黄芩苷对CA46细胞裸鼠异种移植瘤的作用及机制

目的:研究黄芩苷抗CA46细胞裸鼠异种移植瘤的作用并探讨其机制。方法:构建CA46细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为5组:阴性对照组、15 mg/kg黄芩苷组、30 mg/kg黄芩苷组、60 mg/kg黄芩苷组和4 mg/kg依托泊甙(VP-16)阳性对照组。采用腹腔注射方式给药,12 d后处死部分裸鼠,对剥取的瘤块称重计算抑瘤率,并进行透射电镜、病理学和Western blotting检测;观察各组未处死的裸鼠直至全部死亡,研究黄芩苷对荷瘤裸鼠生存时间的影响。结果:黄芩苷明显抑制了CA46细胞裸鼠异种移植瘤的生长,引起肿瘤细胞的凋亡、坏死以及p-Akt、NF-κB、mTOR和p-mTOR蛋白表达的下调;随着黄芩苷剂量的增加,黄芩苷治疗组荷瘤裸鼠的生存时间明显延长。结论:黄芩苷可抑制CA46细胞裸鼠异种移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞的凋亡,并延长荷瘤裸鼠的生存时间,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

转化医学视角下头颈癌人源性肿瘤异种移植瘤模型队列的研究愿景

头颈癌位居全球第七大恶性肿瘤,现存多种治疗策略无法满足大部分患者的临床获益需求。同时,缺乏分子分型指导的头颈癌治疗策略也严重阻碍个性化疗法的发展。近年来,以临床前模型为纽带,加快临床问题与基础成果双向转化的新思路逐渐成为业界共识。PDX模型作为肿瘤基础研究和临床转化的桥梁,能够精准复制肿瘤遗传特征和肿瘤进化,在阐析肿瘤发生发展机制中显示出强大的生命力。借助PDX模型组成的治疗队列,彰显出小鼠为患者进行药物筛选和生物标志物分析的独特优势,这种理想的临床前模型能够在符合伦理范畴内最大可能的为患者寻找潜在的治疗策略。

异种移植瘤激活裸小鼠C型病毒的电镜研究

异种移植瘤激活裸小鼠Ｃ型病毒的电镜研究戴志强张素胤许建一俞月桂袁辛菊（中国科学院上海药物研究所，上海２０００３１）裸小鼠内源性Ｃ型病毒的基因组整合於宿主的染色体中，并随细胞分裂由亲代细胞传及子代细胞。通常情况下Ｃ型病毒的自然显现的现象极难见到。然而，...

E-钙粘附素在人胃癌裸鼠异种移植瘤中的表达

目的探讨E-钙粘附素(E-cadherin,E-CD)在胃癌裸鼠肝、肺、胰腺三种不同移植瘤组织中的表达;同时观察胃癌GASL细胞系在体外肝、肺、胰腺不同组织上的粘附情况。方法①分别将人胃腺癌细胞株GASL在体外与裸小鼠肝、肺、胰腺三种不同组织进行共同孵育24 h,观察其在各种组织上的粘附情况;②利用免疫组织化学技术S-P法检测肝、肺、胰腺移植瘤组织中癌细胞E-CD的表达。结果肝、肺、胰腺移植瘤组织中癌细胞E-CD的阳性表达率分别为(23.8±4.9)%、0%、和(21.7±6.5)%,肝、胰腺与肺组织移植瘤比较,差异有统计学意义(P<0.01),且E-CD阳性细胞分布在肿瘤边缘与周围组织或间质相连处。同时体外粘附实验也证明癌细胞对肝组织的粘附性高于肺和胰腺组织(P<0.05)。结论①E-CD的表达下调与胃癌侵袭和转移密切相关;②不同组织微环境对肿瘤细胞的侵袭表型具有决定性影响。

特异乳酸杆菌对人直肠癌裸鼠异种移植瘤细胞增殖的影响

目的 探讨特异乳酸杆菌（Lb-f）对人直肠癌裸鼠异种移植瘤模型癌细胞增殖的抑制作用。方法 采用小鼠背部皮下接种人直肠癌系（Colo320）细胞的方法建立裸鼠异种移植瘤模型,并随机分为五组,Ⅰ组作为模型对照组;Ⅱ-Ⅳ组分别以180、360、720 mg/kg的Lb-f灌胃,1次/d,灌胃2周。Ⅴ组腹腔注射化疗剂环磷酰胺100 mg/kg,1次/d,共计2周。利用MTT比色法和台盼蓝计数法测定各组的细胞增殖相对抑制率及生长抑制率,并取肿瘤组织,计算瘤重抑制率以及肿瘤生长抑制率,采用ELISA试剂盒测定Bax、Bcl-2、Caspase-3含量。结果 随着干预时间的延长,Colo 320瘤块体积有明显变化（P〈0.01）,且在开始的48 h内,体积增大不明显,48 h之后,体积增大情况较为明显。体外实验结果显示,各组的细胞增殖相对抑制率和生长抑制率比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;空白对照组和溶媒对照组的细胞增殖相对抑制率和生长抑制率比较,差异无统计学意义;其他组均较前两组高,且阳性药对照组为最高,其次是Lb-f 90组、Lb-f 60组、Lb-f 30组,各组之间的差异均有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。在体实验结果显示,各组的细胞瘤重抑制率、肿瘤生长抑制率、肿瘤组织Bax含量、Bcl-2含量、Bcl-2/Bax、Caspase-3比较,差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）;细胞瘤重抑制率、肿瘤生长抑制率、肿瘤组织Bax含量按顺序由低到高分别是Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组,Bcl-2含量、Bcl-2/Bax、Caspase-3按顺序由低到高分别是Ⅴ组、Ⅳ组、Ⅲ组、Ⅱ组、Ⅰ组。结论 Lb-f可调节Bcl-2/Bax平衡,从而起到抑制肿瘤生长的作用,且呈剂量依赖性。

基于健脾活血法探讨参菝抗瘤液对人胃癌SGC-7901裸鼠异种移植瘤的抑制作用研究

目的观察参菝抗瘤液对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植瘤的生长的抑制作用以及其作用强方法建立人胃癌SGC-7901裸鼠异种移植肿瘤模型,分为肿瘤模型对照组,氟尿嘧啶组,参菝抗瘤液低、中、高剂量组,分别灌服生理盐水0.2 mL/10 g,氟尿嘧啶1 mg/(kg·d),参菝抗瘤液6.25、12.5、25 mg/(kg·d),给药结果参菝抗瘤液低、中、高剂量组对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠异种移植肿瘤的相对肿瘤增殖率分别为63.36%、52.67%、35.21%,与氟尿嘧啶组的37.73%比较,低、中剂量组均高于氟尿嘧啶组(P均<0.05);参菝抗瘤液低、中、高剂量组抑瘤率分别为37.5%、50.2%、65.5%,与氟尿嘧啶组抑瘤率63.8%比较,低、中剂量组均低于氟尿嘧啶组(P均<0.05)。植肿瘤有抑制作用,并且随着剂量的增加抑制作用亦增加。

肝癌患者来源异种移植瘤模型的建立及药物敏感性研究

目的通过建立肝癌患者来源的异种移植瘤模型(PDX)探究肝癌索拉菲尼敏感性相关的长链非编码RNA(lncRNA)。方法选取上海市第一人民医院2021年5月至2022年10月的17例肝癌标本建立PDX模型。PDX模型传代14 d后通过随机数表法分为对照组与索拉菲尼给药组。给药21 d,观察7 d后收取肿瘤组织,给药期间记录小鼠体重。根据公式:肿瘤生长抑制(TGI)指数=ΔT/ΔC,计算PDX肿瘤组织TGI指数并评价药物敏感性,通过lncRNA测序筛选肝内胆管癌(ICC)索拉菲尼敏感与耐药的差异lncRNA。在人ICC细胞系HuCCT1中转染小干扰RNA(siRNA)降低lncRNA SCDAL的表达,根据siRNA序列分组为ctr、si-1、si-2和si-3。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,根据给药浓度分组为0μmol/L(0.1%二甲基亚砜)、4μmol/L、10μmol/L。组间比较采用t检验,多组间两两比较采用单因素方差分析,Turkey事后检验确定组间差异。结果肝细胞肝癌(HCC)及ICC PDX模型鼠索拉非尼给药组与对照组体重差异无统计学意义[HCC:(24.72±2.21)g比(25.80±2.30)g,t=0.486,P>0.05;ICC:(24.87±4.30)g比(23.11±2.78)g,t=0.478,P>0.05];lncRNA SCDAL在PDX耐药样本中表达显著低于敏感组(|log2FoldChange|=Inf,P<0.05);Si-3敲减组lncRNA SCDAL相对表达量显著低于对照组(0.586±0.080比1.000±0.234,P<0.05)。索拉菲尼给药条件下敲减组细胞吸光度值显著高于对照组(4μmol/L:1.11±0.06比0.86±0.07,t=4.635,P<0.01;10μmol/L:0.52±0.03比0.42±0.02,t=4.389,P<0.05)。结论通过构建肝癌患者PDX模型并测序验证发现lncRNA SCDAL表达与ICC索拉菲尼敏感性呈正相关。

不同组织微环境中人胃癌异种移植瘤侵袭性及基质金属蛋白酶谱表达的差异

目的 探讨组织微环境对癌细胞侵袭性影响机制中基质金属蛋白酶表达的意义。方法 取人胃腺癌组织移植于裸小鼠皮下 ,成瘤后进行皮下和腹腔内传代接种 ,形态学观察 2处异种移植瘤侵袭性的不同并用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶法检测基质金属蛋白酶 (MMP) 2、MMP 7、MMP 9、MMP 13、TM1 MMP、TM2 MMP、TM3 MMP 7种MMPs在瘤组织中的表达。结果 人胃癌裸小鼠皮下异种移植瘤呈膨胀性生长 ,侵袭性不明显 ;除MMP 7外 ,其他 6种MMPs在皮下移植瘤细胞及间质中均无表达。腹腔内移植瘤呈侵袭性生长、纤维间质增多 ,多种MMPs均在侵袭前沿的肿瘤细胞及间质中表达。同一瘤株来源的人胃癌细胞在裸小鼠不同组织环境中所呈现的侵袭性及MMPs表达差异均有显著性。结论 (1)肿瘤细胞与相邻的间质细胞之间存在相互诱导作用 ,组织环境对肿瘤侵袭表型可有决定性的影响。 (2 )MMPs的表达与肿瘤细胞生长方式及侵袭性有密切联系 ;

人粒细胞白血病裸鼠异种移植瘤的建立和单克隆抗体－柔红霉素偶合物导向治疗的研究

我们报道人粒细胞白血病（ＨＬ６０）裸鼠异种移植瘤的建立及其生物学特性，该移植瘤已在裸鼠间连续传代２０余代，成功率达１００％。移植瘤瘤细胞表面抗原为稳定的粒细胞标记。利用该模型进行了单克隆抗体柔红霉素偶合物的导向治疗，结果显示对肿瘤生长有明显抑制作用。为在体内条件下对人类白血病进行研究和实验性治疗提供了良好的工具。

AKR1B10抑制剂增强索拉非尼对小鼠肝癌异种移植瘤的抑制作用

目的探讨AKR1B10抑制剂联合索拉非尼对小鼠肝癌异种移植瘤生长的抑制作用。方法建立裸鼠HepG2肝癌细胞异种移植瘤模型,随机分为4组:对照组、依帕司他单药组、索拉非尼单药组、联合治疗组;比较各组瘤体体积、瘤体质量、给病组和对照组瘤体平均质量比值、裸鼠体质量变化情况评价疗效,免疫组织化学法检测瘤体组织中Ki-67的表达评估肿瘤细胞增殖情况。多组间比较采用单因素方差分析,两样本均数用t检验,多样本率用χ^2检验。结果治疗前后移植瘤体积差值在对照组、依帕司他单药、索拉非尼单药、联合治疗组分别为(238.940±39.813)mm^3、(124.991±84.670)mm^3、(-26.111±11.518)mm^3、(-54.072±17.673)mm^3,F=37.048,P<0.001;瘤体质量分别为(0.273±0.140)g、(0.158±0.078)g、(0.079±0.054)g、(0.045±0.024)g,F=16.594,P<0.001,差异均有统计学意义。给药组与对照组肿瘤平均质量比值分别为100%、57.9%、28.9%、16.5%。Ki-67阳性率分别为23.295%±6.218%、13.503%±3.392%、7.325%±2.257%、4.664%±1.189%,(χ^2=822.203,P<0.001),差异有统计学意义。依帕司他单药组治疗前后瘤体体积差值(t=-3.579,P=0.002)、Ki-67阳性率比较(t=-10.003,P<0.001)明显低于对照组,差异均有统计学意义。联合治疗组治疗前后瘤体体积差值(t=2.056,P=0.025)、瘤体质量(t=2.101,P=0.043)、Ki-67阳性率(t=-2.850,P=0.005)明显低于索拉非尼单药组,差异均有统计学意义。给药组与对照组相比,裸鼠体质量均有一定下降,但依帕司他组与对照组(t=-1.599,P=0.262)、联合治疗与索拉非尼组(t=-0.051,P=0.96)相比,体质量下降均无统计学意义。结论AKR1B10抑制剂可增强索拉非尼对肝癌异种移植瘤的抑制作用。

人源结直肠癌异种移植瘤模型的建立

目的优化人源结直肠癌异种移植瘤模型的建立。方法选取86例未经放化疗的结直肠癌患者新鲜肿瘤组织标本，以18 G留置针穿刺后扩大针眼，埋种肿瘤后夹闭免缝的方式移植于免疫缺陷小鼠后颈部皮下，定期监测移植瘤大小、成瘤时间，探索最佳传代时机，组织染色对比各代肿瘤组织形态，免疫组织化学法检测各代肿瘤相关蛋白表达。结果每例初始肿瘤建模时间为（16.5±2.8） min，原代移植成功率为79%，传代移植成功率为100%。原代移植成功率与肿瘤大体分型、分化程度、临床分期无关，原代肿瘤与子代肿瘤的形态结构、肿瘤蛋白表达相似。结论本研究优化了人源结直肠癌异种移植瘤模型的建立，有效简化建模流程，缩短建模时间，建模成功率高，在肿瘤形态学和组织学特征上保持稳定。

肿瘤相关成纤维细胞促进原代胰腺癌细胞生长及人源性异种移植瘤模型体内成瘤

目的优化人原代胰腺导管癌(PDAC)细胞及肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)的分离及培养方法,验证CAFs对原代PDAC细胞的体外生长以及其对高度免疫缺陷模型NOG小鼠体内成瘤的影响,以探索人源性异种移植瘤(PDX)模型构建的新方法。方法首先原代培养手术切除的PDAC组织。以原代PDAC细胞单独培养为对照,观察CAFs和原代PDAC细胞共培养对PDAC细胞传代生长活性的影响。最后在NOG小鼠肩胛部注射混合培养的原代PDAC细胞和CAFs,观察PDX模型建模情况。结果原代PDAC细胞在体外单独培养传代少,均在5代及以内停止生长;与CAFs共培养可促进原代PDAC细胞生长活性,可稳定传至10代以上。NOG小鼠体内注射混合细胞(原代PDAC细胞+CAFs)建模2~3周即可形成肿瘤,而注射CAFs无肿瘤形成。混合细胞法建模有13例(92.9%)成瘤,单一细胞法有9例(64.3%)成瘤,可能因为样本量少,二者成瘤率比较差异无统计学意义(P=0.167);并且肿瘤细胞注射后2、4、6、8周时混合细胞法建模的肿瘤体积均明显大于对应观察时间点单一细胞法建模的肿瘤体积(P<0.01)。结论CAFs对原代PDAC细胞生长传代具有促进作用,原代PDAC细胞与CAFs共培养法可显著提高PDAC原代培养稳定传代,原代PDAC细胞与CAFs混合培养的细胞注射可提高NOG小鼠PDX建模成功率。

YH-16对宫颈癌Hela细胞及其裸鼠皮下移植瘤作用研究

目的:初步探讨YH-16(重组内皮抑素)对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤生长抑制作用及作用机制。方法:用MTT法检测YH-16对Hela细胞生长抑制作用;用透射电镜观察YH-16处理Hela细胞后的凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;将Hela细胞移植至裸鼠皮下成瘤,观察不同浓度YH-16(0mg/kg、0.4mg/kg、0.75mg/kg和1.5mg/kg)对荷瘤鼠皮下移植瘤生长的影响;TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡;免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中肿瘤微血管密度(MVD)。结果:YH-16具有体外抑制Hela细胞增殖的作用(P<0.01);能诱导Hela细胞凋亡;YH-16能有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05);YH-1615mg/kg组的肿瘤MVD计数较对照组和其它治疗组明显降低(P<0.05)。结论:YH-16具有抑制宫颈癌Hela细胞及其皮下移植瘤生长的作用。

CYCLIND1/CDK4在洛伐他汀抑制裸鼠乳腺癌移植瘤增殖中的作用

目的以裸鼠乳腺癌异种移植瘤动物模型为研究对象,检测了洛伐他订(LOV)对高表达BRCA1基因乳腺癌异种移植瘤生长能力的影响,并初步探讨了其作用的分子机制。方法将PCDNA3-BETA-HA-HSBRCA1质粒进行扩增、鉴定后,运用脂质体转染MCF-7乳腺癌细胞,经RT-PCR、WESTERN BLOTTING鉴定转染后BRCA1的表达,以2×106个MCF-7、MCF-7BRCA1细胞接种BALB/C裸鼠,建立乳腺癌细胞异种移植瘤动物模型,肿瘤生长4周后,皮下注射LOV[50MG/(KG.D)]10D,检测肿瘤的增殖能力和组织病理学变化,RT-PCR、WESTERN BLOTTING检测CYCLIND1、CDK4MRNA及蛋白表达。结果裸鼠分别接种MCF-7、MCF-7BRCA1细胞后均能长出肿瘤,成瘤率为100%,组织病理切片观察其生物学特性没有发生改变;经LOV干预10D后,MCF-7细胞和MCF-7BRCA1细胞移植瘤体积均缩小,移植瘤内CYCLIND1、CDK4MRNA及蛋白表达降低;癌细胞数减少,坏死灶增多,且MCF-7BRCA1细胞移植瘤组变化更明显。结论洛伐他汀明显阻滞高表达BRCA1基因乳腺癌异种移植瘤的生长、增殖,这可能与移植瘤组织内CYCLIND1、CDK4表达的降低有关,该效应提高了乳腺癌异种移植瘤对洛伐他汀的敏感性,增强了洛伐他汀的抗肿瘤作用。

稳定过表达IL-9的小鼠CT-26肿瘤细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立稳定过表达IL-9的小鼠CT-26肿瘤细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型,为后续研究IL-9在结肠癌肿瘤微环境中的作用及其机制提供实验基础。方法将目的基因IL-9片段插入带有绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体GV492,构建重组过表达IL-9-GV492质粒,转染293T细胞后,用倒置荧光显微镜观察GFP的表达强度,用蛋白免疫印迹法检测IL-9的表达;包装病毒后检测病毒滴度。将过表达IL-9的慢病毒转染小鼠结肠癌CT-26细胞后,用倒置荧光显微镜观察GFP的表达强度,用流式细胞仪检测GFP及IL-9的表达,用qRT-PCR法检测IL-9的mRNA表达。过表达IL-9的CT-26细胞皮下接种BALB/C小鼠建立皮下移植瘤模型后,用免疫组化法检测肿瘤中IL-9的蛋白表达,用qRT-PCR法检测IL-9的mRNA表达。结果阳性重组质粒PCR扩增产物大小约617 bp,DNA测序显示重组质粒的编码序列与目标序列完全一致。293T细胞自身不表达IL-9,重组质粒转染293T细胞后表达IL-9;慢病毒滴度为2×109 TU/ml。慢病毒转染小鼠结肠癌CT-26细胞后,Control组、LV-NC组、LV-IL-9组GFP表达阳性率分别为0、96.4%、91.2%;LV-IL-9组IL-9的MFI及mRNA的表达均高于LV-NC组(P均<0.05)。BALB/C小鼠皮下移植瘤模型建立后,实验组小鼠肿瘤IL-9的阳性表达率及mRNA的表达均高于阴性对照组(P均<0.05)。结论稳定过表达IL-9的小鼠结肠癌CT-26细胞株及BALB/C小鼠皮下移植瘤模型建立成功。

白花丹醌和亚砷酸对白血病荷瘤小鼠作用的比较。

目的观察白花丹醌对白血病异种移植瘤的体内作用。方法用NB4细胞构建白血病小鼠模型,白花丹醌组(2mg/(kg.d)),亚砷酸组(4mg/(kg.d)),分别腹腔给药15d,计算抑瘤率,凋亡指数(AI)并进行病理组织学检查。结果白花丹醌组抑瘤率为40.49%(P<0.01),AI为(8.52±1.49)%(P<0.01),未出现明显的病理组织损伤。亚砷酸组则无明显的抑瘤作用,凋亡作用不明显(P>0.05),部分伴有心肌组织的损伤。结论 :白花丹醌具有抑制肿瘤生长,诱导凋亡的作用,可能成为白血病治疗的新选择。

白花蛇舌草多糖调节CXCL12/CXCR4轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白花蛇舌草多糖(Hedyotis diffusa Willd.Polysaccharide,HDP)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及对CXCL12/CXCR4轴的调控机制。方法将乳腺癌细胞分为对照组,CXCL12/CXCR4抑制剂组(AMD 3100组),HDP低、中、高剂量组(HDP-L组、HDP-M组、HDP-H组),HDP高剂量+CXCL12组(HDP-H+CXCL12组);通过CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验、Transwell实验分别测定细胞的迁移和侵袭能力;Western blot分析细胞中上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、CXCL12、CXCR4蛋白的表达;建立BALB/c-nu雌性裸鼠MDA-MB-231异种移植瘤模型并观察各组肿瘤生长情况,采用HE染色观察裸鼠移植瘤细胞的形态学特征。结果与对照组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组细胞增殖活性、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达显著抑制(P<0.05,P<0.01),而E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组细胞的增殖活力、迁移和侵袭数以及Vimentin、CXCL12、CXCR4蛋白表达水平明显升高(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平被显著抑制(P<0.01)。此外,动物实验表明,与模型组相比,AMD 3100组和HDP各剂量组的肿瘤重量明显降低(P<0.05,P<0.01);与HDP-H组相比,HDP-H+CXCL12组裸鼠肿瘤重量明显增加(P<0.01);HE染色显示,AMD 3100组和HDP各干预组肿瘤组织坏死与凋亡细胞增多。结论HDP可以通过抑制CXCL12/CXCR4轴进而抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭。

在乳腺癌中应用CRISPR/Cas9筛选发现一种动粒-微管依赖的Aurora-A抑制剂耐药机制

背景与目的 Aurora-A(AURKA)在乳腺癌中过表达,并且与乳腺癌患者的不良预后相关。最近,选择性Aurora-A抑制剂alisertib(MLN8237)被证实在多种癌症的单药治疗中表现出令人鼓舞的抗肿瘤活性,但Ⅲ期临床试验却报道了失败的治疗结果,MLN8237未能明显延长患者的生存时间。因此,发现能够增强MLN8237活性的潜在分子,可为获得更好的治疗效果提供合理的联合用药方案。方法本研究中,我们在乳腺癌细胞中用MLN8237对507个激酶进行了系统的合成致死性CRISPR/Cas9筛选,鉴定出了一组与MLN8237具有合成致死活性相互作用、可作为药物靶标的激酶。随后,我们用竞争性生长分析、克隆形成实验、细胞活性分析、凋亡分析和异种移植瘤小鼠模型,评价了Haspin(GSG2)缺失或抑制与MLN8237的协同治疗效果。在机制研究方面,用免疫荧光法检测了微管状态及Aurora-B和有丝分裂着丝粒相关驱动蛋白(mitotic centromere-associated kinesin,MCAK)的定位。结果我们发现,Haspin缺失或抑制可轻微抑制癌细胞生长,却明显增强了MLN8237的细胞杀伤活性。机制研究表明,Aurora-A抑制剂与Haspin抑制剂共同给药,阻碍了Aurora-B与MCAK被招募到着丝粒,这与过度的微管解聚作用、动粒–微管(kinetochoremicrotubule,KT-MT)连接失败及严重的有丝分裂灾难相关。我们进一步发现,MLN8237与Haspin抑制剂CHR-6494联合给药,在降低乳腺癌细胞的活力方面发挥了协同作用,并显著抑制了体外和体内实验中的肿瘤生长。结论以上结果表明,Haspin可作为一个合成致死靶点,CHR-6494可作为一种潜在的联合用药,改善MLN8237对乳腺癌的疗效。

达菲抗原趋化因子受体在不同转移性人乳腺癌细胞中的差异表达

目的 研究不同转移潜能乳腺癌细胞株中达菲抗原趋化因子受体 (Duffyantigenreceptorforchemokines,DARC)mRNA表达和蛋白质水平的差异 ,探讨DARC与乳腺癌细胞转移潜能的相关性。方法 培养高低转移潜能的人乳腺癌MDA MB 4 35细胞株 ,并将其接种到裸鼠体内 ,以体外培养细胞和裸鼠体内原位异种移植瘤为标本 ,用RT PCR法检测DARCmRNA的表达 ,同时在细胞涂片上 ,用抗Fy3单抗检测DARC的蛋白质水平。结果 高转移潜能MDA MB 4 35细胞的DARC表达显著性地低于低转移潜能MDA MB 4 35细胞 ,并且在接种高转移潜能MDA MB 4 35细胞而形成的裸鼠体内原位移植瘤中的DARC表达也显著性地低于低转移潜能MDA MB 4 35细胞来源的移植瘤。结论 本研究首次揭示趋化因子清除槽DARC的表达差异与人乳腺癌细胞的不同转移潜能有关 ,有望成为抑制乳腺癌转移的新靶点。

冬凌草甲素对神经母细胞瘤抗肿瘤的作用研究

目的在体内体外水平探讨冬凌草甲素(oridonin)对神经母细胞瘤的抗肿瘤作用。方法 CCK-8法检测冬凌草甲素对细胞增殖的影响;AO/EB双荧光染色后荧光显微镜观察细胞凋亡情况;免疫印迹检测细胞内活化的caspase-3和剪切的PARP表达水平;构建SHSY-5Y神经母细胞裸鼠异种移植瘤模型,Ki-67免疫组化染色分析冬凌草甲素对肿瘤组织增殖的影响。结果冬凌草甲素作用HSY-5Y和SK-N-MC细胞24h后,可以剂量依赖性抑制细胞增殖。不同浓度冬凌草甲素处理24h后AO/EB双荧光染色显示,随着药物浓度增加细胞凋亡明显增多。免疫印迹结果证实冬凌草甲素可以浓度依赖性增加活化的caspase-3和剪切的PARP蛋白的表达。冬凌草甲素处理组裸鼠移植瘤体积增量显著小于对照组,Ki-67免疫组化显示冬凌草甲素处理组肿瘤组织增殖细胞比率较对照组显著降低。结论冬凌草甲素可以抑制SHSY-5Y和SK-N-MC细胞增殖并诱导其凋亡,并在动物水平抑制裸鼠移植瘤的生长。