三羟基异黄酮对人多发骨髓瘤细胞的增殖及细胞内NF-κB的影响

目的:研究4′,5,7三羟基异黄酮(Genistein)对人多发骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞的增殖及NF-κB表达的影响。方法:体外培养人多发骨髓瘤细胞株XG1,依据剂量梯度分别给予Genistein,用噻唑蓝染色法(MTT)观察不同药物浓度的Genistein对MM细胞的增殖影响;应用10μg/mL Genistein处理XG1细胞,用免疫组化法观察Genistein处理前后细胞内NF-κB的表达情况。结果:Genistein作用XG1细胞72h,随浓度增加,细胞增殖逐渐下降,半数抑制浓度在11μg/mL左右;Genistein使NF-κB在XG1细胞内重新分布,胞核内NF-κB表达下降。结论:Genistein可能通过下调骨髓瘤细胞核中NF-κB表达来抑制骨髓瘤细胞的增殖。

4,5,6-三羟基异黄酮对原代培养大鼠成骨细胞增殖、分化、钙含量及矿化功能的影响(英文)

背景:骨质疏松症是人类老年时生活质量下降和寿命缩短的主要原因之一,而其发生与成骨细胞和破骨细胞的功能失偶联有关,因而在细胞水平上观察药物对成骨细胞功能的调整作用是评价骨质疏松症防治药物药效的方法之一。目的:了解4,5,6-三羟基异黄酮(Genistein)对体外培养成骨细胞的作用。设计:以大鼠成骨细胞为研究对象的随机对照单盲研究。单位:一所市级医院的检验科。材料:本实验于2001-02/2001-12在北京中日友好医院核医学科同位素室完成。选择10只出生24h的SD大鼠,(购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证编号为SCXK11-00-0008),实验室级别为SPF级。方法:取小鼠头盖骨成骨细胞进行体外培养,应用四氮唑盐(MTT)法、对硝基苯磷酸盐法、原子吸收分光光度法及茜素红染色方法观察Genistein对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶表达、基质钙含量及矿化结节形成的影响。主要观察指标:形态观察、增值率测定、碱性磷酸酶染色、细胞基质钙含量测定、茜素红染色显示矿化结节数。结果:Genistein刺激成骨细胞的增殖,提高了碱性磷酸酶活性,细胞基质钙含量及矿化结节形成的数量增大。结论:Genistein具有刺激体外培养成骨细胞增殖、分化成熟及促进矿化的作用。

大豆苷元和葛根素对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响

目的:植物雌激素对骨改善的作用已经得诸多实验验证,通过观察大豆苷元和葛根素对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响,探讨生化指标与骨钙代谢的关系。方法:2003-06/2004-10在南京师范大学金陵女子学院营养学实验室和东南大学公共卫生学院动物实验室进行动物实验,将60只3月龄清洁级SD大鼠建立去卵巢模型,随机分为青年组、假手术组、去卵巢模型对照组、雌激素对照组、大豆苷元组和葛根素组共6组,每组10只。无菌条件下,对模型对照组、雌激素对照组、大豆苷元组、葛根素组大鼠进行骨代谢去卵巢模型的制备,假手术组不切除卵巢,只切除少许脂肪。术后青霉素抗感染3d,自由饮水、摄食,5d后进行喂养试验。青年组未去卵巢,饲养条件同其他组。每日清晨以10μg/kg体质量剂量己烯雌酚溶液给予雌激素对照组灌胃;以100mg/kg体质量剂量大豆苷元犤纯度为98%的结晶体(安徽农业大学实验室提供)犦给予大豆苷元组大鼠灌胃;以20mg/kg体质量剂量葛根素给予葛根素组大鼠灌胃;模型对照组去卵巢后、假手术组手术后灌胃蒸馏水;青年组不予灌胃。将青年组大鼠3月龄时处死,将其余大鼠置于无菌室动物房中饲养3个月,6月龄时处死,股动脉放血收集血样,分离血清,4000r/min,离心15min,-20℃保存待测。利用Olympuls全自动生化分析仪,偶氮胂Ⅲ法测定血清钙;钼蓝比色法测定血清磷,碱性磷酸酶试剂盒测定血清碱性磷酸酶;采用放免试剂盒,SN-695B型智能放免仪γ测量仪计数大鼠血清雌激素和骨钙素。结果:动物实验60只,在饲养过程中,由于动物去卵巢手术或灌胃操作不当死亡6只,共54只动物进入结果分析。①大豆苷元组、雌激素对照组、葛根素组钙磷比明显高于去卵巢模型组(1.18±0.1,1.3±0.16,1.13±0.13,0.87±0.2,P<0.01),且钙磷比均保持在1.1～1.2左右的较佳状态。②大豆苷元和葛根素组的碱性磷酸酶相对于假手术组明显增高犤(87.5±20.5),(90±10.13),(47.5±22.17)U/L;P<0.05犦;③大豆苷元组和葛根素组的骨钙素相对于假手术组显著增高犤(8.39±0.84),(6.69±2.34),(3.42±0.93)ng/L;P<0.05,0.01犦。结论:去卵巢大鼠属于高转换型骨代谢,补充大豆苷元与葛根素使骨转换持续活跃,可能通过与雌激素受体结合抑制骨的重吸收达到骨改善;雌激素和植物雌激素对骨钙改善的影响在一定程度上受雌激素受体活性的介导。

金雀异黄素和5-FU对人结肠癌细胞株(Colo320)的相互作用的体外观察

目的体外观察金雀异黄素(Gen iste in)和5-氟脲嘧啶(5-FU)合用对人结肠癌细胞株(Colo320)的相互作用。方法采用MTT法利用中效原理判定2药合用的效果。结果2种药物单独应用时随着药物剂量的增加其效应增加,合用时2药大剂量时(>中效浓度)具有拮抗作用,小剂量(<中效浓度)时具有协同作用;2药给药时间及给药顺序都会影响效应的大小。结论上述2种药合用时大剂量时有拮抗作用,小剂量时有协同作用且效应大小与给药时间及给药顺序有关。

三羟异黄酮保护内毒素诱导急性肺损伤实验研究

目的探讨三羟异黄酮对内毒素(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用及作用机制。方法将32只大鼠随机分为4组(每组8只):生理盐水组(S组)、三羟异黄酮组(G组)、LPS组(L组)和三羟异黄酮预处理组(G+L组)。LPS刺激后,观察6 h。以肺湿干重比(W/D)和支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量作为肺损伤的指标。通过检测髓过氧化物酶(MPO)活性及BALF中细胞学分析来评估中性粒细胞的聚集和活性。采用RT-PCR,检测ICAM-1mRNA在肺组织表达的变化。肺组织经HE染色后,观察组织病理学上的改变。结果L组大鼠BALF总蛋白和W/D都较对照组明显升高(P<0.01);同S组比较,在G+L组LPS导致了BALF、肺组织匀浆MPO活性及BALF中PMN数目显著增加(P<0.01);L组大鼠肺组织中ICAM-1mRNA表达水平显著高于S组(P<0.01)。预先给予三羟异黄酮可以非常显著抑制LPS引起这些指标的改变(P<0.05或0.01)。三羟异黄酮预处理也改善了LPS所致肺组织形态学上严重的损伤。上述所有参数在G组与S组间差异无统计学意义。结论三羟异黄酮预处理能够减轻LPS诱导的大鼠急性肺损伤。这种效果可能与其下调ICAM-1的表达而抑制PMN在肺组织的聚集、激活有关。

桩蛋白在TGFβ1诱导人肾小管上皮-间充质转分化中的表达及意义

目的探讨不同浓度重组人转化生长因子β1（rhTGFβ1）诱导人近端肾小管上皮细胞（HKCs cells）发生小管上皮-间充质转分化（TEMT）过程中桩蛋白（Pax）的表达及金雀异黄素（Gen）干预来探讨Pax在此过程中的意义。方法将体外培养HKCs细胞随机分为3组：⑴对照（C）组：无血清培养基（FSM）培养;⑵TGFβ1培养（T）组：分别用含不同浓度的TGFβ1（T5组：5ng/ml,T10组：10ng/ml）的FSM培养;⑶T＋G组：TGFβ110ng/ml＋Gen50μmol/L共同培养。48h后用半定量逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）或免疫组化方法检测HKCs细胞E-cadherin、alpha-smooth muscle（α-SMA）和Pax的mRNA或蛋白表达;Western blot分析Pax蛋白表达变化。结果⑴C组：E-cadherin大量表达,αSMA表达阴性,Pax有基础的表达;⑵T组：E-cadherin表达减少,αSMA及Pax表达增加较C组差异均有统计学意义（P〈0.01）,且T10组较T5组差异有统计学意义（P〈0.01）。⑶T＋G组：E-cadherin表达减少及αSMA和Pax表达增加较T10组差异均有统计学意义（P〈0.01）,较C组差异有统计学意义（P〈0.01）。结论TGFβ1启动并介导HKCs细胞发生TEMT过程中能呈剂量依赖性诱导Pax表达增加;Pax参与TGFβ1诱导的TEMT部分是通过酪氨酸激酶（PTK）途径进行信号转导。