异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的分子分型和同源性分析

目的了解滨州医学院附属医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分子流行病学现状,为有效预防hVISA的传播提供依据。方法采用万古霉素琼脂平皿筛选法对263株金黄色葡萄球菌进行初筛,菌群分析-曲线下面积(PAPAUC)法对初筛阳性的hVISA可疑株进行确认。采用多位点序列分型(MLST)、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对hVISA菌株进行分子分型和同源性分析。结果本院初筛出113株hVISA可疑株,最终确认为hVISA的菌株共22株。MLST分型以ST72型(5株)为主,其次为ST59和ST25型(各4株);spa分型主要为t002、t437以及t2431(各3株)。PFGE聚类分析共得到12种PFGE型别,命名为H1-H12型,相似值处于62.6%~100%之间,其中最主要的是H3型(共6株),其次为H1型(共4株)。结论hVISA在本院为散发,22株hVISA菌株共检出10种ST型,14种spa型和12种PFGE型。本院hVISA菌株的主要流行克隆为ST72-t2431-H3型,且均来源于儿科,儿科可能存在ST72-t2431-H3型hVISA的流行。

万古霉素琼脂平板对异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌筛查价值的Meta分析

目的评价6mg/m L万古霉素平板筛查异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的准确性和特异性。方法计算机检索The Cochrane Library、Pub Med、ISI Web of Knowledge、中文期刊全文数据库、中文科技期刊数据库、万方数据库,并用辅助手工检索,2名评价员严格根据纳入排除标准收集6mg/m L万古霉素平板筛查异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的文献数据。依据QUADAS质量评价标准评价纳入文献的质量后,用Meta-Disc 1.4软件进行Meta分析。结果最后4篇文献纳入分析,包含873例受试者。4篇文献异质性检验I2大于50%,P<0.05,提示各研究结果间具有统计学异质性,采用随机效应模型进行Meta分析,Meta分析结果显示:万古霉素平板筛查万古霉素不敏感的金黄色葡萄球菌合并敏感性、特异性、阳性预测值、阴性似然比、诊断似然比、阳性预测值、阴性预测值和SROC曲线下面积分别为0.20[95%CI(0.14,0.27)]、0.98[95%CI(097,0.99)]、8.76[95%CI(4.11,18.66)]、0.86[95%CI(0.73,1.02)]、10.74[95%CI(4.66,24.76)]、0.595[95%CI(0.399,0.765)]、0.821[95%CI(0.790,0.849]和0.9044。结论 6mg/m L万古霉素平板筛查万古霉素不敏感菌具有高特异性,但敏感性和诊断准确性都相对较低,建议在临床上使用可联合其它试验筛查,提高其敏感性。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌:困扰我们的难题

万古霉素是治疗甲氧西林耐药金葡菌（MRsA）感染的有效药物，也是治疗该菌感染的最后选择，目前该药已在临床上广泛使用。虽然万古霉素耐药金葡菌（VRsA）在全球的检出率很低，但万古霉素低水平耐药的金葡菌，包括异质性万古霉素中介金葡菌（hVIsA）和万古霉素中介金葡菌（VISA）却在多个国家和地区广泛流行。

耐甲氧西林葡萄球菌及异质性万古霉素中介的检测与分析

目的了解某院住院患者耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)感染状况和异质性万古霉素中介葡萄球菌(h-VIS)分离率。方法选择住院感染患者标本分离的葡萄球菌,采用BDphoenix^(100)微生物自动分析系统进行鉴定及药敏试验,并以头孢西丁纸片扩散法检测MRS,肉汤稀释法测定无菌体液及分泌物标本分离的41株MRS对万古霉素的敏感性;脑心浸液琼脂诱导异质性万古霉素中介株,进一步用E-test试条检测万古霉素敏感性。结果 239株葡萄球菌中有160株MRS,痰液、脓液、血液及胸腹腔积液标本是其主要来源,耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌均呈多重耐药性,但对利奈唑胺、呋喃妥因敏感率为100.00%,未发现对万古霉素高度耐药株。患者无菌体液及分泌物h-VIS检出率为14.63%(6/41),其中金黄色葡萄球菌的分离率为7.14%(1/14),血浆凝固酶阴性葡萄球菌分离率为18.52%(5/27)。结论准确检测出MRS和h-VIS,对临床有效控制感染极为重要。

异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌的分子特征

目的了解我院异质性万古霉素中介的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分布及分子学特征。方法对2015年10月至2016年5月我院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,采用菌群分析策略-曲线下面积法(PAP-AUC)筛选异质性万古霉素中介的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;采用多重PCR法对hVISA进行agr、spa、SCC基因分型测定,对PCR产物进行测序确定spa分型。结果分离的79株MRSA经筛选获得9株h VISA;9株hVISA中有7株为agr-Ⅰ型,2株为agr-Ⅲ型;有6种spa克隆型,包括t437(4株),t114(1株)、t2310(1株)、t14062(1株)、t030(1株)、t16472(1株)。SCCmec分型以Ⅳa型为主,占55.56%,其次为Ⅲ型33.33%、Ⅱ型11.11%。结论我院hVISA检出率为11.39%,呈多克隆流行。

无菌体液标本中异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的流行病学研究

目的研究黄冈市黄州区人民医院2009-2013年分离自无菌体液标本的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）菌株中异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌（hVISA）的流行性及分子生物学特征。方法采用琼脂稀释法检测金黄色葡萄球菌对抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）,菌群谱型分析/曲线下面积（PAP/AUC）法检测hVISA,聚合酶链反应（PCR）对hVISA菌株进行葡萄球菌染色体mec盒（SCCmec）、多位点序列分析（MLST）、附属基因调节子（agr）和金黄色葡萄球菌A蛋白（spa）分型。结果 285株MRSA中共检测出hVISA 32株,检出率为11.2%,2009-2013年hVISA的检出率分别为0.0%,6.4%,9.0%,14.3%和18.8%,呈逐年上升趋势;hVISA菌株的主要流行克隆为ST239-SCCmecIII-t030-agrI型,共28株,占87.5%。结论该地区5年来hVISA的检出率呈逐年上升的趋势,应引起临床高度重视,需严格控制糖肽类药物的使用。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的筛选和生物被膜形成能力的研究

目的调查笔者医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分离率,并探索hVISA菌株的生物被膜形成能力.方法收集临床139例MRSA菌株,采用浓度为5mg/L的替考拉宁脑心浸液琼脂平皿(BHIA5T)进行hVISA筛选,应用改良菌群分析-曲线下面积(PAP-AUC)法进行确证,报告笔者医院hVISA的发生率.用刚果红琼脂和结晶紫染色法检测hVISA的生物被膜形成能力,微量肉汤稀释法和K-B纸片法检测生物被膜中细菌对抗生素的敏感度.结果经过PAP-AUC方法检测,从139株MRSA中确定1例为hVISA阳性,hVISA的分离率为0.72%.分离出来的hVISA菌株可以形成生物被膜,hVISA菌株的最低抑制生物被膜浓度(MBIC)明显升高,K-B法检测显示它对利奈唑胺和替加环素敏感.同时,研究发现低浓度的万古霉素可能对生物被膜的形成有促进作用.结论笔者医院hVISA的发生率虽然不高,但此菌株可以形成生物被膜,形成生物被膜后细菌对万古霉素敏感度降低,需要引起临床的高度重视,此时可尝试换用利奈唑胺或替加环素.

鼻拭子中异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌的流行情况

目的了解我院住院患者鼻腔拭子中异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌(hVISA)的发生率。方法收集临床57例来自鼻拭子的金黄色葡萄球菌标本,分别采用浓度为2mg/L和4mg/L万古霉素脑心浸液琼脂平皿(BHIA2V、BHIA4V)、浓度为5mg/L替考拉宁脑心浸液琼脂平皿(BHIA5T)和宏量E-test法(MET)进行hVISA筛选,同时应用改良菌群分析-曲线下面积(PAP-AUC)作为hVISA检测的金标准进行确证,从而确定我院hVISA的发生率。结果BHIA2V、BHIA4V和BHIA5T筛选阳性菌株分别为33、0和5株,MET方法阳性菌株数为0,PAP-AUC确证hVISA菌株数为0,因此我院鼻拭子中未分离出hVISA。结论BHIA2V筛选方法假阳性数太高,不适合用于临床hVISA初筛;MET的价格比较高,不适合常规开展;因此我们建议将BHIA4V和BHIA5T作为临床上hVISA的常规筛选方法,筛选阳性结果通过MET方法进行验证,最后通过PAP-AUC确证。虽然从我院鼻拭子中未检出hVISA,但是金黄色葡萄球菌的分离率是比较高的,尤其是ICU和呼吸科监护室的住院患者,这仍然需要引起临床高度重视,合理使用抗生素尤其是糖肽类药物,避免hVISA和VISA的发生。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床特征及耐药分析

目的 分析异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床特征以及对常用抗菌药物的耐药情况,为临床用药以及控制MRSA和hVISA感染提供依据。方法 采用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定和药敏分析仪对临床分离的263株金黄色葡萄球菌进行药敏分析,MRSA菌株的鉴定根据CLSI规则进行;分别采用2、3和4 μg/ml的万古霉素脑心浸液琼脂平皿(BHIA2V、BHIA3V和BHIA4V)对263株金黄色葡萄球菌进行筛选,对筛选阳性的菌株用菌群分析-曲线下面积法(PAP/AUC法)进行确认;回顾性分析263名感染金黄色葡萄球菌患者的临床资料。结果 263株金黄色葡萄球菌中hVISA共22株,检出率为8.4%;MRSA共60株,检出率为22.8%。临床资料显示与甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌组(MSSA组)和万古霉素敏感金黄色葡萄球菌组(VSSA组)相比,MRSA组和hVISA组在不同性别、年龄和科室中的检出均无统计学意义(P>0.05),在不同来源标本中的检出有统计学意义(P<0.05),且都是在血液标本中检出率最高。药敏结果显示金黄色葡萄球菌均对头孢洛林、利奈唑胺、达托霉素、替拉考宁、万古霉素以及米诺环素全敏感。MRSA组对苯唑西林、红霉素、克林霉素、头孢唑林和氯霉素的耐药率高于MSSA组(P<0.05),但对复方新诺明的耐药率低于MSSA组(P<0.05)。hVISA组的苯唑西林、利福平、阿米卡星和头孢唑林耐药率高于VSSA组(P<0.05)。hVISA组对苯唑西林、克林霉素和头孢唑林的耐药率低于MRSA组,但复方新诺明的耐药率高于MRSA组(P<0.05)。结论 临床分离的263株金黄色葡萄球菌中MRSA的检出率为22.8%,hVISA的检出率为8.4%。血液标本中MRSA和hVISA的检出率高于其它来源的标本。临床在治疗由金黄色葡萄球菌引起的感染时可以优先考虑头孢洛林、利奈唑胺、达托霉素、替拉考宁、万古霉素以及米诺环素,但需要警惕是否存在对万古霉素敏感性下降的情况,以便及时调整治疗方案,从而减少hVISA感染的发生。

异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌感染发生率及相关危险因素分析

目的调查复旦大学附属中山医院（中山医院）异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌（hVISA）的发生率，了解hVISA菌群对新型抗生素的敏感性，研究下呼吸道hVISA感染的危险因素和影响病死率的相关因素。方法收集2008年1月至2010年11月中山医院临床分离的甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）菌株，采用脑心浸出液琼脂（BHIA）筛选平板和宏量Etest试条检测法（macroEtest，MET）进行hVISA的筛选，改良菌群分析策略一曲线下面积（PAP—AUC）确证hVISA。肉汤稀释法测定MRSA对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺的最小抑菌浓度（MIC），用SPSSl6．0比较hVISA和万古霉素敏感的金黄色葡萄球菌（VSSA）在不同MIC区间的分布差异。通过病例调查表收集筛选的hVISA病例和VSSA组的临床信息，使用t检验、Mann—Whitney检验、x2检验及Fisher精确检验进行相关危险因素。结果从457株MRSA菌株中经含5mg／L替考拉宁的BHIA（BHIA5T）、含6mg／L万古霉素的BHIA（BHIA6V）法筛选的hVISA为105株（23．0％），MET法筛选出23株hVISA（5．0％），PAP—AUC法确证的hVISA为21株（4．6％）。hVISA对万古霉素和利奈唑胺均敏感，hVISA和VSSA对万古霉素的MIC分别为（1．76±0．16）mg／L和（1．09±0．07）mg／L（P〈0．01），hVISA和VSSA在不同MIC区间的分布差异无统计学意义（P〉0．05）。单因素分析发现，hVISA组合并慢性阻塞性肺疾病者（5／11）明显高于VSSA组（14．3％，P〈0．05），但未发现hVISA感染与临床病死率相关。结论中山医院hVISA的总体发生率为4．6％，血标本中hVISA的发生率高达12．5％。hVISA对万古霉素和利奈唑胺均为敏感，但hVISA的万古霉素MIC高于VSSA者。下呼吸道内发生hVISA感染与慢性阻塞性肺疾病可能有关。

EGCG、ECG对异质性耐万古霉素萄球菌抗药性的逆转作用研究

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）和表儿茶素没食子酸酯（ECG）对异质性耐万古霉素葡萄球菌（h-VRS）耐药性的体外逆转作用，并初步探讨其逆转机制。方法用微量肉汤稀释法测定EGCG、ECG对h—VRS的MIC值；以菌落计数法观察万古霉素在不同浓度EGCG、ECG协同作用下对h—VRS的生长抑制作用；用青霉素结合蛋白（PBP2a）胶乳凝集试验检测EGCG、ECG对待检菌PBP2a生成的抑制效力。结果EGCG、ECG对h-VRS原代菌株的MIC为128～512μg／mL，子代菌株的MIC为256～512μg／mL；在64～1024μg／mL的EGCG、ECG干预下，待测菌株在万古霉素作用下的生长受到明显抑制，生长菌落数降低程度随药物浓度的增加而升高；EOCG、ECG作用后h—VRS原代菌株PBP2a的凝集浓度为128～256μg／mL，子代菌株PBP2a的凝集浓度为32～128μg／mL。结论EGCG、ECG,ECG能够逆转h-VRS对万古霉素的耐药性，通过抑制h-VRS产生PBP2a是其发挥逆转作用的机制之一，是否还存在其它机制有待进一步的研究。

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的检测方法和耐药性分析

目的研究比较异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的几种筛查方法,制定出适合的hVISA的筛查方法。方法收集2018年1月—2019年12月江南大学附属医院临床标本中分离出的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株(MRSA),采用宏量E-test法(MET法)、BHIV3V、BHIV6V及MHA5T法筛查hVISA,最后用菌群曲线分析法(PAP-AUC)确认,比对4种筛查方法的敏感性及特异性。结果538株金黄色葡萄球菌经头孢西丁纸片法筛查出MRSA 266例,MRSA阳性率为49.4%;266株MRSA中经PAP-AUC确认hVISA菌株为17株,检出率为6.4%;MET法筛选出hVISA 21例,其中确认hVISA菌株为14例,敏感性为82.3%,特异性为97.1%。BHIV6V法筛查出hVISA 2株,确认均为hVISA,敏感性为11.8%,特异性100%。BHIV3V法筛查出hVISA 44株,确认为hVISA菌株为11株,敏感性为64.7%,特异性86.7%。MHA5T法筛查出hVISA 56株,确认hVISA为9株,敏感性为52.9%,特异性81.1%。MRSA除对利奈唑胺及万古霉素敏感外,对多种抗菌药物表现为多重耐药。结论本院MRSA检出率为49.4%,高于全国耐药监测网统计数据。hVISA的检出率为6.08%,MET法在敏感性及特异性方面优于其他3种方法,此方法较适合在本院开展hVISA的筛查。检出的MRSA及hVISA除对利奈唑胺及万古霉素敏感外,表现为多种抗菌药物的耐药性,尤其是hVISA具有更高的耐药性,临床治疗时应按照药敏结果选取治疗药物,切勿随意进行经验性用药。

万古霉素对hVISA生物膜构成的影响

目的探讨万古霉素对异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)生物膜构成的影响,及其与万古霉素治疗hVISA失败率高的关系。方法将临床菌株hVISA(05307)和Mu3(ATCC 700698,hVISA的参考菌株)暴露于不同浓度的万古霉素。单独的肉汤和不含抗生素的细菌悬浮液分别作为阴性和阳性对照组。使用结晶紫(CV)染色测量hVISA的生物膜总量,并且使用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察生物膜的三维结构。细胞外基质(ECM)中的蛋白质组分,细胞外多糖黏附素(PIA)和细胞外DNA(eDNA)分别采用直接和间接的方法定量.结果与阳性对照组相比,只有1倍最低抑菌浓度(MIC)的万古霉素处理组增加了hVISA的生物膜总量。另外,各组提取的ECM中PC和蛋白质的表达没有明显区别。加入DNase I处理后,1×MIC万古霉素处理组的生物膜总量被显著抑制到与万古霉素未处理组相近的水平。结论1×MIC的万古霉素诱导的eDNA释放是万古霉素增强hVISA生物膜形成主要因素,这可能是万古霉素治疗hVISA感染失败率高的原因之一。

对疑似异质性耐万古霉素葡萄球菌褥疮治验

报载：2002年初，一名常年卧病在床的褥疮患者被家属送往南昌市第一医院进行治疗，医护人员当即使用各种抗生素为其进行治疗，但仍然不见好转，并且还出现恶化的现象。为此，医护人员迫不得已使出最后的“王牌”抗生素——万古霉素进行治疗，可让所有人都想不到的是，即使如此，患者病情依旧没有起色。一个月后，该名患者终因疾病久治不愈而死亡，医护人员立即对该患者褥疮的分泌物进行了采集，并由专门人员对此进行检测研究，

两株对万古霉素敏感性减低金黄色葡萄球菌的透射电镜下超微结构观察

目的对前期课题筛选出的万古霉素中介金黄色葡萄球菌(vancomycin intermediate Stapylococcus aureus,VISA)及异质性耐万古霉素金黄色葡萄球菌(heterogeneous vancomycin resistant Stapylococcus aureus,hetero-VISA)进行透射电镜下的超微结构观察。方法用KB法、琼脂稀释法和E-test法、菌谱分析法对分离出的VISA和h-VISA进行确认,并用透射电镜法对其进行超微结构观察。结果检测到的VISA和h-VISA经透射电镜观察发现菌株较标准菌株细胞壁增厚,细胞表面粗糙。结论VISA和h-VISA等万古霉素敏感性减低金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药很可能是由于细菌细胞壁增厚所引起的。

对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌研究进展

随着MRSA的越发,万古霉素在临床上的使用越来越频繁,成为治疗MRSA的最后一道防线;然而,对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌的出现,临床上抗感染治疗面临极大困难,引起了医学界普遍的关注。本文对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌的发展,耐药状况,作用机制,相关治疗和热门争议话题等方面的研究进展作一综述。

低水平万古霉素耐药金黄色葡萄球菌的研究进展

近年来，万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌不断增多，给临床抗感染治疗带来新的难题，正确认识万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌对于临床医生及感染控制人员非常重要。本文对低水平万古霉素耐药金黄色葡萄球菌的流行病学、检测、耐药机制及治疗方面做简要综述。

Hetero-VRS检测方法的建立及其临床意义

目的 初步建立异质性万古霉素耐药葡萄球菌(Hetero-VRS)的检测方法,并对其检测的临床意义进行探讨。方法 采用纸片法、万古霉素联合β-内酰胺抗生素快速筛选法和菌谱分析法同时进行Het-ero-VRSA检测。结果 共检测17个对万古霉素敏感性降低的亚克隆,其中只有一个亚克隆的MIC为32μg/ml,其它16个亚克隆的MIC为8-16μg/ml;葡萄球菌对万古霉素的耐药性表现出明显的异质性。结论 万古霉素联合β-内酰胺抗生素快速筛选法和菌谱分析法都是Hetero-VRSA检测的有效方法,后者检测Hetero-VRSA的灵敏度能够达到10-8;纸片法不是Hetero-VRS检测的理想方法;Hetero-VRS的出现,应该引起我国医学界的广泛关注。

葡萄球菌溶酶对h-VRSA溶菌作用观察

目的从金黄色葡萄球菌临床分离菌株中检测异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(heterogeneous vancom yc in-res istan t staphy lococcus aureus,h-VRSA),并考察葡萄球菌溶酶对h-VRSA体外杀菌作用。方法采用E-test法从金黄色葡萄球菌临床分离菌株中筛选h-VRSA,采用棋盘稀释法考察葡萄球菌溶酶单独或联合万古霉素对h-VRSA体外杀菌作用。结果从30株金黄色葡萄球菌临床分离菌株中检测出2株h-VRSA(6.7%),葡萄球菌溶酶联合万古霉素对h-VRSA溶菌作用的部分抑菌浓度指数:F IC<0.5。结论金黄色葡萄球菌临床分离菌株中有h-VRSA存在,其对万古霉素表现出的异质性耐药不容忽视;葡萄球菌溶酶和万古霉素之间有良好的协同作用,其临床应用价值值得进一步探讨。

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌及糖肽类耐药的检测与分析

目的了解中日友好医院临床耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)糖肽类耐药的流行情况和耐药机制,为MRCNS医院感染的预防与控制提供可靠依据。方法头孢西丁纸片法、mecA基因PCR检测MRCNS;万古霉素耐药确证试验筛选对万古霉素敏感性下降的凝固酶阴性葡萄球菌(CNS),E-test法检测其MIC及多重PCR检测其van基因。结果CNS对头孢类、β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、克林霉素类抗菌药物耐药程度较高;52株CNS菌中头孢西丁纸片法与mecA基因检测MRCNS的符合率为96.2%,mecA基因阳性率为92.3%;256株CNS菌中筛选出4株异质性耐万古霉素葡萄球菌(VRS),均为MRCNS,未检出vanA、vanB、vanC1及vanC2基因。结论对VRS和MRCNS进行有效的实验室检测与院内监测并采取有效措施预防与控制其传播是非常重要的。