松果菊苷及异麦角甾苷对神经细胞尼古丁受体表达的影响

目的研究肉苁蓉活性成分松果菊苷及异麦角甾苷对神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞神经型尼古丁受体表达的影响及其对抗β淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性作用机制,以了解其神经保护作用机制。方法比色法测定细胞MTT还原率筛选松果菊苷及异麦角甾苷安全浓度范围,并用Aβ25-35处理细胞后,测定MTT还原率,蛋白质印迹法(Western blot)测定尼古丁受体α3、α7蛋白表达的变化。结果松果菊苷及异麦角甾苷能提高细胞α3及α7神经型尼古丁受体亚单位蛋白质表达水平,呈剂量依赖关系;并能对抗Aβ25-35引起的α3和α7受体亚单位蛋白质水平降低,减弱Aβ25-35引起的细胞损伤。结论松果菊苷及异麦角甾苷可能通过上调神经型尼古丁受体亚单位蛋白来发挥神经保护作用,在阿尔茨海默氏病的治疗中可能起到一定作用。

肉苁蓉中异麦角甾苷标准品的制备及含量测定

目的研究肉苁蓉中异麦角甾苷标准品的制备及含量测定方法。方法运用半制备高效液相色谱法分离纯化异麦角甾苷,采用薄层色谱法和高效液相色谱面积归一化法检测纯度,波谱法鉴定其结构,反相高效液相色谱法测定肉苁蓉药材中异麦角甾苷的含量。结果制备的化合物鉴定为异麦角甾苷,纯度为98.8%;其质量在0.22～1.31μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 5,平均回收率为101.51%,RSD=1.79%(n=9)。结论该制备方法效率高,所得化合物纯度高,可用于大量制备;含量测定方法准确、简便、可靠,重复性好。

肉苁蓉中异麦角甾苷的制备及含量测定

目的：研究中药肉苁蓉中异麦角甾苷标准品的制备及含量测定方法。方法：采用微晶纤维素色谱与半制备高效液相色谱组合分离技术，分离纯化异麦角甾苷，采用薄层色谱法和高效液相色谱面积归一化法检测纯度，波谱法鉴定其结构，反相高效液相色谱法测定其含量。结果：制备的化合物鉴定为异麦角甾苷，纯度为98．6％；含量测定在0．21841．308 μg，呈良好线性关系，r=0．9995，平均回收率为102．8％，RSD为2．60％，n=6。结论：该制备方法效率高，所得化合物纯度高，可用于大量制备；含量测肉苁蓉，定方法准确，简便，可靠，重复性好。

异麦角甾苷对肺癌细胞A549凋亡和氧化应激的影响

目的探讨异麦角甾苷(ISO)对A549细胞凋亡和氧化应激的影响。方法CCK-8实验检测细胞的活力;A549细胞分为ISO 0、5、10和20μmol/L 4组,克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位变化;Western印迹检测凋亡相关蛋白的表达;试剂盒检测细胞中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果与ISO 0μmol/L组比较,ISO 10μmol/L及以上浓度均显著降低A549细胞活力(P<0.05),ISO 10和20μmol/L组抑制A549细胞的增殖(P<0.05),促进细胞的凋亡(P<0.05),降低细胞线粒体膜电位,上调Bax/Bcl-2和Caspase-3蛋白表达,下调c-Myc蛋白表达(P<0.05),促进氧化应激(P<0.05)。结论ISO能抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡和氧化应激。

车前草中苯乙醇苷类化合物的抗氧化活性研究

采用Folin-Ciocalteu法测定样品中的总多酚含量,并采用PCL和DPPH2种不同的抗氧化活性体外评价体系,对车前草80%乙醇提取物以及从中分离得到的3个苯乙醇苷单体化合物,麦角甾苷、异麦角甾苷和Plantamajo-side的抗氧化活性进行了系统研究。研究结果表明:车前草80%乙醇提取物、麦角甾苷、异麦角甾苷和Plantamajoside都具有良好的抗氧化活性。

车前子中苯乙醇苷化合物抗氧化活性研究

采用PCL和FRAP两种不同的抗氧化活性体外评价体系,对车前子80%乙醇提取物以及从中分离得到的两个苯乙醇苷单体化合物,麦角甾苷和异麦角甾苷的抗氧化活性进行了系统研究。研究结果表明:车前子80%乙醇提取物,麦角甾苷和异麦角甾苷都具有良好的抗氧化活性,而且证明车前子80%乙醇提取物的抗氧化活性主要来自这2个化合物的贡献。

肉苁蓉中苯乙醇苷化合物的抗氧化活性研究

[目的]对肉苁蓉药材中苯乙醇苷化合物的抗氧化活性进行系统分析研究。[方法]采用Photochemiluminescence(PCL)和2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH)2种不同的体系,测量肉苁蓉80%乙醇提取物以及麦角甾苷、异麦角甾苷、松果菊苷的抗氧化活性。[结果]松果菊苷总多酚的含量最高,其次为麦角甾苷、异麦角甾苷和肉苁蓉80%乙醇提取物,分别为753.95、659.94、356.14、14.73mg没食子酸/g。在PCL试验中,肉苁蓉80%乙醇提取物表现出比较强的抗氧化活性,其次为松果菊苷、麦角甾苷和异麦角甾苷;而在DPPH试验中,麦角甾苷表现出较强的抗氧化活性,其次为松果菊苷、异麦角甾苷和肉苁蓉80%乙醇提取物。[结论]该研究可为肉苁蓉药材中苯乙醇苷化合物的药理和生物活性研究提供参考。

RP-HPLC法同时测定车前子中4种主要成分的含量

目的:建立反相高效液相色谱法同时检测车前子中京尼平苷酸、车前素、麦角甾苷和异麦角甾苷4种主要成分的含量。方法:采用Dikma Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.05‰甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~30min,5%~90%A),流速为1.0mL·min^-1,检测波长为205nm,柱温25℃。结果:京尼平苷酸、车前素、麦角甾苷和异麦角甾苷之间的分离度良好;各成分质量与峰面积在测定范围内均呈良好的线性关系(r>0.9998);平均加样回收率(n=6)分别为98.17%(RSD=3.55%)、104.36%(RSD=3.77%)、98.97%(RSD=4.35%)和97.63%(RSD=3.12%)。结论:该实验开发的方法可成功应用于车前子中4种主要成分的分析。

胶束毛细管电泳法测定管花肉苁蓉中活性成分

目的建立测定松果菊苷、毛蕊花糖苷、异麦角甾苷、2'-乙酰基麦角甾苷的胶束毛细管电泳方法。方法高效毛细管电泳仪采用PDA检测器,紫外检测波长为214 nm,分离使用内壁未涂覆的石英毛细管,60.2 cm×75.0μm,有效长度为50.0 cm。研究运行电解质及胶束浓度对分析的影响。结果在100mmol/L硼砂、40mmol/L十二烷基硫酸钠,18kV的胶束毛细管电泳分离电压条件下,实现了对上述活性分析物的有效分离。结论此胶束毛细管电泳方法准确、简单、快速,可用于新疆产管花肉苁蓉中上述活性成分的测定及肉苁蓉的质量控制。

鹿茸草中3种苯乙醇苷的分离制备工艺研究

目的利用大孔吸附树脂以及动态轴向分离技术,建立鹿茸草Monochasma savatieri中3种苯乙醇苷类化合物麦角甾苷(acteoside)、异麦角甾苷(isoacteoside)、torenoside B的最佳分离制备工艺。方法通过静态吸附与解吸附实验和动态分离实验,研究8种常用大孔树脂AB-8、D101、HPD100、LSA-10、LX-11、LX-17、LX-38、XDA-6对该类化合物的分离特性,选出最佳大孔树脂类型;采用所选最佳大孔树脂对3种苯乙醇苷类化合物的纯化工艺参数进行优化。经放大实验得到总苯乙醇苷,再经动态轴向分离得到3种苯乙醇苷类化合物单体。结果优化出的最理想大孔树脂为LX-17;优选的最佳上样质量浓度为原药材1.8 g/m L;最佳吸附时间为150 min;洗脱条件为乙醇-水系统,体积流量为2.5 m L/min,梯度浓度依次为纯水(4 BV)、15%乙醇(4 BV)、60%乙醇(5 BV)以及90%乙醇(2 BV);随后放大10倍进行中试,得到总苯乙醇苷部位,得率为5.25%,其中麦角甾苷15.24%、异麦角甾苷32.14%、torenoside B 29.33%;5 g总苯乙醇苷部位经动态轴向压缩制备柱纯化出3种苯乙醇苷单体成分,分别为麦角甾苷0.127 g,得率2.54%,质量分数为92%;异麦角甾苷0.894 g,得率17.88%,质量分数为95%;torenoside B 0.962 g,得率19.24%,质量分数为98%。结论 LX-17型大孔树脂可作为纯化苯乙醇苷的较佳分离材料,经过优化的分离工艺稳定可靠,有望在工业化生产中推广应用。

五神汤中化学成分研究

目的基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS/MS联用技术研究中药复方五神汤中的化学成分,归纳总结不同类型化合物的裂解规律。方法采用ShiM-pack XR-ODS C_(18)色谱柱(75 mm×3.0 mm,2.2μm),流动相为乙腈(B)-水(A),梯度洗脱;体积流量0.5 mL/min;柱温30℃;电喷雾离子源(ESI),在正、负离子模式下对五神汤提取液进行质谱检测。结果从五神汤提取液中分析鉴定出95个化合物,包括27个黄酮类、15个酚酸类、11个环烯醚萜类、5个香豆素类、5个生物碱类、4个苯乙醇苷类以及28个其他类化合物,并对金丝桃苷、木犀草苷、新绿原酸、京尼平苷酸、马钱苷酸、毛蕊花糖苷、异麦角甾苷、秦皮甲素等主要化学成分进行裂解规律解析。结论建立的方法准确可靠,揭示了中药复方五神汤的潜在有效成分。

凌霄花HPLC-ELSD指纹图谱的研究

目的:采用HPLC-ELSD法构建凌霄花药材的指纹图谱,并对其主要成分进行鉴定。方法:采用Thermo C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.8 m L·min-1,柱温30℃,ELSD漂移管温度105℃,氮气流速3.5 L·min-1。结果:对不同产地的10批凌霄花药材进行分析,建立了凌霄花药材HPLC-ELSD指纹图谱,标定共有峰12个。通过对照品指认及HPLC-TQ-MS进一步分析,鉴定出了其中6个色谱峰,分别为麦角甾苷、顺式麦角甾苷或异麦角甾苷、芹菜素、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸。结论:该方法准确可靠、重复性好,可用于凌霄花药材的整体质量评价。