根癌农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌转化系统研究

以携带潮霉素B磷酸转移酶抗性基因(hph)的pBHt1作为转化载体,根癌农杆菌AGL-1作为转化介体,实施转化异角状拟盘多毛孢菌。研究发现,异角状拟盘多毛孢菌的最优转化体系为:异角状拟盘多毛孢菌分生孢子悬浮液浓度为1×106个/mL,根癌农杆菌OD600为0.3,共培养时间48 h,共培养温度为25℃,诱导培养基中乙酰丁香酮(AS)浓度为200μmol/L,选择培养基添加250μg/mL潮霉素B、250μg/mL头孢噻肟钠。1×106个异角状拟盘多毛孢菌分生孢子可以产生200～300个转化子,随机挑选10个转化子进行PCR检测,均能扩增出预期条带,且在不含潮霉素B的PDA培养基平板上转化子连续培养5代后,hph基因仍能稳定遗传,这表明T-DNA已经插入到异角状拟盘多毛孢菌的基因组中。此次建立的异角状拟盘多毛孢菌的转化体系可为该病菌的功能基因研究和寄主与病原菌的互作研究提供有效的工具。

农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌T-DNA转化子生物学特性分析

从根癌农杆菌介导的异角状拟盘多毛孢菌菌株的转化子库中筛选出15株形态特征变化显著且遗传稳定的转化子,并从中挑选3株转化子进行Southern blot检测,证实了转化子基因组DNA中含有T-DNA插入片段。分别对15株转化子的菌落形态、菌落生长速度、产孢量、致病性等进行分析,结果表明,部分转化子的生物学特性发生了显著变化,为探讨异角状拟盘多毛孢菌的致病机制和致病基因克隆等提供了理论依据。

水杉赤枯病病原形态及分子鉴定

对上海、南京地区的水杉赤枯病(Metasequoia red blight)的发生情况进行了调查和分析,并采用形态学和分子生物学结合的方法对该病的病原菌进行了鉴定。结果表明:单行种植和单棵零星分布的水杉感病程度相对于已经郁闭成林的水杉要严重得多;用作行道树的水杉抗病能力较弱,发病情况相对于农田中的水杉较为严重;生长势弱的水杉植株容易发生赤枯病,这一现象在行道树中表现尤为明显。通过对水杉赤枯病病原菌分离培养、人工接种试验、分离菌形态学观察及分子生物学分子鉴定,水杉赤枯病的病原菌被鉴定为细极链格孢(Alternaria tenuissima)和异角状拟盘多毛孢(Pestalotiopsis heterocornis)。