微囊化异种肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭

目的:探讨微囊化猪肝细胞异种移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的可行性.方法:将分离的猪肝细胞微囊化后移植到Wistar大鼠腹腔内,3d后切除大鼠80%肝叶造成肝衰模型,观察大鼠2wk存活情况.结果:对照组、未微囊化肝细胞移植组及微囊化肝细胞移植组的2wk存活率分别为6.2%,31.2%和56.2%,微囊化组肝细胞存活率明显较未微囊化组及对照组高.微囊化肝细胞在移植14d后结构基本完好.结论:微囊化异种肝细胞移植提供了一种治疗急性肝功能衰竭的可行方法.

异种肝细胞移植研究现状

uPA/RAG-2小鼠的发现为异种肝细胞移植研究提供了—个有效的动物模型.在uPA/RAG-2转基因小鼠脾内注入大鼠、土拨鼠、人肝细胞后,均能部分或完全取代小鼠肝细胞. 文章主要介绍了大鼠、土拨鼠、人肝细胞在uPA/RAG-2转基因小鼠内的增生、对肝功能影响等情况,同时探讨了该模型体系存在问题及应用前景.

异种肝细胞移植缓解大鼠急性肝功能衰竭及其排斥反应观察

目的探讨异种肝细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭防治效果及其免疫排斥反应。方法将异种豚鼠肝细胞,90%肝除术前1d植入大鼠脾脏内。观察受试大鼠存活时间,及切肝术后24h血生化改变。另外观察植入肝细胞被排斥情况及受体CH50、异种抗体IgG、IgM水平变化。结果(1)中位存活时间,对照组为21h,同种组为56h,异种组为40h。同种组存活时间较对照组延长(P<0·01),异种组亦延长(P<0·05)。(2)异种组血糖和凝血酶原时间改善较明显(P<0·05),同种组谷丙转氨酶、总胆红素、血糖、凝血酶原时间都有明显改善(P<0·05或P<0·01)。(3)受体CH50和异种抗体IgM水平下降与植入异种肝细胞排斥过程同步。结论异种肝细胞移植对大鼠急性肝功能衰竭有防治作用,补体和异种抗体IgM与排斥反应关系密切。

猪肝细胞异种移植过程中移植肝细胞凋亡

目的探讨猪肝细胞异种移植后移植肝细胞凋亡情况。方法采用原位胶原酶循环灌注法分离中国实验用小型猪肝细胞。D氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠急性肝衰竭模型，48h时将培养24h的猪肝细胞悬液2ml（含5．0×10^7个肝细胞）移植到急性肝衰竭大鼠腹腔内，观察移植后ALF大鼠2周存活率和肝功能变化；收集移植后不同时段的移植肝细胞观察其病理变化，应用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒结合流式细胞仪检测移植肝细胞的凋亡率、坏死率及存活率。结果2周存活率√UF大鼠为18．75％，移植组为56．25％（P〈0．05）。注药后48h肝功能明显恶化，移植后肝功能明显改善。移植肝细胞在腹腔内存活时间约3～5d。肝细胞体外培养24h已有凋亡出现。与培养24h时相比，移植后24h，移植肝细胞凋亡率明显上升，活率明显下降（P〈0．05），坏死率无明显上升（P〉0．05）；与移植后24h相比，移植后48h，移植肝细胞凋亡率进一步上升，活率进一步下降（P均〈0．05），坏死率仍没有明显变化（P〉0．05）；移植后72h，移植肝细胞摄亡率明显下降，与体外培养24h相比，差异无显著性（P〉0.05），与移植48h相比，移植肝细胞活率无明显变化（P〉0．05），移植肝细胞坏死率明显上升（P〈0.05）。结论猪肝细胞异种腹腔内移植时，移植肝细胞仅能存活3～5d，早期免疫排斥以肝细胞凋亡为主，3d后则以肝细胞坏死为主。

异种肝细胞脾内移植海藻酸钠包裹最佳浓度及免疫隔离机制的初步研究

目的:探讨微囊化异种肝细胞脾内移植对药物性肝衰大鼠的治疗过程中海藻酸钠包裹移植肝细胞的最佳浓度;观察受体存活率,测定肝功能及CD4,CD8的变化。方法:分别以浓度为5.0%、1.5%、0.15%的海藻酸钠悬液体外包裹经胶原酶技术制备的异种(豚鼠)肝细胞为供体,SD大鼠为受体,D-氨基半乳糖(19.5ml/kg)腹腔内一次性注射,制作肝衰模型。48h后将三组微囊化的游离豚鼠肝细胞(1.5×107个)分别移植入大鼠脾脏内。以生理盐水1.2ml脾脏注射为对照。移植后48h、96h观察存活率,肝功能、免疫球蛋白及肝脏病理情况,免疫组化ABC法测定CD4,CD8的变化。结果:微囊化肝细胞移植组存活率分别为50.0%、80.0%、90.0%,明显高于生理盐水组(25.0%)(P<0.01)。移植后96h测定总胆红素和AST显示:在不同浓度的三组微囊化移植肝细胞中,0.15%的海藻酸钠包裹组明显低于其它各组及对照组。移植后48h、96h,分别测定受体脾脏CD4,CD8淋巴细胞,0.15%微囊包裹组96h呈阳性,1.5%、5.0%包裹组48h均呈阳性。结论:大鼠药物性肝衰微囊化肝细胞脾内移植海藻酸钠包裹浓度为0.15%,细胞免疫参与排斥反应,包裹浓度过高影响移植肝细胞功能及免疫隔离效果。

药物性肝衰大鼠脾内移植异种肝细胞治疗前后的CD4,CD8的变化及意义

为探讨异种肝细胞脾内移植治疗大鼠药物性肝衰的意义 ,观察大鼠肝功能、存活率及CD 4,CD8在免疫排斥反应中的作用。笔者以豚鼠肝细胞为供体 ,SD大鼠为受体 ,D -氨基半乳糖(19.5ml/ )腹腔内一次性注射 ,制作肝衰模型。 48h后将微囊化的游离豚鼠肝细胞移植于大鼠脾脏内。以豚鼠裸肝细胞移植及生理盐水脾脏注射为对照。移植后 14d测定存活率和肝功能 ,检查病理切片及CD 4,CD 8的变化。结果示微囊化肝细胞移植组存活率 80 .0 % ,明显高于生理盐水组(2 5 .0 % )和裸肝细胞移植组 (70 .0 % ) (分别为P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。微囊肝细胞移植组 14d总胆红素和ALT ,明显低于生理盐水组和裸肝细胞组。移植后 72h和 14d分别测定受体脾脏CD4,CD8淋巴细胞 ,移植后 72h ,14d微囊化肝细胞组、裸肝细胞组CD 4,CD 8均呈阳性。提示 :大鼠药物性肝衰微囊化肝细胞脾内移植后可维持受体存活 14d ,体液和细胞免疫均参与排斥反应。肝细胞微囊化处理可延迟细胞免疫的发生时间。

Fah^(-/-)Rag2^(-/-)IL2Rg^(-/-)小鼠肝脏原位异种重建模型的建立及其评价

目的:构建猪-小鼠肝细胞嵌合模型,探讨猪肝细胞在无T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)介导排斥条件下的移植及再生的相关条件,评估猪肝细胞在异种受体中的定居、增殖和功能因子分泌情况,为提高猪源化小鼠模型中猪肝细胞的重建效率提供依据。方法:采用脾脏内注射法将猪肝细胞移植至Fah^(-/-)Rag2^(-/-)IL2Rg^(-/-)(FRG)小鼠体内,构建移植模型。将16只FRG小鼠随机分为对照组、空白对照组、实验组和绿色荧光蛋白(GFP)基因实验组,每组4只。空白对照组小鼠停止给予2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-1,4-环己二酮(NTBC),监测体质量;对照组4只小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;实验组小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;GFP基因实验组小鼠注射携带GFP基因猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d。观察各组小鼠体质量、生存情况。检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,流式细胞术检测各组小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1+细胞表达情况,ELISA法检测各组小鼠血清中猪白蛋白表达水平,免疫组织化学法检测各组小鼠猪肝细胞再生效率。结果:与剪碎后再以胶原酶消化的方式比较,两步灌注法消化过程更温和、对细胞损伤更小,细胞活性可以达到92%。停止给予NTBC后,对照组小鼠体质量进行性降低,生命活力逐渐降低。连续停药第28天小鼠开始出现死亡现象。小鼠肝组织中出现肝细胞肿大、细胞浆疏松透亮和细胞核溶解等不可逆细胞损伤。空白对照组小鼠停药后血清中ALT水平逐渐升高。对照组停药小鼠重新给予NTBC后,体质量逐渐恢复至正常水平。流式细胞术,停止给予NTBC后,小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1+细胞完全缺失。免疫组织化学染色,实验组小鼠肝组织中未见深色Fah+阳性细胞,移植小鼠肝组织中可见深色Fah+阳性细胞,猪肝细胞再生效率为(11±4)%。GFP基因实验组小鼠可见同一视野经三色激光分别激发,猪肝细胞再生效率为(10±2)%。结论:成功构建了猪源化FRG小鼠肝脏嵌合模型,建立了长效稳定扩增猪肝细胞的小鼠模型。

微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰的免疫隔离机制

目的:探讨微囊化猪肝细胞腹腔内移植对药物性肝衰大鼠的治疗作用,观察受体存活率、肝组织病理变化及大网膜的免疫隔离作用. 方法:以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)包裹乳猪肝细胞,体外观察APA微囊对NK细胞介导的细胞毒作用的隔离效果.D-氨基半乳糖腹腔内注射诱导大鼠急性肝衰竭,48 h后将微囊化的猪肝细胞移植于大鼠腹腔内,观察移植大鼠存活率,免疫组化法检测大鼠大网膜内CD4、CD8、IgG和IgM的表达. 结果:微囊可有效保护囊内K562细胞不受NK细胞的杀伤.与裸肝细胞移植组相比,微囊化乳猪肝细胞移植组大鼠存活率显著提高(1wk存活率78.6% vs 66.7%, P=0.0 046;2 wk存活率42.9% vs 25.0%,P=0.0027, P<0.01).大网膜CD4、CD8、IgG表达较弱(P=0.0 342、P=0.0 197及P=0.0 445,P<0.05),而IgM表达无明显差异(P>0.05). 结论:APA微囊可有效隔离抗体及淋巴细胞介导的体液和细胞免疫反应.微囊化异种肝细胞移植可治疗大鼠急性肝衰,给予肝功能代谢支持,提高移植治疗效果.

人鼠嵌合肝:研究肝脏病学的新工具

病毒性肝炎威胁着人类的健康,但因尚未完全掌握肝炎病毒的感染、复制和发病机制全过程而影响到对肝炎病毒的深入研究。动物模型的建立为我们提供了研究病毒性肝炎的平台,本文就人肝细胞异种移植建立的人鼠嵌合肝动物模型的研究进展作了综述。

PLA-O-CMC纳米粒子培养的猪肝细胞大鼠腹腔内移植后凋亡相关蛋白的变化

目的探讨聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米粒子培养的猪肝细胞大鼠腹腔内移植后移植肝细胞凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Fas表达的变化。方法原位胶原酶循环肝灌注法分离猪肝细胞。D-氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠急性肝衰竭模型。随机分为2组,48 h后分别将5 mLⅠ型胶原凝胶包埋的PLA-O-CMC纳米粒子黏附培养24 h的猪肝细胞(A组),5 mLⅠ型胶原凝胶固定培养24 h的猪肝细胞(B组)移植至急性肝衰竭大鼠腹腔内。移植量均为5.0×107个肝细胞。采用免疫组化法检测移植后3 d内移植肝细胞Bcl-2,Bax和Fas的表达情况。结果移植后1,2,3 d,A组Bcl-2阳性细胞百分数明显高于B组(P<0.05),Bax和Fas阳性细胞百分数明显低于B组(P<0.05)。结论PLA-O-CMC纳米粒子能上调移植猪肝细胞的抗凋亡蛋白的水平和下调凋亡蛋白的水平,具有良好的抗凋亡作用。

人鼠嵌合肝模型的建立与鉴定

动物模型在肝病学的发展中起重要作用。近几年，在了解特异基因功能、代谢通路和疾病进程方面，啮齿类动物模型发挥了巨大作用。人鼠嵌合肝是利用人肝细胞异种移植到受体鼠肝内建立的新型动物模型。受体鼠可分为免疫缺陷小鼠或诱导免疫耐受大鼠^[1,2]，两者均能初步建立HBV感染的人鼠嵌合肝动物模型。本文主要介绍人鼠嵌合肝相关内容，包括移植细胞来源、建立途径、