对疑似异质性耐万古霉素葡萄球菌褥疮治验

报载：2002年初，一名常年卧病在床的褥疮患者被家属送往南昌市第一医院进行治疗，医护人员当即使用各种抗生素为其进行治疗，但仍然不见好转，并且还出现恶化的现象。为此，医护人员迫不得已使出最后的“王牌”抗生素——万古霉素进行治疗，可让所有人都想不到的是，即使如此，患者病情依旧没有起色。一个月后，该名患者终因疾病久治不愈而死亡，医护人员立即对该患者褥疮的分泌物进行了采集，并由专门人员对此进行检测研究，

异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌的分子分型和同源性分析

目的了解滨州医学院附属医院异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌(hVISA)的分子流行病学现状,为有效预防hVISA的传播提供依据。方法采用万古霉素琼脂平皿筛选法对263株金黄色葡萄球菌进行初筛,菌群分析-曲线下面积(PAPAUC)法对初筛阳性的hVISA可疑株进行确认。采用多位点序列分型(MLST)、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对hVISA菌株进行分子分型和同源性分析。结果本院初筛出113株hVISA可疑株,最终确认为hVISA的菌株共22株。MLST分型以ST72型(5株)为主,其次为ST59和ST25型(各4株);spa分型主要为t002、t437以及t2431(各3株)。PFGE聚类分析共得到12种PFGE型别,命名为H1-H12型,相似值处于62.6%~100%之间,其中最主要的是H3型(共6株),其次为H1型(共4株)。结论hVISA在本院为散发,22株hVISA菌株共检出10种ST型,14种spa型和12种PFGE型。本院hVISA菌株的主要流行克隆为ST72-t2431-H3型,且均来源于儿科,儿科可能存在ST72-t2431-H3型hVISA的流行。

金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药性及耐药基因检测分析

目的探讨金黄色葡萄球菌(SA)对万古霉素的耐药性及耐药基因分布情况。方法收集平顶山市第一人民医院2020年4月至2022年3月临床送检样本分离的288株SA菌株,采用Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定和药敏系统以及纸片扩散法进行菌落鉴定与药敏试验;采用聚合酶链反应检测pbp4、mgrA、agr、vraS、vraR、icaA、icaR基因表达。结果288株SA菌株中筛选出25株万古霉素异质性耐药金黄色葡萄球菌(hVISA)菌株,hVISA阳性率为8.68%,未检测到万古霉素中介耐药金黄色葡萄球菌(VISA)菌株和万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)菌株;万古霉素敏感金黄色葡萄球菌(VSSA)菌株万古霉素最小抑菌浓度(MIC)主要分布在0.50 mg/L和0.75 mg/L,占比为41.83%和28.90%;hVISA菌株万古霉素MIC主要分布在1.50 mg/L和2.00 mg/L,占比为56.00%和28.00%;VSSA菌株pbp4、agr、icaR的相对表达量均低于hVISA菌株(P<0.05),而mgrA、vraS、vraR、icaA的相对表达量均高于hVISA菌株(P<0.05)。结论本次调查hVISA两年总流行率为8.68%。与VSSA菌株比较,hVISA菌株pbp4、agr、icaR、mgrA、vraS、vraR、icaA基因表达存在差异,可能与万古霉素的耐药性有关。

金黄色葡萄球菌异质性耐药研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是人类和动物感染的常见病原菌。近年来,金黄色葡萄球菌已经对多种抗菌药物出现耐药性,关于金黄色葡萄球菌异质性耐药的研究也被频繁报道。异质性耐药现象是指存在异质性细菌种群,其中一个亚群或几个亚群与主要种群相比表现出更高水平的抗菌药物耐药性。该定义反映出异质性耐药现象具有很多特点,包括克隆性、稳定性、不同亚群的耐药水平以及异质性耐药亚群的频率应在10^(-7)及以上。异质性耐药可看成是敏感表型向耐药表型转化的中间阶段,往往导致临床治疗的失败。本文对异质性耐药的定义、检测方法等进行了介绍,并综述了金黄色葡萄球菌对糖肽类、磺胺类、β-内酰胺类和其他抗菌药物异质性耐药的流行情况及异质性耐药机制的研究,旨在加强对金黄色葡萄球菌异质性耐药的认识,以期为学者了解金黄色葡萄球菌异质性耐药流行情况及机制提供参考。

N-乙酰半胱氨酸联合万古霉素对耐甲氧金黄色葡萄球菌及其生物膜的清除作用研究

目的探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)联合万古霉素(Vancomycin,VA)对体外建立的耐甲氧金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)生物膜的影响。方法(1)以实验室标准菌株耐甲氧金黄色葡萄球菌(BAA-1556,ATCC)作为研究对象,通过结晶紫染色法,确定其最大面积生物膜生成时间。(2)建立实验分组,分别为空白对照组、万古霉素组、乙酰半胱氨酸组、万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组、万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组。通过结晶紫染色法评价生物膜相对面积大小。通过LB-琼脂培养板计数法测算生物膜内残余细菌数量。通过扫描电镜以及激光共聚焦显微镜下观察不同组MRSA细菌生物膜形态变化。结果(1)MRSA菌在48 h可形成成熟的生物膜结构。(2)MRSA菌在各分组载体表面形成生物膜的半定量结果(波长=590 nm)分别为空白对照组1.32±0.60,万古霉素组1.05±0.15,乙酰半胱氨酸组0.53±0.20,万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组0.35±0.11,万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组0.29±0.10。证实NAC可显著减少生物膜面积。(3)24、48、72 h时间段生物膜内残余细菌量为空白对照组>乙酰半胱氨酸组>万古霉素组>万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组>万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。证实VA与NAC联合应用可以提高生物膜内细菌的清除率。(4)空白对照组存在大量活/死细菌共同构成的细菌生物膜;乙酰半胱氨酸组虽有较多活菌分布,但死菌黏附以及生物膜面积明显减少;万古霉素组存在着大量死菌黏附于载体表面,构成生物膜,与部分活菌共存;万古霉素+乙酰半胱氨酸低剂量组活/死细菌分布明显减少;万古霉素+乙酰半胱氨酸高剂量组生物膜面积极少,仅有少量活菌黏附于载体表面,且呈单个分布。结论NAC对体外生成的MRSA菌生物膜有着清除作用,与VA联合应用可显著提升对生物膜内细菌的清除率。

人参皂苷Rh2联合万古霉素对万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜和抑菌效果的影响

目的 研究人参皂苷Rh2联合万古霉素对万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜和抑菌效果的影响。方法 诱导万古霉素耐药型耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(VRSA),分别用10μg/m L、30μg/mL、90μg/m L人参皂苷Rh2处理VRSA作为不同浓度人参皂苷Rh2处理组;VRSA分别用1μg/mL、4μg/mL、16μg/mL万古霉素处理,作为不同浓度万古霉素处理组;10μg/mL人参皂苷Rh2和1μg/mL万古霉素共同作用VRSA记为10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组;不作处理的VRSA作为空白对照组。原始分离的对万古霉素敏感型的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作为VSSA组。结晶紫法检测生物膜形成能力;实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测fnbA、atlA表达水平;分光光度计检测菌活性。结果 与VSSA组比较,VRSA组生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,16μg/mL万古霉素及10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素处理的VRSA增殖活性明显降低,而10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素处理的VRSA增殖活性明显低于不同浓度人参皂苷Rh2处理组,且明显高于4μg/mL万古霉素处理者,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,不同浓度人参皂苷Rh2处理的VRSA生物膜的光密度值明显降低,fnbA、atlA的表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,不同浓度万古霉素处理的VRSA中fnbA、atlA表达水平显著升高,4μg/mL和16μg/mL万古霉素处理的VRSA生物膜的光密度值也明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,10μg/mL人参皂苷Rh2组及10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组VRSA生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平明显降低,fnbA、atlA的表达水平明显升高,且10μg/mL人参皂苷Rh2+1μg/mL万古霉素组VRSA生物膜的光密度值及fnbA、atlA的表达水平均显著高于10μg/mL人参皂苷Rh2组,但明显低于1μg/mL万古霉素组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 人参皂苷Rh2可抑制VRSA生物膜形成,但不抑菌;万古霉素可抑菌但不能抑制生物膜形成,两者联用能抑制生物膜形成且增强万古霉素的抑菌作用。

万古霉素异质性耐药葡萄球菌的分离及其药物敏感性分析

目的 调查葡萄球菌对万古霉素异质性耐药亚群发生频率以及对常见抗生素的药物敏感性。方法 利用菌群分析法筛选万古霉素异质性耐药葡萄球菌亚群 ,Microscan Microbiology System对萄萄球菌分型和鉴定并分析对 19种常用抗生素的药物敏感性。结果 115株耐甲氧西林的葡萄球菌 ,9株对万古霉素耐药亚群的 MIC8～ 12 mg/ L,其发生频率为 10 - 4～ 10 - 7,其中 3株金葡球菌 ,6株溶血性葡萄球菌。传至 7代后万古霉素 MIC6 4 mg/ L。对 19种抗生素药敏显示 ,万古霉素敏感 2株、中介 7株 ,敏感率 2 2 .2 % ;利福平敏感7株 (MIC≤ 1mg/ L)、中介 1株 (MIC=2 mg/ L)及耐药 1株 (MIC>2 mg/ L)、敏感率 77.8% ;SMZ/ TMP敏感 6株 (MIC≤ 2 / 38mg/ L)、耐药 3株 (MIC>2 / 38mg/ L) ,敏感率 6 6 .7% ;克林霉素敏感 3株 (MIC=0 .5或≤ 0 .2 5 )、耐药 6株 (MIC>2 mg/ L) ,敏感率 33.3% ;四环素敏感 3株 (MIC≤ 2 mg/ L)、耐药 6株 (MIC>8mg/L) ,敏感率 33.3% ;左氧氟沙星敏感 1株 (MIC≤ 2 mg/ L)、耐药 8株 (MIC>4 mg/ L) ,敏感率 11.1%。其余 13种抗生素耐药。结论 下呼吸道分离的葡萄球菌存在一定频率的对万古霉素异质性耐药株 ,可能是万古霉素治疗失败的原因之一 ,利福平、SMZ/ TMP具有较好的敏感性 。

一株携带VanB基因的异质性耐万古霉素表皮葡萄球菌的发现

目的:利用NCCLS推荐的菌群分析法对南昌地区收集到的耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)进行异质性耐万古霉素葡萄球菌的筛查,并对筛查到的菌株进行耐药基因检测和病案回顾性分析。方法:利用NCCLS推荐的菌群分析法进行异质性耐万古霉素菌株的筛查;利用聚合物酶链反应PCR法进行耐万古霉素VanA、VanB、VanC1、VanC2/3检测。结果:从一位患者的褥疮分泌物中分离到的一株异质性耐万古霉素葡萄球菌(代号H40)并检测出了耐万古霉素VanB基因。本研究中所测得的VanB基因序列已登录于NCBI,登录号为:AY960704。结论:异质性耐万古霉素葡萄球菌中检出VanB基因应属首例。

异质性耐万古霉素溶血葡萄球菌的抗生素后效应研究

目的检测万古霉素对异质性耐万古霉素溶血葡萄球菌(heterogeneous-vancomycin-resistant Staphylococcus haemolyticus,h-VRSH)的抗生素后效应(postantibiotic effect,PAE),探讨h-VRSH的存在对万古霉素体外杀菌活性的影响。方法采用微量稀释法检测金葡菌标准菌株ATCC29213和h-VRSH(原代培养)的最低抑菌浓度(MIC),以菌落平板计数法检测最低杀菌浓度(MBC)和PAE;分析万古霉素对h-VRSH耐药性产生的影响,以及这种耐药性的稳定性。结果金葡菌ATCC29213的MIC和MBC分别为1和16μg/ml,h-VRSH(原代)的MIC和MBC分别为2和64μg/ml;两者PAE分别为0.9和2.4h。结论与敏感菌株不同,h-VRSH的PAE明显延长;原代培养MIC为2μg/ml的h-VRSH其MBC可达到64μg/ml,高于万古霉素有效血药浓度峰值(20～40μg/ml),提示单独使用万古霉素已经不能完全清除h-VRSH,葡萄球菌对万古霉素的异质性耐药不容忽视。

下呼吸道分离葡萄球菌对万古霉素异质性耐药

【目的】探讨万古霉素体外敏感,体内治疗失败的原因。【方法】选择本实验室1997年至1999年下呼吸道分离的115株耐甲氧西林葡萄球菌,用美国临床实验室标准委员会推荐的M-H琼脂板稀释法测定对万古霉素的敏感性;脑心浸液琼脂诱导对万古霉素异质性耐药株,用生物梅里埃公司APIStaph系统鉴定菌型;进一步用E-Test试条检测万古霉素敏感性。【结果】115株耐甲氧西林葡萄球菌对万古霉素敏感性下降34株(MIC>4mg/L):金黄色葡萄球菌13株,溶血葡萄球菌7株,松鼠葡萄球菌7株,表皮葡萄球菌3株,人葡萄球菌3株,产色葡萄球菌1株。万古霉素高度异质性耐药9株:金黄色葡萄球菌3株,溶血葡萄球菌6株;E-Test拭条在脑心浸液琼脂板中万古霉素异质性耐药葡萄球菌显示双重抑菌环。【结论】对万古霉素异质性耐药可能是万古霉素治疗医院内耐甲氧西林葡萄球菌感染失败的重要原因之一。

耐甲氧西林葡萄球菌及异质性万古霉素中介的检测与分析

目的了解某院住院患者耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)感染状况和异质性万古霉素中介葡萄球菌(h-VIS)分离率。方法选择住院感染患者标本分离的葡萄球菌,采用BDphoenix^(100)微生物自动分析系统进行鉴定及药敏试验,并以头孢西丁纸片扩散法检测MRS,肉汤稀释法测定无菌体液及分泌物标本分离的41株MRS对万古霉素的敏感性;脑心浸液琼脂诱导异质性万古霉素中介株,进一步用E-test试条检测万古霉素敏感性。结果 239株葡萄球菌中有160株MRS,痰液、脓液、血液及胸腹腔积液标本是其主要来源,耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌均呈多重耐药性,但对利奈唑胺、呋喃妥因敏感率为100.00%,未发现对万古霉素高度耐药株。患者无菌体液及分泌物h-VIS检出率为14.63%(6/41),其中金黄色葡萄球菌的分离率为7.14%(1/14),血浆凝固酶阴性葡萄球菌分离率为18.52%(5/27)。结论准确检测出MRS和h-VIS,对临床有效控制感染极为重要。

万古霉素耐药折点调整对异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌筛选方法的影响

目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(金葡菌)(MRSA)对万古霉素耐药的折点调整后,对异质性万古霉素中介金葡菌(h VISA)的平皿筛选方法选择的影响,寻求一种敏感、有效的平皿筛选方法。方法收集临床MRSA菌株215株,分别用浓度为6 mg/L、4 mg/L、2 mg/L万古霉素脑心浸液琼脂平皿(BHIV6、BHIV4、BHIV2)及浓度为5 mg/L替考拉宁脑心浸液琼脂(BHIT5)进行h VISA筛选,同时应用菌群分析/曲线下面积(PAP/AUC)法检测h VISA,以PAP/AUC法作为金标准,对比上述4种平皿筛选方法的敏感度及特异度。结果 PAP/AUC检测h VISA的阳性菌株分别为12株,BHIV6、BHIV4、BHIV2、BHIT5筛选阳性菌株分别为6、18、54、20株;以PAP/AUC法作为金标准,上述4种平皿筛选方法灵敏度分别为41.7%、83.3%、91.7%、83.3%,特异度分别为99.0%、95.9%、77.8%、94.8%。结论 MRSA对万古霉素耐药折点调整后,BHIV6筛选法灵敏度较低、BHIV2筛选法特异度较低,不应作为h VISA的筛选方法,BHIV4和BHIT5平皿筛选法灵敏度和特异度均较高,可作为万古霉素耐药折点调整后对h VISA的常规筛选方法。

异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌的抗生素后效应

目的 了解异质性万古霉素耐药金黄色葡萄球菌（h-VRSA）对万古霉素的抗生素后效应（PAE）等药代动力学特点，探讨h-VRSA的存在，对万古霉素的杀菌活性及其临床应用方面的影响。方法 分别检测ATCC29213和h-VRSA（原代培养）的最低抑菌浓度（MIC）、最低杀菌浓度（MBC）以段PAE。结果 ATCC29213的MIC和MBC分别为1μg/ml和16μg/ml，h-VRSA（原代）的MIC和MBC分别为2μg/ml和64μg／ml；两者PAE分别为0.9h和2．2h、结论 与ATCC 29213不同,hVRSA的PAE明显延长；MIC为2μg／ml的h-VRSA其MBC可以达到6μg/ml．已经高于万古霉素的有效血药浓度峰值（20～40）μg／ml；提示单独使用万古霉素已经不能完清清除h-VRSA．

美罗培南与万古霉素治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的疗效、炎性因子及安全性分析

目的:分析探讨美罗培南与万古霉素治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的疗效、炎性因子及安全性。方法:选取2021年8月—2022年8月南宁市第十人民医院收治的130例MRSA感染患者分为对照组、观察组,各65例。对照组以美罗培南治疗,观察组采用万古霉素治疗。评估比较两组患者临床疗效、细菌清除率、炎症因子、生活质量、治疗安全性等。结果:观察组总有效率、MRSA细菌总清除率高于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组炎症因子白介素-17A(IL-17A)、Toll样受体4(TLR4)、分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)水平均低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组生活质量综合评定问卷(GQOLI-74)评分均高于对照组(P<0.05)。治疗期间,两组不良反应发生率无统计学差异(P>0.05)。结论:与美罗培南相比,万古霉素治疗MRSA感染的疗效和细菌清除率更好,可降低IL-17A、TLR4、SFRP1水平,提高生活质量,不良反应较低。

万古霉素单用及联合利福平或磷霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌防耐药突变浓度的研究

目的在体外探讨万古霉素单用及其分别与利福平、磷霉素联合使用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)防耐药突变浓度的影响,为防止细菌耐药的产生提供理论依据。方法应用肉汤法富集浓度为1010 CFU.ml-1细菌,琼脂平板倍比稀释法测定上述抗菌药物单用及联合使用对10株MRSA临床分离株的防耐药突变浓度,并计算相应的选择指数和耐药频率。结果万古霉素单用对上述10株MRSA的选择指数为16～64;分别与利福平、磷霉素联合使用选择指数下降为2～16和1～8,联合用药较单独用药选择指数下降2～32倍,其耐药频率也大幅下降。结论万古霉素分别与利福平、磷霉素联合使用均可降低其单用对MRSA的防耐药突变浓度,缩小耐药突变选择窗,防止耐药突变菌的产生。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对万古霉素敏感性的监测

目的 为了引起广大医务人员高度重视耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)对万古霉素敏感性的监测 ,掌握其耐药特性 ,依据药敏结果合理使用抗菌药物 ,延缓其耐药性的产生。方法 采用美国Microscan微生物鉴定仪、革兰阳性菌鉴定药敏复合板 (PC11) ,对 1998～ 2 0 0 0年分离的MRSA对万古霉素敏感性的监测。结果 1998～ 2 0 0 0年分离的MRSA菌株中 ,有 4株对万古霉素敏感性降低 ,其中 1株对万古霉素的MIC =8μg/ml;3株对万古霉素的MIC >16 μg/ml。结论 在我院监测中出现 1株万古霉素中介敏感金黄色葡萄球菌(VISA) ;3株万古霉素耐药金黄色葡萄球菌 (VRSA) ,药敏结果显示多重耐药。