致病性弓形杆菌属生物学特性及诊断研究进展

弓形杆菌(Arcobacter)属于弯曲菌科,革兰氏阴性,与弯曲菌(Campylobacter)类似。但不同的是,它在需氧、微需氧和15℃低温条件下均可生长。Arcobacter是一种人畜共患的食源性和水源性病原菌,主要分离自猪肉、牛肉、禽肉等动物性食品和水体。基于对国内外相关文献资料的整理,综述了Arcobacter的生物学特性、分类和分布、分离鉴定方法、致病性和防控措施等方面内容,为深入开展Arcobacter的检测、诊断、防控技术等方面研究提供背景参考。

宁波沿海陆源排污口弓形杆菌属(Arobacter sp.)和梭菌属(Clostridium sp.)的分布特点

弓形杆菌属(Arobacter sp.)和梭菌属(Clostridium sp.)广泛存在于水体和寄生在动物体内,极易造成水体污染和人畜共患病。采用高通量454焦磷酸测序方法对宁波沿海2个重点排污口、8个一般排污口的20个站位水样进行分析,得到1年中的3月、5月、8月和10月份各排污口弓形杆菌属和梭菌属生物的分布情况。研究结果表明:弓形杆菌属检测出两个种,分别是嗜低温弓形杆菌(Arcobacter cryaerophilus)、布氏弓形杆菌(Arcobacter butzleri)。梭菌属共检测出12个种,其中产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)检出次数最高,丁酸梭菌(Clostridium butyricum)次之;排污口的类型是影响弓形杆菌属检出量的重要因素。弓形杆菌属主要分布在氮,磷含量较高的工业排污口和市政排污口,而梭菌属只在3月份的S7宁海西店崔家综合排污口呈现出相对较高的比例(7.5%),其它排污口检出量均在2%以下;弓形杆菌属和梭菌属在10个排污口20个站位4个月份的检出次数呈现正相关性;由季节性的变化引起的气温差异也是影响弓形杆菌属生长的重要因素,弓形杆菌属在5月份的时候检出次数最大,梭菌属适宜生长温度范围较广10—65°C,受温度影响较小。

12株腹泻病人粪便样本中弓形杆菌全基因组结果分析

目的了解腹泻病人粪便中弓形杆菌菌株的遗传信息,分析其毒力和耐药基因,了解其MLST型别。方法采用双孔滤膜法从腹泻病人粪便中分离弓形杆菌,分离到的菌株进行全基因组测序,对其种属信息、毒力基因、耐药基因和MLST分型进行分析。结果12株弓形杆菌中,布氏弓形杆菌7株,嗜低温弓形杆菌5株,基本含有弓形杆菌属常见的毒力基因,耐药基因中外排泵相关基因占多数,ST型均为新型。结论腹泻病人中分离得到的弓形杆菌毒力基因含量丰富,耐药基因预测结果提示其可能具有一定的耐药性。

2018-2019年石家庄市弓形杆菌致病基因的分布及其特征分析

目的调查石家庄地区食品及环境中分离的布氏弓形杆菌和嗜低温弓形杆菌中9种毒力致病基因的分布特征,为进一步有效防控弓形杆菌感染提供依据。方法选择从石家庄地区市售食品中采集并分离鉴定的5株嗜低温弓形杆菌和66株布氏弓形杆菌,运用常规PCR方法扩增毒力基因。结果在71株弓形杆菌中,9种致病基因阳性率分别为cadF 70.42%(50/71)、ciaB 90.14%(64/71)、irgA 2.82%(2/7)、hecA 4.23%(3/7)、hecB 8.45%(6/71)、mviN 85.92%(61/71)、cj134974.65%(53/71)、pldA 83.10%(59/71)、tlyA 87.32%(62/71)。结论石家庄地区市售食品中分离的弓形杆菌大部分携带不同数量的致病基因,存在较大弓形杆菌引发食物中毒的风险,应加强对石家庄地区市售食品弓形杆菌监测。

2021-2023北京市某区748例腹泻病例中弓形杆菌病原特征分析

目的基于腹泻病原学监测进行弓形杆菌分离和病原特征分析,为该病原导致腹泻相关研究提供基础数据。方法收集2021—2023年北京市某区腹泻患者基础信息和临床症状信息,采集患者粪便标本进行弓形杆菌培养并使用荧光聚合酶链式反应(PCR)方法进行鉴定。分离弓形杆菌进行抗生素敏感性检测和全基因组测序并基于序列进行平均核苷酸一致性(ANI)分析、毒力基因分析和核心基因组单核苷酸多态性分析。结果2021—2023年腹泻患者粪便弓形杆菌检出率为0.80%(6/748),2017年在北京某区腹泻监测中检出2株弓形杆菌,荧光PCR鉴定结果均为布氏弓形杆菌。本地区分离到弓形杆菌的8例腹泻患者中的5例同时分离到其他肠道致病菌。从8例腹泻患者中分离的8株弓形杆菌对不同抗生素耐药株数分别为耐四环素7株、耐氟苯尼考6株、耐链霉素6株、耐阿奇霉素5株、耐克林霉素5株,6株菌耐3类或3类以上抗生素;基于基因组序列的ANI分析确定8株菌均为布氏弓形杆菌。结论北京市某区腹泻患者中分离弓形杆菌以布氏弓形杆菌为优势种,弓形杆菌感染者的临床特征以及分离菌株的病原特异性需要增加菌株数量后继续深入研究。

2018-2020年河北省石家庄市腹泻病例中弓形杆菌感染及流行特征分析

目的了解2018—2020年河北省石家庄市腹泻患者弓形杆菌感染及流行特征。方法收集2018—2020年石家庄市两家哨点医院肠道门诊腹泻病例资料并采集粪便标本,采用驱动增强双孔滤膜法进行弓形杆菌的分离培养,利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和16S rRNA基因测序法进行菌种鉴定。结果628例细菌性腹泻患者中弓形杆菌的阳性率为2.71%,17株弓形杆菌中布氏弓形杆菌8株,嗜低温弓形杆菌9株。弓形杆菌检出时间集中在6—10月。除1例为<1岁儿童外,其余16例均为成年人,各年龄段均有感染病例,其中21~30岁占比最高(29.41%)。男性弓形杆菌感染率高于女性。17例中仅1例有发热症状,11例有恶心、腹痛症状。腹泻以水样便为主(82.35%),腹泻次数3~5次/d者占64.71%,>8次/d者占23.53%。病例多为食用家庭自制或餐饮业购买的多种混合食物感染。17例病例中有4例(23.53%)为混合其他病原菌感染,混合其他病原有肠致病性大肠埃希菌、肠聚集性大肠埃希菌、副溶血弧菌和诺如病毒。结论2018—2020年河北省石家庄市部分细菌性腹泻患者是感染弓形杆菌所致,提示相关部门应加强监测和防范。

北京市零售鸡肉标本中弓形杆菌污染初步分析

目的了解北京市零售鸡肉标本中弓形杆菌的污染情况。方法随机购买北京地区6个农贸市场零售鸡肉样本60份,应用驱动增强双孔滤膜法对鸡肉样品进行弓形杆菌的分离培养,利用多重PCR及16S rRNA、rpo B基因测序的方法进行菌株及菌种鉴定。结果 60份零售鸡肉样本弓形杆菌的检出率为73.33%(44/60)。44份阳性标本中,共获得125株弓形杆菌分离株,其中以嗜低温弓形杆菌为主(91.20%),其次是布氏弓形杆菌(8.00%),斯氏弓形杆菌(0.80%)。两种及以上菌种混合污染率为15.00%(9/60)。结论驱动增强双孔滤膜法可有效分离肉类样本中弓形杆菌。本地区零售鸡肉样本中弓形杆菌污染严重,鸡肉中嗜低温弓形杆菌的污染高于布氏弓形杆菌。

臭氧水杀灭弓形杆菌效果及影响因素的研究

目的研究臭氧水杀灭弓形杆菌(Arcobacter)的效果及其影响因素。方法取含菌量为5×105～5×106 cfu/ml的弓形杆菌菌悬液,在不同臭氧水浓度(1.34、2.44、2.88、3.36、3.47、4.03、4.27、4.48 mg/L)、pH值(3、5、7、9、11)、温度(4、20、30、37、60℃)条件下,研究臭氧水对弓形杆菌的杀灭效果。结果固定杀菌时间,随着臭氧浓度的增加,臭氧水对弓形杆菌的杀灭率逐渐升高;当臭氧水浓度≥4.27 mg/L时,杀灭率达到100%。当臭氧水浓度较低(2.44 mg/L)时,随着温度或pH值的升高,杀灭率略有下降;随臭氧水浓度的升高,温度和pH值的影响渐不明显。结论臭氧水杀灭弓形杆菌的效果主要受臭氧水浓度影响,温度和pH值虽对其杀灭效果也存在着一定的影响,但并不起关键作用。

北京市顺义区市售生鲜整鸡中弓形杆菌流行状况及耐药特征分析

目的了解顺义区市售生鲜整鸡中弓形杆菌的污染状况及耐药特征。方法在顺义区农贸市场、超市随机采集零售生鲜整鸡样品60份,应用滤膜法对样品进行弓形杆菌的分离培养,采用基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)及实时荧光定量PCR进行菌株鉴定,并将菌株的质谱图进行聚类分析。采用琼脂稀释法对弓形杆菌分离株进行11种抗生素的耐药性检测。结果60份市售生鲜整鸡样品中弓形杆菌的检出率为26.67%(16/60),且均为布氏弓形杆菌。6月、7月弓形杆菌的检出率明显高于5月。16株弓形杆菌分离株经MALDI-TOF MS聚类,以相对距离1000为节点分为两个簇群,相对距离与菌株相似性呈负相关,聚类图对样品地域来源有一定的提示作用。弓形杆菌分离株对喹诺酮类抗生素耐药严重,对萘啶酸和环丙沙星的耐药率分别为81.25%和43.75%;对庆大霉素(12.50%)、红霉素(12.50%)、阿奇霉素(12.50%)、泰利霉素(12.50%)、链霉素(6.25%)耐药率相对较低。结论顺义区零售生鲜整鸡中弓形杆菌的检出率较高,应警惕因未烧熟煮透和交叉污染导致食源性疾病的风险。

应用纤维膜过滤方法从鱼肠内容物中分离到一株布氏弓形杆菌

目的建立弓形杆菌的分离培养方法。方法通过纤维滤膜过滤的方法对菌悬液过滤,用CCDA平板对弓形杆菌进行分离培养。将分离到的可疑菌落进行分纯培养,然后通过生化和16SrRNA序列分析进行鉴定。结果从鱼肠内容物中分离到一株疑似菌株,对其进行表型生化分析和16SrDNA全序列分析,鉴定该菌为布氏弓形杆菌。结论该检验方法适用于对弓形杆菌进行分离培养。

石家庄市零售鸡肉样品中弓形杆菌污染调查

目的调查石家庄市零售鸡肉中弓形杆菌的污染情况,为石家庄市弓形杆菌分布特征和防控提供基础数据支持。方法从石家庄市市内四区的菜市场、超市、连锁肉店随机购买零售鸡肉样品90份,应用驱动增强动力双孔滤膜法从样品中分离培养弓形杆菌,利用弓形杆菌多重聚合酶链式反应(PCR)检测及测序的方法对分离菌株进行种属鉴定,利用16S rDNA、rpoB基因测序的方法验证菌种鉴定结果。结果 90份鸡肉样品中,60份样品检出弓形杆菌86株,其中嗜低温弓形杆菌49株、布氏弓形杆菌37株,弓形杆菌检出率为66.67%(60/90)。60份阳性样品中,嗜低温弓形杆菌阳性样品45份(75.00%),布氏弓形杆菌阳性样品35份(58.33%)。嗜低温弓形杆菌和布氏弓形杆菌混合感染阳性样品20份,占比为22.22%(20/90)。不同采样点弓形杆菌检出率有较大差异。结论石家庄市零售鸡肉中弓形杆菌污染较重,嗜低温弓形杆菌污染率高于布氏弓形杆菌,两种弓形杆菌混合污染样品率较高。

斯氏弓形杆菌基于基因组序列遗传特征分析

目的获得斯氏弓形杆菌的遗传特征,并对其耐药基因及毒力相关基因进行预测分析。方法对本实验室分离培养的8株斯氏弓形杆菌进行基因组测序并从NCBI和PATRIC数据库中下载全部已完成基因组测序的15株斯氏弓形杆菌的全基因组序列,应用生物信息学软件对23株不同地域、不同宿主来源的斯氏弓形杆菌进行遗传特征分析。结果23株斯氏弓形杆菌中仅3株菌携带耐药基因,且均为β-内酰胺类抗生素耐药基因。所有菌株均含有与免疫逃避、侵袭及运动等相关的毒力基因。与其他菌种弓形杆菌常见的10种毒力基因比对分析发现,本研究中所有斯氏弓形杆菌菌株均含有ciaB、tlyA、cj1349、pldA和mviN基因,2株菌(CNAS12-1和F28)含有iroE基因,均不携带另外4种毒力基因。21.7%(5/23)的菌株包含Ⅵ型分泌系统(T6SS)基因簇,且其与弯曲菌属内的T6SS存在基因组成及排列的差异。结论斯氏弓形杆菌有较高的遗传多样性,部分菌株可能有潜在的耐药和致病特征。

弓(形)杆菌属(Genus Arcobacter)的介绍

在70年代晚期,Ellis氏等叙述从流产牛及猪胎儿分离一种螺形细菌,这些菌株经鉴定为弯曲菌,包括两种生化上不同的组,组1菌株经鉴定为胎儿弯曲菌,组2属于先前未叙述过的一类弯曲菌。其它研究者亦从流产牛与猪胎体。