靶向沉默异黏蛋白基因对膀胱癌细胞凋亡的影响及其作用机制

目的探讨siRNA干扰技术靶向沉默异黏蛋白(metadherin,MTDH)基因对膀胱癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用RT-PCR和Western blot分别检测膀胱上皮永生化SV-HUC-1细胞和人膀胱癌BIU-87细胞中MTDH mRNA及其蛋白表达;利用脂质体转染MTDH-siRNA靶向沉默MTDH基因,以RT-PCR和Western blot检测MTDH的沉默效果及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p53和磷酸化Akt(p-Akt)的表达;流式细胞仪检测MTDH基因沉默对BIU-87细胞凋亡的影响。结果 MTDH基因在人膀胱癌BIU-87细胞中m RNA表达(0.82±0.05 vs 0.25±0.03)和蛋白表达(0.42±0.06 vs 0.18±0.05)明显高于膀胱上皮永生化SV-HUC-1细胞(P均<0.05);与NC组相比,siRNA MTDH2组细胞中MTDH2 mRNA(0.31±0.03 vs 1.02±0.03)和蛋白(0.29±0.02 vs 0.48±0.05)的表达、siRNA MTDH3组中MTDH3mRNA(0.22±0.05 vs 1.02±0.03)和蛋白(0.18±0.08 vs 0.48±0.05)的表达显著降低(P均<0.05),且siRNA MTDH3组的降低幅度大于siRNA MTDH2组;siRNA NC组及siRNA MTDH1组差异无统计学意义(P>0.05);靶向沉默MTDH基因后,与NC组相比,siRNA MTDH组BIU-87细胞的凋亡率(38.86%±2.52%vs 9.95%±1.26%)、p53(1.58±0.07 vs 0.61±0.04)及Bax蛋白(0.86±0.06 vs 0.43±0.03)的表达显著升高,p-Akt(0.31±0.03 vs 0.75±0.08)和Bcl-2蛋白(0.35±0.08 vs 1.26±0.12)的表达显著下降,差异有统计学意义(P均<0.05),NC组与siRNA NC差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MTDH基因沉默可能通过上调p53、Bax和下调p-Akt、Bcl-2蛋白的表达诱导BIU-87细胞凋亡。

乳腺癌异黏蛋白的表达对紫杉醇药物敏感性的影响

目的观察异黏蛋白（MTDH）基因转染乳腺癌细胞上调和沉默前后对紫杉醇药物敏感性的影响。方法通过RNA干扰（RNAi）的方法使高表达MTDH细胞株人乳腺癌细胞MCF-7／ADRMTDH基因沉默，同时通过脂质体转染法对MTDH低表达细胞株人乳腺癌细胞MDA—MB-231进行MTDH基因转染；实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）和Westernblot验证两种细胞株的沉默及转染效果，噻唑蓝（MTF）比色法绘制两种细胞株转染前后的生长曲线及对紫杉醇药物敏感性的影响，流式细胞术测定紫杉醇作用转染前后乳腺癌细胞的凋亡。结果MTDH一小干扰RNA（siRNA）-2为沉默效果最佳的siRNA；Real—timePCR及Westernblot结果显示，使MCF-7／ADR细胞MTDH基因沉默后MTDHmRNA和蛋白表达水平分别为1．026±0．126、0．227±0．021和1．419±0．012、0．037±0．013（P〈0．05），证明MTDH沉默成功；而转染高表达MTDH质粒进入MDA—MB-231后，MTDHmRNA和蛋白表达水平分别为1．00±0．00、3．25±0．02和0．48±0．07、1．27±0．08（P〈0．05），证明转染成功；噻唑蓝（MTT）显示沉默MTDH后使MCF-7／ADR细胞增殖受到明显抑制，同时沉默前后8mg／L的紫杉醇在24h对MCF-7／ADR的抑制率分别为（40．72±3．11）％和（70．44±3．84）％（P〈0．05），凋亡率分别为（1．36±0．14）％和（17．21±1．35）％（P〈0．05）；MTDH基因转染后对MDA—MB-231细胞增殖起到促进作用，同时转染前后8mgCL的紫杉醇在24h对MDA—MB-231细胞的抑制率分别为（58．00±0．38）％和（40．52±0．03）％（P〈0．05），凋亡率分别为（24．88±0．37）％和（13．97±0．50）％（P〈0．05）。结论MTDH基因对乳腺癌细胞的增殖具有促进作用，MTDH基因高表达可能与降低乳腺癌细胞对紫杉醇药物的敏感性有关。