功能氨基,再将其与N-羟基丁二酰亚胺(NHS)活化的荧光染料(Cy7)偶联,获得Cy7标记的DAG分子;利用小动物活体成像技术研究了DAG在小鼠体内的分布.结果表明,DAG在小鼠体内主要分布于肺、肝和肾,具有靶向小鼠肺部和通过肾排泄的特点.该方法简便、数据可靠,为多糖和寡糖的体内分布与代谢研究提供了参考.

钙对苹果果实过氧化物酶、β-1,3-葡聚糖合成酶和β-1,3-葡聚糖分解酶活性的影响

采用贮藏实验与果实薄片培养实验相结合的方法,研究了钙素对苹果果实β-1,3-葡聚糖合成酶、β-1,3-葡聚糖分解酶和过氧化物酶(POD)的活性及对丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明,与对照比较,幼果期喷钙显著降低了苹果苦痘病发病率, POD和β-1,3-葡聚糖合成酶的活性增加,β-1,3-葡聚糖分解酶活性和MDA含量降低;果实薄片培养中,与低钙处理比较,高钙处理POD和β-1,3-葡聚糖合成酶的活性增加,β-1,3-葡聚糖分解酶活性和MDA含量下降。说明苹果果实生理变化与钙素营养关系密切,果实钙营养不足导致氧自由基清除能力下降和细胞壁分解加快,是缺钙导致苹果果实生理失调的主要原因。

酿酒酵母甘露聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(S BD-1)表达的影响

为探究酿酒酵母菌细胞壁成分甘露聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞(RECs)β-防御素-1(SBD-1)表达的影响,本研究用不同浓度的甘露聚糖刺激RECs 8 h后,利用荧光定量PCR (qPCR)和ELISA方法分别检测RECsSBD-1 mRNA的转录水平和蛋白表达变化,确定甘露聚糖诱导SBD-1表达量最高的刺激浓度。然后用该浓度甘露聚糖对RECs进行不同时间的刺激,同样利用qPCR和ELISA方法对SBD-1 mRNA转录水平和蛋白的表达变化进行检测,确定甘露聚糖诱导SBD-1表达的最佳时间。qPCR和ELISA结果显示:不同浓度甘露聚糖刺激RECs8 h后,SBD-1 mRNA转录水平和蛋白的表达量均有所增加,但随着甘露聚糖浓度的增加,SBD-1表达量呈现先升高后降低的趋势,且当甘露聚糖浓度为50μg/mL时SBD-1表达量达到最大,并与对照组相比差异极显著(p<0.01)。当用50μg/mL的甘露聚糖分别刺激RECs不同时间后,SBD-1 mRNA转录水平和蛋白的表达量先是随着刺激时间的延长而呈上升趋势,刺激时间为4 h时SBD-1表达量达到峰值,且极显著高于对照组(p<0.01),之后呈下降趋势。结果表明甘露聚糖能够提高绵羊RECs SBD-1的表达,且甘露聚糖浓度为50μg/mL刺激RECs 4h时,SBD-1 mRNA转录水平和蛋白表达量达到最高。本研究为甘露聚糖在体内如何发挥先天性免疫提供了一种新解释,也为更好的开发利用甘露聚糖制剂提供实践指导。

巯基葡聚糖分离富集催化动力学荧光猝灭法测定痕量镉

痕量组分镉的测定对于工业、环境、健康有着重要的意义。研究了在pH=5.2邻苯二甲酸氢钾-NaOH介质中,痕量镉催化H2O2氧化3-（4′-氟苯基）-5-（2′-羧基苯偶氮）若丹宁,而荧光猝灭存在明显的催化作用,由此建立了动力学荧光法测定痕量镉的新方法。该体系的激发和发射波长分别为λex/λem=307nm/408nm,通过实验测定反应表观活化能为59.06kJ/mol;反应速率常数为0.101s-1;线性范围为0~10.0μg/L;检出限为3.9×10-7g/L。采用巯基葡聚糖凝胶分离富集,消除了共存离子的干扰,显著提高了方法的选择性和灵敏度。本方法应用于食品和人发中镉的测定获得满意的结果。

刚果红法与流动分析荧光法测定β-葡聚糖的对比

传统测定麦汁和啤酒中的β-葡聚糖含量采用刚果红法，此方法回收率偏低．使测定结果过低：在不同实验室、不同人员操作之间，重现性较差。本文介绍了流动分析荧光法检测β-葡聚糖，该方法重现性好，回收率高，使分析结果更加精确、可靠。

巯基葡聚糖凝胶分离富集催化荧光法测定痕量铜

在pH5.0邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠介质中,痕量铜具有明显催化高碘酸钾氧化3-间氯基苯基-5-(4′-甲基-2′-磺酸酸基苯偶氮)若丹宁的作用,由此建立了催化动力学荧光法测定痕量铜的新方法。该体系的激发和发射波长(λex和λem)分别为310 nm和404 nm。通过实验测定反应表观活化能为165.06 kJ/mol,反应速率常数为0.47/s,线性范围为0.45～12.0μg/L,检出限为1.5×10-7g/L。采用巯基葡聚糖凝胶分离富集,消除了共存离子的干扰,显著提高了方法的选择性和灵敏度。该方法应用于喷泉水、人工湖水和管网水中铜的测定,相对标准偏差小于4.5%,测定结果与原子吸收光谱法测得的结果相符。