异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖影响的实验研究

目的:探讨异紫堇定碱(Isocorydione)对人宫颈癌Siha细胞增殖的影响。方法:以100、200、400、800、1 200μmol/L浓度的异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞体外干预,分别作用24、48、72 h后,采用MTT法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞生长增殖的作用;流式细胞仪检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞周期的影响;结合Hoechst染色观察处理后Siha细胞核微形态的变化;Western Blot法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞作用后凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:MTT结果显示不同浓度的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后具有明显的抑制其增殖的作用,呈剂量-时间依赖关系(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示400μmol/L的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后,细胞周期发生明显改变,其中G1和S期细胞比例变化不明显,但G2期细胞明显减少(P<0.05);Hoechst染色结果显示,与对照组比较,400μmol/L的异紫堇定碱作用于Siha细胞48 h后形态缩小、细胞核固缩,出现核碎裂形成凋亡小体;Western Blot结果显示400μmol/L的异紫堇定碱分别作用于人宫颈癌Siha细胞24、48、72 h后,其Bax蛋白表达增加,而Bcl-2蛋白表达逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加,Caspase-3蛋白表达逐渐增多。结论:异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖具有明显的抑制作用,其促使细胞发生凋亡行为可能与线粒体凋亡途径的蛋白有关。

异紫堇碱对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响

目的探讨异紫堇碱(ICD)对宫颈癌SiHa细胞增殖和辐射敏感性的影响及其作用机制。方法采用不同浓度(25、50、100、200μmol/L)ICD处理宫颈癌SiHa细胞(简称ICD处理组),同时将正常培养未经ICD处理的SiHa细胞设为对照(NC)组。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测细胞的增殖抑制率,细胞克隆形成实验检测ICD对细胞辐射敏感性的影响,Western blot检测磷酸化组蛋白H2AX(γ-H2AX)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的相对表达量,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测微小RNA-129-5p(miR-129-5p)的表达。在SiHa细胞中分别转染miR-NC和miR-129-5p,观察转染miR-129-5p对细胞增殖、辐射敏感性、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、γ-H2AX蛋白表达的影响。在SiHa细胞中分别转染anti-miR-NC和anti-miR-129-5p并使用ICD处理,分析其对ICD诱导的细胞增殖、辐射敏感性、PI3K/Akt信号通路的影响。2组间数据的比较采用独立样本t检验。结果MTT实验结果显示,与NC组SiHa细胞的增殖抑制率[(0.05±0.01)%]相比,25、50、100、200μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[(10.26±1.03)%、(22.16±2.21)%、(44.09±4.41)%、(70.88±7.09)%],且差异均有统计学意义(t=29.736~30.013,均P<0.05)。细胞克隆形成实验、Western blot和qRT-PCR结果显示,与NC组相比,100μmol/L ICD处理组能够明显提高SiHa细胞对不同剂量X射线的辐射敏感性(t=19.135~44.478,均P<0.05),提高γ-H2AX蛋白和miR-129-5p的相对表达量(t=15.041、19.682,均P<0.05),降低p-PI3K和p-Akt蛋白的相对表达量(t=14.897、15.429,均P<0.05)。与转染miR-NC组相比,转染(高表达)miR-129-5p组能够明显提高SiHa细胞的增殖抑制率[(75.06±7.51)%对(1.04±0.10)%,t=29.566,P<0.05]、对不同剂量X射线的辐射敏感性(t=13.239~37.015,均P<0.05)和γ-H2AX蛋白的相对表达量(t=17.076,P<0.05),能够降低cyclinD1蛋白的相对表达量(t=17.393,P<0.05)。与转染anti-miR-NC+ICD处理组相比,转染anti-miR-129-5p(低表达miR-129-5p)+ICD处理组可以反转ICD抑制SiHa细胞增殖、抑制PI3K/Akt信号通路的活性和增强细胞辐射敏感性的作用,且差异均有统计学意义(t=13.370~28.252,均P<0.05)。结论ICD能够通过上调miR-129-5p表达及抑制PI3K/Akt信号通路的活性来抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖以及增强其辐射敏感性。

对叶榕叶和细枝的化学成分研究

采用柱色谱法从对叶榕FicushispidaL.叶和细枝的95%甲醇溶液中分离得到10个化合物。通过理化性质和波谱数据分析分别鉴定为α-豆甾醇(1)、正癸烷(2)、叶黄素(3)、乌苏酸(4)、豆甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(5)、7-羟基香豆素(6)、香草酸(7)、齐墩果酸-28-O-α-D-吡喃葡萄糖苷(8)、异紫堇定碱(9)和原阿片碱(10)。化合物9和10首次从该植物中分离得到。

夏天无的化学成分研究

目的研究夏天无(伏生紫堇Corydalis decumbens的干燥块茎)中生物碱类化学成分。方法应用硅胶、Sephadex LH-20凝胶、RP-C18柱色谱以及制备HPLC等方法对醋酸乙酯部位进行分离纯化,根据化合物的理化性质与波谱数据鉴定化合物结构。结果从夏天无药材70%乙醇提取物中分离得到11个生物碱类化合物,分别鉴定为普洛托品(1)、隐品巴马汀(2)、β-别隐品碱(3)、隐品碱(4)、(6S,6a S,M)-异紫堇定碱(5)、球紫堇碱(6)、夏无碱(7)、左旋紫堇根碱(8)、毕枯枯灵(9)、(-)-7′-O-甲基夏无碱(10)、epi-coryximine(11)。结论化合物5和10为首次从紫堇属植物中分离得到,化合物3、8和11为首次从夏天无中分离得到。