异秦皮素治疗脑梗死大鼠的疗效观察及机制研究

目的:探究异秦皮素(ISO)治疗脑梗死大鼠的疗效及机制。方法:Longa法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。32只雄性SD大鼠分为假手术组(sham组)、MCAO组、ISO 10组(10 mg/kg)和ISO 20组(20 mg/kg),每组各8只。药物组大鼠每天给予腹腔注射相应剂量的ISO;sham组、MCAO组腹腔注射相同体积的生理盐水,持续8周。评估各组神经功能后,取相应标本行TUNEL、HE和Nissl染色,测量脑组织含水量后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测活性氧自由基(ROS)、血清丙二醛(MDA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-18、IL-10、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。采用Western blotting法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和CARD结构域凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)的表达水平。结果:两组ISO处理后均可降低脑梗死引起的神经功能评分(P<0.01)。TUNEL染色表明,两组ISO处理后均可减少脑梗死后TUNEL阳性细胞数量(P<0.01);HE和Nissl染色结果表明,两组ISO处理后均能有效减轻脑梗死后神经元损伤;ISO 20组脑梗死后脑组织水含量降低(P<0.05)。ISO 20组ROS和MDA含量均低于MCAO组(P<0.01),SOD含量高于MCAO组(P<0.01);与MCAO组比较,两组ISO处理后均可降低TNF-α、IL-6水平(P<0.01),同时IL-10水平上调(P<0.01)。两组ISO处理后均能降低NLRP3和ASC含量(P<0.01);两组ISO处理后均能降低IL-1β和IL-18水平(P<0.01)。结论:ISO可能通过调节NLRP3炎症小体来改善脑梗死后的神经炎症和氧化应激,可能是临床治疗脑梗死的潜在有效药物。

异秦皮素腹腔注射对脑梗死大鼠的治疗作用及其作用机制

目的观察异秦皮素(ISO)腹腔注射对脑梗死大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法将SD大鼠随机分为四组各8只,药物1、2组及模型组均采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。药物1、2组分别腹腔注射10、20 mg/kg的ISO,假手术组、模型组腹腔注射相同体积生理盐水,1次/d,持续8周。评估神经行为后,测定脑组织含水量,HE、TUNEL、Nissl染色观察神经元损伤情况,检测脑组织中氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),检测血清及脑组织中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10,检测脑组织中炎症小体关键蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)及其活化标志IL-18、IL-1β。将神经细胞株PC12分为四组,模型组及干预组制作氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)细胞模型,干预组同时给予ISO处理,干预+激动剂组在加入ISO的同时加NLRP3激动剂Nigericin,对照组不处理;收集模型组、干预组和对照组细胞,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测算细胞凋亡率,检测细胞中氧化应激标志物ROS、MDA、乳酸脱氢酶(LDH);收集四组细胞,检测细胞中的NLRP3、ASC、IL-18、IL-1β。结果在实验动物中,与假手术组比较,模型组及药物1、2组神经功能评分、脑组织含水量升高(P均<0.01),HE、Nissl染色示神经元损伤明显,TUNEL阳性细胞率增高,脑组织中ROS、MDA升高而SOD降低,血清、脑组织促炎因子TNF-α、IL-6及脑组织NLRP3、ASC、IL-18、IL-1β表达升高(P均<0.01);与模型组比较,药物1、2组神经功能评分、脑组织含水量降低(P均<0.01),HE、Nissl染色示神经元损伤减轻,TUNEL阳性细胞率降低,脑组织中ROS、MDA降低而SOD升高,血清、脑组织TNF-α、IL-6及脑组织NLRP3、ASC、IL-18、IL-1β降低,而抗炎因子IL-10升高(P均<0.01)。在细胞水平上,与对照组比较,模型组细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞LDH、ROS、MDA均升高(P均<0.01);与模型组比较,干预组细胞活力升高,细胞凋亡率升降低,细胞LDH、ROS、MDA均降低(P均<0.01);细胞中NLRP3、ASC、IL-1β、IL-18模型组、干预+模型组>干预组>对照组(P均<0.01)。结论ISO可能通过调节NLRP3炎症小体来抑制脑梗死后的神经炎症和氧化应激,其可能成为临床治疗脑梗死的潜在有效药物。

睡菜醋酸乙酯部位化学成分及其神经保护作用研究

目的研究神农架产睡菜Menyanthes trifoliate全草醋酸乙酯部位的化学成分及其神经保护作用。方法采用薄层色谱,正相硅胶、AB-8大孔树脂、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶及制备型HPLC等柱色谱方法分离纯化,利用NMR、MS等波谱学方法鉴定化合物结构。采用体外建立皮质酮诱导PC12细胞损伤模型,就单体化合物对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用进行初步确认。结果从睡菜醋酸乙酯部位中得到了21个化合物,分别鉴定为4-O-咖啡酰奎尼酸甲酯(1)、绿原酸甲酯(2)、绿原酸(3)、异秦皮素(4)、异嗪皮啶(5)、7R,7'R,8S,8'S-(+)-新-橄榄脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、肿柄雪莲苷(7)、丁香脂素(8)、苏式-(7R,8R)-愈创木基丙三醇-8-香草醛醚(9)、(7S,8R)-二氢去氢二松柏醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(10)、(—)-落叶松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、山柰酚-3-O-芸香糖苷(12)、槲皮素-3-O-芸香糖苷(13)、去氢吐叶醇(14)、布卢门醇A(15)、黑麦草内酯(16)、(E)-6-羟基-2,6-二甲基辛-2,7-二烯酸甲酯(17)、3-甲氧基酚-1-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(18)、2-羟基苯并咪唑(19)、丁香醛(20)、1-苯基-1,2-乙二醇(21)。皮质酮诱导PC12细胞损伤的神经保护作用研究显示,化合物1~3、7、9对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有显著的保护作用,化合物4、5、10、11、15~17表现出中等的保护作用。结论化合物1~9、11~12、14~21为首次从该植物中分离得到;部分化合物对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有保护作用。