红树植物异色拟盘多毛孢内生真菌次级代谢产物及其生物活性

目的研究红树植物异色拟盘多毛孢内生真菌Pestalotiopsis versicolor的次级代谢产物及其生物活性。方法真菌固体发酵产物采用硅胶、Sephadex LH-20、制备薄层进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。PNPG法测定化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制能力。结果从中分离得到8个化合物,分别鉴定为3-(4-甲苯氧基)丙酸(1)、对羟基苯乙醇(2)、2-苯乙醇(3)、3β, 5α, 9α-三羟基-(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-6-酮(4)、麦角甾醇(5)、麦角甾4,6,8(14),22-四烯-3酮(6)、(1aS,3R,4R,4aR,6S,7R,8aS)-7-chloro-3,6-dihydroxy-3,4a,8,8-tetramethyl-octahydro-1aH-naphtho[1-b]oxirene-4-carboxylic acid (7)、cepharosporolides G (8)。化合物1在质量浓度为6.25 mg/mL时对α-葡萄糖苷酶具有较弱的抑制活性。结论化合物7为首次从拟盘多毛孢属内生真菌的固体发酵产物中分离得到,化合物5为首次从异色拟盘多毛孢内生真菌的固体发酵产物中分离得到。化合物1有较弱的生物活性。

高盐条件下红树植物内生异色拟盘多毛孢菌Pestalotiopsis versicolor次级代谢产物的研究

对红树植物桐花树内生异色拟盘多毛孢菌（Pestalotiopsis versicolor）高盐条件下固体发酵培养物的化学成分进行研究。利用硅胶拄层析，SephadexLH-20凝胶柱层析，半制备高效液相色谱仪等分离手段对内生异色拟盘多毛孢菌（P．versicolor）的提取物进行分离纯化，并利用各种波谱方法，结合文献对照，确定化合物结构。从提取物中分离得到9个化合物，经鉴定为pestalachlofide B（1）、1，6，8-三羟基-3-（羟甲基）蒽醌（2）、大黄素（3）、麦角甾-6，22-二烯6口，8σ-环二氧．3-醇（4）、3β-羟基-5-胆甾烯-6-酮（5）、3-吲哚甲醛（6）、4，6-二羟基-1（3H）-异苯并呋喃酮（7）、2-（4-羟苯基）乙醇（8）、对羟基苯甲醛（9）。其中，化合物1—3,6—8为首次从该种真菌中分离得到。

Pestalachloride E,红树林内生杂色拟盘多毛孢真菌中的新氯代二苯甲酮衍生物（英文）

内生真菌已经成为发现结构新颖、活性显著的次级代谢产物的重要来源,红树林内生真菌的代谢产物中发现了许多结构多样的化合物,引起了人们的广泛重视。采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、以及制备薄层色谱等方法从南海红树林植物桐花树内生杂色拟盘多毛孢真菌大米发酵产物中的乙酸乙酯提取物中得到4个代谢产物,其中1个新氯代二苯甲酮衍生物pestalachloride E(2),2个已知的二苯甲酮衍生物pestalachlorides C(1)和B(3),1个已知的蒽醌化合物,大黄素甲醚physcion(4)。新化合物通过一维和二维核磁共振谱鉴定,并通过高分辨电喷雾质谱确认。细胞毒实验结果表明化合物1显示良好的抗肿瘤活性,IC50在2.8~82.4μmol/L区间。化合物3显示具有抗炎活性,对环氧合酶-2的抑制活性为IC50 2.4μmol/L。

除虫菊内生拟盘多毛孢Y1菌株的生物学特性及其对植物病原菌的抑制作用

从除虫菊叶中分离到1株内生真菌，经形态学和生长特性等研究初步鉴定其为半知菌类拟盘多毛孢（Pestalotiopsissp．）．该菌发酵液的10倍稀释液对苹果炭疽病菌（Glomerellacingulata）、番茄灰霉病菌（BotrytisciFeFea）、玉米大斑病菌（E．rserohilumturcicum）等6种病原真菌的抑制作用均达到85％以上，其5倍稀释液对番茄灰霉病菌、玉米大斑病菌、苹果炭疽病菌的孢子萌发抑制率均达80％以上．盆栽试验中对小麦白粉病（Blumeriagraminis）、番茄灰霉病、黄瓜霜霉病（Lycopersiconesculentum）的防治效果达60％以上．环境和营养因子对该菌的生长繁殖和抑菌活性影响较大：①在10～35℃时，菌丝能生长并形成孢子，最适生长繁殖温度为30℃，孢子的致死温度为65℃；②在pH6．5～8．0时，菌丝生长、孢子形成和萌发均良好，最适pH值为7．5；③能直接利用玉米粉和糊精；④氮源以有机态氮为佳，硝态氮对其生长繁殖有抑制作用；⑤分别以D-木糖、山梨糖、甘露醇为碳源，以硝酸钠、甘氨酸、硫酸铵、牛肉膏、蛋白胨为氯源培养时，该菌株发酵液抑菌活性较高．

内生拟盘多毛孢菌化学成分研究进展

内生真菌已经成为学者寻找具有显著活性药物的重要来源。本文对近年来从内生拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis spp.)中发现的活性代谢产物进行总结,按其结构特点主要包括了萜类,生物碱类,异香豆素和香豆素类,醌类和半醌类,色酮类和脂类等,并简要阐述了一些代谢产物的活性。

根据形态学和分子系统学特征界定拟盘多毛孢属的种

以拟盘多毛孢属108个ITS(内转录间区)序列建立了分子系统树,探讨拟盘多毛孢属的形态特征与分子系统树的相互关系。结果表明,拟盘多毛孢属首先按照分生孢子有色胞的颜色区分为暗色和淡色(同色)2个分支,暗色组再分成2个亚分支——同色亚分支和异色亚分支,淡色分支内进一步根据顶端附属丝特征和基部附属丝的有无区分为7个亚分支。寄主植物的某个分类单元在拟盘多毛孢属的分子系统树上并未形成特定的分支。通过对形态特征与分子系统树结合分析,重新界定小孢拟盘多毛孢(P esta lotiop sism icrosp ora)、异色拟盘多毛孢(P.versicolor)和茶拟盘多毛孢(P.theae)。

一株新的拟盘多毛孢菌液体培养特性研究

对影响红豆杉内生真菌拟盘多毛孢属菌株H619生长的11个发酵因素进行试验。结果表明该菌适宜生长的C源、N源、C/N、pH值、Ca^(2+)和Mg^(2+)浓度分别约为蔗糖、玉米粉、25:1～35:1、7～8、1.5‰、0.07‰;最优培养条件约为装料比50 mL/250 mL、接种量10%、转速176 r/min,温度25℃,发酵周期7 d。探讨了各因素影响菌丝生长的显著性,为后续研究提供了实验依据。

一株韦司梅拟盘多毛孢的鉴定及其发酵液抗乳腺癌活性

【目的】对1株分离自桃树枝的内生真菌N1进行分类鉴定与系统发育分析,探讨其深层发酵液的抗乳腺癌活性,为该菌资源的进一步开发利用提供依据。【方法】通过形态学特征和ITS rDNA序列对野生菌株N1进行分类鉴定;基于ITS1-5.8S-ITS2序列的变异程度对菌株N1遗传多样性进行分析;采用MTT法检测菌株发酵液石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇提取物的抗乳腺癌活性;观察乙酸乙酯提取物不同作用时间下乳腺癌细胞的形态变化;采用LC-MS/MS对乙酸乙酯活性提取物的成分进行分析。【结果】根据菌株形态学和ITS rDNA序列特征,将该野生菌株N1鉴定为韦司梅拟盘多毛孢Pestalotiopsis vismiae;其ITS1-5.8S-ITS2序列总变异率为10.3%,表明韦司梅拟盘多毛孢在自然界中具有丰富的遗传多样性。菌株N1深层发酵液乙酸乙酯提取物对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的抑制作用最强(P<0.05),作用24h的半数抑制浓度(IC50)为131.39μg/mL,作用48h时,细胞呈现凋亡状态。LC-MS/MS数据表征了其中的13个化学成分,确定了6种物质,对其他未能鉴定的7个物质的分子式进行了初步表征。【结论】获得了韦司梅拟盘多毛孢遗传多样性的基础信息,其深层发酵液乙酸乙酯提取物是发挥抗乳腺癌细胞的主要活性物质。

秦岭特色药用植物桃儿七内生真菌代谢产物的分离鉴定及生物活性研究

以秦岭无病害健康桃儿七内生烟色拟盘多毛孢菌为研究对象,采用萃取法从菌丝中分离活性代谢产物,并对其结构进行鉴定,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测了代谢产物的细胞毒活性,采用Ellman光度法检测了代谢产物的乙酰胆碱酯酶抑制活性,并检测了代谢产物的α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明,在桃儿七内生烟色拟盘多毛孢菌代谢产物中分离并鉴定了10个萜类化合物,其中化合物1-1、1-2、1-3和1-4为新化合物。化合物1-3、1-4和1-8对A549、HeLa和HepG2细胞均表现出明显的细胞毒活性;化合物1-3对乙酰胆碱酯酶表现出较强的抑制活性;化合物1-1、1-2、1-3和1-4对α-葡萄糖苷酶均未表现出明显的抑制活性。表明,基于桃儿七内生烟色拟盘多毛孢菌分离出具有抗肿瘤活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性的萜类化合物,为桃儿七内生真菌用于抗肿瘤及治疗阿尔兹海默病新药开发提供了新思路。

一株产紫杉醇内生真菌YN6的分离及鉴定

从云南红豆杉(Taxus yunnanensis)树皮内表皮中分离得到75株内生真菌,采用基于紫杉醇合成关键酶10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰基转移酶(10-deacetylbaccatinⅢ-10-O-acetyl transferase,DBAT)和C-13苯丙氨基侧链CoA乙酰基转移酶(C-13 phenylpropanoid side chain-CoAacyltransferase,BAPT)基因为标志分子的快速筛选方法获得一株可产紫杉醇的内生真菌YN6,并通过高效液相色谱法和质谱法对其紫杉醇进行分析.同时,通过对内生真菌YN6的形态特征分析以及18S rDNA序列分析将其初步鉴定为拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis sp.)真菌.拟盘多毛孢YN6的紫杉醇产量约为120～140μg/L,是目前已报道的紫杉醇产量较高的野生菌株之一.拟盘多毛孢YN6的发现为微生物发酵生产紫杉醇提供了潜在的优良种质资源.

广西柳树桑寄生内生真菌的分离鉴定与抗肿瘤活性菌株筛选

该研究从广西钦州市采集健康的柳树桑寄生的根、茎和叶中分离并纯化内生真菌,对真菌进行形态学鉴定,提取内生真菌的DNA,采用真菌ITS序列对内生真菌进行分子鉴定。利用A549和H460细胞作为抗肿瘤活性指示细胞,采用MTT法测定真菌乙酸乙酯提取物的抗肿瘤活性。经过初步分离分析,从柳树桑寄生中纯化出27株内生真菌,经鉴定它们分别属于7个目9个属15个种。拟盘多毛孢属和间座壳属为优势属,其中拟盘多毛孢属全部定植于寄生根;其次为新壳梭孢属、拟茎点霉属和球座菌属,各分离到3株;其他包括青霉属、镰刀菌属、炭疽菌属和派伦霉属,各分离到1株。抗肿瘤活性研究表明,有一株与Pestalotiopsis protearum的ITS序列相似性达100%的拟盘多毛孢属菌株Gen24表现有抑制肿瘤细胞A549和H460生长的特性,在真菌乙酸乙酯浸提物浓度为800μg·mL^(-1)时,对A549细胞的抑制率达到了56.92%,对H460细胞的抑制率达到了70.11%。该研究结果表明广西柳树桑寄生内生真菌较丰富,在寄主中的分布表现了一定的组织特异性,而且还存在一些具有抗肿瘤活性的菌株及其活性物质可供进一步深入研究。

雷公藤内生真菌Pestalotiopsis disseminata次级代谢产物研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及PHPLC等手段对雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)内生真菌广布拟盘多毛孢(Pestalotiopsis disseminata)的发酵次级代谢产物进行分离纯化,通过理化性质及波谱学数据分析对化合物结构进行鉴定。结果表明,从内生真菌Pestalotiopsis disseminata的次级代谢产物中共分离并鉴定了7个单体化合物,分别为7-羟基-5-甲氧基-4,6-二甲基苯酞(Ⅰ)、腺苷(Ⅱ)、尿苷(Ⅲ)、邻苯二甲酸二正丁酯(Ⅳ)、邻苯二甲酸二异丁酯(Ⅴ)、1,1′-二(1,1′-羧基乙基)醚(Ⅵ)、赤藓醇(Ⅶ),其中化合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ为首次从该属真菌中分离得到,化合物Ⅰ、Ⅴ为首次从该种真菌中分离得到。

红树植物木榄内生真菌Pestalotiopsis neglecta次级代谢产物的研究

对红树植物木榄内生忽视拟盘多毛孢菌Pestalotiopsis neglecta的次级代谢产物进行研究。利用硅胶柱层析，Sephadex LH-20凝胶柱层析，半制备高效液相色谱仪等分离手段对木榄内生P．neglecta的提取物进行分离纯化，并利用各种波谱方法，结合文献对照，确定化合物结构。从提取物中分离得到7个化合物，经鉴定为麦角甾_6，22-二烯-5α，8α-环二氧-3-醇（1），麦角甾-4，6，8（14），22-四烯-3-酮（2），24p乙基胆甾-4-烯-3β-醇（3），24-降胆甾-22-烯-3β-醇（4），麦角甾-5，7，22-三烯醇（5），胆甾醇（6），24-甲基胆甾-5-烯-3β，7α-二醇（7）。这7个化合物均为首次从木榄内生真菌P.neglecta中分离得到。

番石榴叶内生真菌Pestalotiopsis zonata次级代谢产物的研究

目的研究番石榴叶内生真菌Pestalotiopsis zonata的次级代谢产物。方法应用正、反相硅胶柱色谱以及制备型薄层色谱(PTLC)和Sephadex LH-20等多种方法分离纯化,运用NMR和MS等波谱解析化合物的结构。结果共分离鉴定了12个已知化合物,它们分别为乌苏酸Ⅰ、齐墩果酸Ⅱ、3-乙酰氧基齐墩果酸Ⅲ、7-甲氧基-6-甲基-5-(3-甲基丁-2-烯-1-基氧代)异苯并呋喃-1(3H)-酮Ⅳ、对羟基苯乙酸Ⅴ、酪醇Ⅵ、2-羟基-3-苯基丙酸甲酯Ⅶ、菜油甾醇Ⅷ、琥珀酸Ⅸ、β-谷甾醇Ⅹ、过氧麦角甾醇Ⅺ、D-阿洛醇Ⅻ。结论所有化合物均尚未见从该内生真菌中分离得到的相关文献报道。

樟叶越桔嫩枝1株内生真菌的鉴定及抑菌活性测定

从樟叶越桔嫩枝中分离得到1株内生真菌Z-78,通过形态鉴别和分子生物学方法,鉴定为木防己拟盘多毛孢(Pestalotiopsis cocculi(Guba)G.C.Zhao&N.Li)。采用平板对峙法测定了其对灰葡萄孢、腐皮镰孢、禾谷镰孢、尖孢镰孢、芸苔链格孢、密粘褶菌、绵腐卧孔菌和采绒革盖菌等8种植物病原菌的抑制活性,采用生长速率法对其发酵液抑制芸苔链格孢活性进行了酸碱稳定性试验。结果表明:内生真菌Z-78对8种供试病原菌均有较强的抑菌活性,其发酵液在不同pH条件下对芸苔链格孢保持活性稳定。

正红树种子内生真菌Pestalotiopsis Foedans次生代谢产物及其生物活性研究

对分离自正红树种子内生真菌污斑拟盘多毛孢(Pestalotiopsis foedans)进行了次生代谢产物及生物活性研究。通过多种分离纯化方法(常规硅胶柱层析、凝胶Sephadex LH-20柱层析、制备薄层层析等)和现代波谱学技术(紫外、核磁共振技术)分离鉴定了5个化合物结构,分别为:1,2-bis(3-indolyl)ethane(1),3-indolylethanol(2),adenosine(3),Uridine(4),Inosine(5)。对化合物进行卤虫致死活性测试,结果表明化合物1和5在浓度为100μg/mL时对卤虫的致死率分别为53.1%和36.7%。

广西高峰林场相思树的真菌病害调查

相思树是从澳大利亚引进的速生丰产林种,在广西以高峰林场为主要种植基地。经初步调查,不同相思树上发生的真菌性病害不同,马占相思树、厚荚相思树、直干相思树、纹英相思树、杂交相思发生炭疽病,其病原茵为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides),在马占相思、直干相思、纹荚相思和杂交相思的叶片上只产生病原菌的无性阶段,而在厚荚相思叶片上可同时出现无性阶段和有性阶段;马占相思树和杂交相思树上发生的白粉病菌为白粉菌Oidium sp．,其中杂交相思白粉病发生普遍而严重,发病期多在3-5月;黑木相思树发生叶尖枯病,病原为异色拟盘多毛孢(Pestalotiopsis versicolor),一年四季均可发病;马占相思树干基部心腐病发生严重,造成木材的大量损失,病原尚未得到确定。本文对病害的症状特点、病原菌形态特征进行了描述。

环带拟盘多毛孢发酵液中一个新的联苯类化合物(英文)

目的：研究分离于海南红槟榔中环带拟盘多毛孢发酵液的化学成分。方法：利用硅胶柱层析和凝胶柱层析分离纯化得到4个化合物（1~4）,借助光谱学手段鉴定其结构。测试了化合物1对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克来伯氏菌、MRSA耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌和VRE耐万古霉素屎肠球菌的抑制活性。结果：分离鉴定了4个化合物包括1个新化合物（2＇-乙酰基-4＇,4-二甲氧基联苯-2-醛基）,该化合物对7种细菌株有较弱抑制活性,IC50分别为0.75,0.75,0.82,0.81,0.84,0.90和0.87μm·mL-1.结论：化合物1为新的联苯类化合物,对7种细菌株表现出比较弱的抑制活性。化合物2~4为首次从该种中分离得到。

拟盘多毛孢属活性次级代谢产物的研究进展

拟盘多毛孢属作为一种拥有丰富产物的内生真菌,已成为很多活性代谢产物的主要来源。本文整理总结了近年从拟盘多毛孢属中发现的活性代谢产物,以不同活性特点来分类,主要包括抗肿瘤、抗细菌、抗真菌、抗病毒和抗寄生虫活性等。

杨梅凋萎病菌侵染、传播及树体内分布规律

为了制定有效的杨梅凋萎病防控措施,对凋萎病菌分生孢子侵染、传播、病害周年发生动态及病菌在树体内分布规律进行了研究。结果表明：2×10^1～2×10^6m L^-1浓度范围内的分生孢子溶液都能侵染杨梅致病,主要通过嫩枝的皮口及伤口侵入,有2个侵染高峰期分别是5月和6月中旬至7月中旬。凋萎病菌分生孢子周年均可捕捉到,5月中旬至6月中旬和8月底至10月中旬为两个分生孢子捕捉高峰期。凋萎病周年都有新病枝出现,发病高峰期集中在9月中旬至11月初,在果园内海拔低、流水冲刷严重的位置先发病。周年内发病杨梅树内拟盘多毛孢的分离菌株数及DNA拷贝数都是健康树的2～6倍。凋萎病菌可以周年寄生在杨梅的整个树体内,没有明显的菌量高峰期,嫩枝位置菌量最大。