弓形虫-IgM诊断试剂的研制

目的 对间接酶联免疫吸附法 (EL ISA)法检测人弓形虫 (TOXO) - Ig M的试剂进行优化改良。方法 以自制原材料采用间接 EL ISA法研制 TOXO- Ig M检测试剂 ,对试剂的特异性、精密性、灵敏度以及稳定性进行鉴定。结果 质量检定结果表明 ,该试剂特异性强、本底低 ,能有效消除类风湿因子等干扰因素的影响 ;灵敏度>1∶ 16 0 ;精密性好 ,变异系数 (C.V )均 <15 % ;试剂稳定 ,37℃存放 6天 ,各项指标的变化率不超过 15 %。结论 本试剂盒有较好的特异性、敏感性和稳定性 。

用弓形虫代谢分泌抗原制备间接血凝诊断试剂的研究

用弓形虫代谢分泌抗原 (E/SA)致敏绵羊红细胞制备间接血凝诊断试剂 ,进行人和动物弓形虫病血清抗体检测 ,并用弓形虫虫体抗原致敏的红细胞间接血凝诊断试剂进行对照试验。结果表明 ,在弓形虫阴性、阳性血清检测中 ,弓形虫E/SA间接血凝诊断试剂与弓形虫虫体抗原间接血凝诊断试剂的符合率为 10 0 % ;在人工感染兔血的检测中 ,E/SA致敏的间接血凝诊断试剂比虫体抗原致敏的间接血凝诊断试剂的阳性检出时间提前 2d 。

弓形虫循环抗原诊断试剂的研究

目的 比较弓形虫不同免疫原所制备抗体检测CAg的效果 ,优选高效价的抗体诊断试剂。 方法 制备弓形虫的细胞质抗原 (C)、代谢抗原 (S)。用抗原C、C +S、S及活虫各免疫 2只家兔 ,收集抗血清经纯化而获得IgG抗体 (多抗 )并制备酶标记抗体 ;用上述 4种多抗与多抗 -HRP组合成 16种双抗体夹心型ELISA ,检测人血清CAg和C、S抗原 ,评价试剂的敏感性 ;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验 ,评价试剂的特异性。结果 各种ELISA夹心法同步检测CAg阳性样本 7例 ,阴性样本 8例 ,均未出现假阴性和假阳性反应 ,其OD均值的P/N比值依次为C +C组 33 5、S +S组 2 7 8、CS +CS组 2 1 2、P +P组 13 2 ;C和S抗原的最低检出量均为 0 5 μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应。 结论 (1) 4种抗体用于检测人血清CAg、C和S抗原以及其它抗原的结果表明 ,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性 ,其中以抗C抗体试剂最为满意。 (2 ) 16种组合形式的夹心ELISA ,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义 ,表明弓形虫C和S抗原间存在着共同抗原成分。

ELISA三联诊断试剂盒应用于猪弓形虫病的调查

1978—1981年期间,我县部分地区曾流行猪弓形虫病,为掌握该病流行情况,我们采用了省医学研究院寄生虫病研究所提供的ELISA 三联诊断试剂盒,对曾发生过猪弓形虫病流行的疫区和一些假定非疫区,作了血清流行病学调查,并对 E LISA 操作的有关技术因素进行了探讨,通过实践应用,证明ELISA 三联诊断试剂盒可以作为猪弓形虫病流行病学调查及疾病的监测,现将结果报告如下。

盐析法提纯弓形虫抗原ELISA诊断试剂盒的应用效果

盐析法提纯弓形虫抗原ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒的应用效果崔君兆，郑挺，谢丽群，吕元聪，章玲珠（广西卫生防疫站南宁５３００２１）目前国内检测弓形体抗体的ＥＬＩＳＡ试剂盒一般是用虫体裂解抗原￣［６，７，８］，存在着抗原产量少，制备过程复杂，不利推广等缺点，虽有...

弓形虫循环抗原诊断试剂的研制

浙江省医学科学院寄生虫病研究所傅翠娥等,对弓形虫循环抗原诊断试剂进行了研究。首先制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S)。然后用抗原C、C+S、S及活虫各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得IGg抗体(多抗)并制备酶标记抗体;

实验小鼠豚鼠弓形虫抗体ELISA试剂盒的研制及应用

本文研究了快速、特异性强、敏感性好的弓形虫抗体ELISA诊断试剂盒。IHA、IFAT和ELISA平行检测3份阳性血清和30份阴性血清，符合率均为100％。IHA和ELISA检测61份小鼠和84份豚鼠血清，结果表明ELISA法敏感于IHA.用本ELISA诊断试剂共检测了319份血清，小鼠阳性率为0．67％，豚鼠为2．22％，说明弓形虫在实验小鼠、豚鼠中感染率很低。

弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫免疫检测中的应用

目的评价弓形虫多表位基因重组抗原在弓形虫感染诊断中的效果,探索多表位抗原在弓形虫免疫检测中的应用前景。方法以Ni-NTA Agarose和割胶电渗两步纯化法,获取弓形虫多表位基因的原核表达纯化产物rMAG,以适宜浓度的rMAG包被ELISA微孔板,分别检测弓形虫急性和慢性感染血清,评价试剂盒检测的敏感性和特异性。结果经Ni-NTAAgarose和割胶纯化,得到了纯度为95.86%的弓形虫多表位重组可溶性抗原。以3!g/ml的抗原浓度包被ELISA微孔板,对兔和小鼠的急慢性弓形虫感染血清进行了检测。结果检测小鼠血清141份,其中慢性感染弓形虫小鼠血清117份、正常小鼠血清24份,检测体系的敏感性为88.88%,特异性为91.67%,一致性为89.36%。检测兔血清24份,其中急性感染弓形虫兔血清18份,正常兔血清6份,阳性血清检出率为94.4%,总一致性为91.5%。结论以弓形虫多表位重组抗原构建的ELISA试剂盒既可以检测弓形虫急性感染血清,又可以检测弓形虫慢性感染血清,具有一定的应用前景。

弓形虫抗血清 IgG 的制备及其检测效果研究

目的比较弓形虫不同免疫原所制备抗血清 IgG 的检测效果,优选高效价的抗体诊断试剂。方法制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S)。用抗原 C、C+S、S 及活虫(P)各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得 IgG 抗体(多抗)并制备酶标记抗体;用上述4种多抗与对应的多抗-HRP 组合成4种双抗体夹心型 ELISA,检测人血清 CAg 和 C、S 抗原,评价试剂的敏感性;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验,评价试剂的特异性;采用捕获法检测人血清 IgM 抗体,比较4种多抗-HRP 的检测效果。结果各种 ELISA 夹心法同步检测 CAg 阳性标本7例,阴性样本8例,均未出现假阴性和假阳性反应,其 OD 均值的 P/N 比值依次为 C+C 组33.5、S+S 组27.8、CS+CS 组21.2、P+P 组13.2;C 和 S 抗原的最低检出量均为0.5μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应。4种多抗-HRP 同步检测IgM 抗体阳性标本3例,阴性样本7例,均未出现假阴性和假阳性反应,其 OD 均值的 P/N 值最高的是抗 C-HRP。结论 4种抗体用于检测人血清 IgM 抗体、CAg、C 和 S 抗原以及其它抗原的结果表明,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性,其中以抗 C 抗体试剂最为满意。(2)4种组合形式的夹心ELISA,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义,表明弓形虫 C 和 S 抗原间存在着共同抗原成分。

弓形虫SAGI基因的克隆与原核表达

华中农业大学农业微生物学国家重点实验室和该校动物医学院的王金苹、赵俊龙、江涛等7位科学工作者利用PCR技术从弓形虫RH株基因组中扩增出SAGI部分基因片段．亚克隆入表达载体pGEXKG，将重组质粒导入大肠杆菌BL21．IPTG诱导表达．SDS-PAGE电泳显示表达的重组蛋白的分子量为56ku。免疫印迹分析显示此表达产物能被猪抗弓形虫阳性血清所识别，表明该重组蛋白具有免疫反应结果的活性。为进一步进行弓形虫病的免疫预防和诊断研究奠定了基础。目前诊断试剂盒所包被的抗原纯度或抗原活性不够，故用基因工程技术来成功地表达具有抗原活性的SAGI蛋白，圆满地解决弓形虫SAGI基因序列，为其体外重组SAGI奠定了基础。

10种弓形虫IgG抗体检测试剂盒的评价

目的 对10种弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）进行质量评价。 方法 弓形虫IgG抗体检测试剂用参考血清国家参考品24份，其中9份为阳性参考品，15份为阴性参考品。10种弓形虫IgG抗体检测试剂盒中，5种为国产试剂盒，5种为进口试剂盒。用国家参考品对弓形虫IgG抗体检测试剂盒进行检测，检验项目包括阳性参考品符合率、阴性参考品符合率和最低检出量。 结果 10种试剂盒中，7种符合弓形虫IgG抗体检测试剂用参考血清国家参考品的要求；2种国产试剂盒的阳性参考品符合率分别为8/9、6/9，出现假阴性；1种进口试剂盒的阴性参考品符合率为12/15，出现假阳性。 结论 大部分弓形虫IgG抗体检测试剂盒能符合国家参考品的要求，少数试剂盒则需要提高敏感性。

临床医学

20041395 应用巢式 PCR-杂交技术检出人血样及动物排泄物中弓形虫 DNA/骆红梅(杭州师范学院医学院 310012),楼兰花//中国兽医杂志.-2003,39(9).-12～14弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,引起人兽共患疾病弓形虫病。本文报道了一种基于 PCR 技术检测宠物弓形虫的方法,该方法的特点是通过检测宠物排泄物中是否存在弓形虫包囊,从而诊断宠物是否为真实的传染源。由于宠物的排泄物容易采集,避免了复杂的采样程度,方便于检测。图2参620041396 猪瘟 RT-PCR ELISA 诊断方法的建立及其初步应用/孙世琪(中国农业科学院兰州兽医研究所730046),郭慧琛,尚佑军…//中国兽医科技.-2003,33(9).-3～6建立了检测猪瘟病毒(CSFV)的快速。