异紫花前胡内酯对阿尔茨海默病小鼠认知障碍的改善作用及机制研究

【目的】探讨异紫花前胡内酯对阿尔茨海默病(AD)小鼠认知障碍的改善作用及机制。【方法】将50只小鼠随机分为5组,即空白组,模型组,异紫花前胡内酯低、高剂量组及多奈哌齐(阳性药)组,每组10只。连续给药21 d后,除空白组,其他各组小鼠给予腹腔注射东莨菪碱建立AD模型。采用网络药理学构建异紫花前胡内酯治疗AD共同靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,提供研究方向。通过Morris水迷宫、旷场试验和新物体识别试验对AD模型小鼠认知功能进行药效评价,Nissl染色法观察海马组织神经元损伤情况,应用试剂盒检测小鼠海马乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)水平,采用Western Blot法检测海马白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子E2相关因子2(NRF2)、沉默信息调节因子同源蛋白3(SIRT3)、Kelch样ECH关联蛋白1(KEAP1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白表达水平。【结果】与模型组比较,异紫花前胡内酯高剂量组小鼠Morris水迷宫试验潜伏期显著缩短,旷场新物体试验进入目标区域时间、旷场中央区域运动距离延长,海马CA1和CA3区神经元数目显著增加,海马ChAT、Ach水平显著升高,AChE水平显著降低,CAT水平显著升高,ROS、MDA水平显著降低,TNF-α表达水平降低,SIRT3、HO-1表达水平升高,KEAP1蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。【结论】异紫花前胡内酯可有效改善AD小鼠认知障碍,其作用机制可能与激活NRF2/SIRT3信号通路,进而缓解氧化应激水平和神经炎症、修复胆碱能神经元功能有关。

异紫花前胡内酯对离体大鼠胸主动脉的舒张作用及机制

目的 探讨草药隔山香中异紫花前胡内酯（marmesin）的血管舒张作用及机制。方法 以离体血管环实验研究异紫花前胡内酯在Kreb’s液中对去甲肾上腺素（NE）、氯化钾（KCl）预收缩血管的舒张作用及静息状态下血管张力的影响,以及阻断剂维拉帕米（VER）、氯化四乙胺（TEA）对其血管舒张作用的影响;在无钙Kreb’s液中考察异紫花前胡内酯对氯化钙（CaCl_2）量效曲线、NE诱导血管收缩的影响;并结合激光共聚焦显微镜,考察其对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响。结果 异紫花前胡内酯（25,50,100μg·m L-1）浓度依赖性舒张NE及KCl诱导收缩的离体血管,最大舒张率可达60%~80%,且内皮去除后舒张作用不受影响,同时不影响静息状态下血管环张力;阻断剂VER、TEA预孵后,异紫花前胡内酯的血管舒张作用均明显降低（P〈0.01,P〈0.05）;无钙环境下,异紫花前胡内酯能使CaCl_2量效曲线右移,NE诱导的收缩幅度降低;不同浓度的异紫花前胡内酯预孵血管平滑肌细胞（VSMCs）后,KCl、NE及CaCl_2诱导的细胞荧光密度值明显降低（P〈0.01）。结论异紫花前胡内酯可能通过抑制受体操纵钙通道（receptor-operated calcium channel,ROCC）、L型电压依赖性钙通道（voltage-dependent calcium channels,VDCC）、内钙释放以及开放钙激活钾离子通道（KCa）等机制,发挥非内皮依赖性的血管舒张作用,是草药隔山香的药效物质之一。

异紫花前胡内酯对妊娠糖尿病大鼠主动脉血管收缩及AT1R、AT2R、COX-1、COX-2表达的影响

目的:探讨异紫花前胡内酯对妊娠糖尿病大鼠主动脉血管收缩及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)、血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)、环氧化酶1(COX-1)、环氧化酶2(COX-2)表达的影响。方法:将60只建模成功的妊娠糖尿病大鼠随机分为4组,每组15只,分别为:模型对照组、异紫花前胡内酯低(20 mg·kg^(-1))、中(40 mg·kg^(-1))、高(80 mg·kg^(-1))剂量组,另取同期妊娠大鼠15只为空白对照组。各给药组分别灌胃给予异紫花前胡内酯,空白对照组与模型对照组分别灌胃给予等体积的0.2%羧甲基纤维素钠,1次/d,连续给药10 d。测定离体胸主动脉对KCl刺激引起的收缩反应及内皮依赖性舒张功能,采用蛋白免疫印迹和实时荧光定量技术分别对AT1R、AT2R、COX-1、COX-2的表达水平进行测定。结果:与空白对照组相比,模型对照组大鼠血糖显著升高,体质量显著下降,主动脉血管环对KCl刺激引起的血管收缩张力显著增强,对不同浓度乙酰胆碱引起的舒张反应显著减弱,AT1R、AT2R、COX-1、COX-2的mRNA表达量及各蛋白水平显著上调(P<0.05),但对不同浓度硝普钠引起的舒张反应差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组相比,异紫花前胡内酯干预组血糖下降,体质量回升,胸主动脉血管环收缩张力显著减弱,对不同浓度乙酰胆碱引起的舒张反应显著增加,AT1R、AT2R、COX-1、COX-2的mRNA表达量及各蛋白水平显著下降(P<0.05),以上作用均呈一定的剂量依赖性(P<0.05),但对不同浓度硝普钠引起的舒张反应差异无统计学意义(P>0.05)。结论:异紫花前胡内酯对妊娠糖尿病大鼠主动脉血管具有舒张作用,且对血管内皮具有一定的保护作用,其机制可能与AT1R、COX-1、COX-2的下调有关,而AT2R的下调可能与血管内皮损伤得到改善有关。

羊红膻根化学成分的研究(Ⅰ)

从羊红膻根的乙醚提取物中分得5个成分，经理化性质和光谱分析，确定它们的结构分别为佛手柑内酯（bergapten，Ⅰ），异紫花前胡内酯（marmesin，Ⅱ），七叶内酯二甲醚（scoparone，Ⅲ），东莨菪内酯（scopoletin，Ⅳ）和异皮定（isofraxidin，Ⅴ）。此5个成分均系首次从本植物中分得。

Constituents of Chinese Drug Fangfeng, the Root of Saposhnikovia divaricata

从防风根的乙醇浸出物中分离鉴定出8个化合物。通过理化数据及光谱分析,分别鉴定为香柑内酯(Ⅰ),花椒毒内酯(Ⅱ),亥茅酚(Ⅲ),异紫花前胡内酯(Ⅳ),东茛菪内酯(Ⅴ),香草酸(Ⅵ),D-甘露醇(Ⅶ)和蔗糖(Ⅷ),其中Ⅳ与Ⅵ为首次自此植物中提得。