非洲爪蟾肝脏肿瘤cDNA表达文库异种同源抗原的筛选

目的:通过重组cDNA文库的血清学筛选(SEREX)技术获得来自非洲爪蟾(Xenopus laevis)肝脏肿瘤文库中具有潜在治疗价值的异种同源抗原的cDNA序列。方法:用人肝癌细胞株SMMC-7721免疫家兔后收集的抗血清作为筛选血清,采用SEREX技术筛选Xenopuslaevis肝脏肿瘤cDNA表达文库。结果:通过两轮筛选获得19个阳性克隆,通过DNA序列测定和分子生物学技术确定这19个克隆编码16个蛋白。其中Transgelin 2、RASguanylreleasing protein1和Chromobox protein homolog6可能与肝细胞肝癌有关。结论:用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了SEREX技术的应用范围,鉴定Transgelin2、RASguanyl releasing protein1和Chromobox protein homolog6可能为异种同源抗原。

大鼠睾丸异种抗原的血清学筛选

目的 通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法 将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果 通过两轮筛选获得 10个阳性克隆。通过生物信息学分析认为这 10个阳性单克隆 c DNA序列编码 7种不同的蛋白 ,其中 OV- 2、OV- 4为肿瘤相关序列 ,OV- 6、OV- 7为编码未知蛋白的序列。结论 用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了 SEREX技术的应用范围 ,是一种行之有效的方法。

异种EGFR口服DNA疫苗抑制小鼠Lewis肺癌的生长

目的:观察表达异种鸡EGFR(chicren EGFR,cEGFR)与IgGγFc融合基因的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗对高表达EGFR的肺癌Lewis细胞小鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:将pVAX1-cEGFR-γFc质粒转化减毒沙门菌SL7207,重组菌SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc体外感染小鼠腹腔巨噬细胞,免疫荧光法检测cEGFR-γFc融合蛋白的表达。SL7207/pVAX1-cEG-FR-γFc重组菌口服免疫小鼠3次后接种Lewis细胞,Western blotting检测小鼠体内融合蛋白的表达,ELISA法检测免疫小鼠血清抗EGFR抗体的水平。接种Lewis细胞14 d后处死小鼠,瘤体称质量,检测SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc疫苗对Lewis肺癌生长的抑制作用,测定荷瘤小鼠的生存时间。结果:成功构建减毒沙门菌疫苗SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc,SL7207/pVAX1-cEG-FR-γFc感染后,在小鼠后体内外都能检测到cEGFR-γFc融合蛋白的表达;SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc疫苗口服免疫后小鼠能够产生高水平的抗EGFR抗体,口服SL7207/pVAX1-cEGFR-γFc疫苗能够有效抑制小鼠Lewis移植瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存时间。结论:异种EGFR口服DNA疫苗能够有效地抑制高表达EGFR肺癌的生长,是EGFR分子靶向治疗的一条新途径。