天花粉蛋白结构改造对引产活性的影响

目的 :研究结构改造对天花粉蛋白 (TCS)引产活性的影响。方法 :利用定点突变将TCS第 2 19位的天冬酰胺残基改变为半胱氨酸残基 (Q2 19C)以供定点聚乙二醇 (PEG)修饰 ,测定修饰产物的致核糖体失活活性及小鼠中期引产活性。结果 :PEG修饰使TCS的致核糖体失活活性约降低90 % ;相对分子质量为 50 0 0的PEG修饰对引产活性无明显影响 ,而相对分子质量为 2 0 0 0 0的PEG修饰却明显增强引产活性 ;此外 ,PEG修饰使TCS的体内半衰期大为延长。结论 :PEG定点修饰TCS可加强其引产活性 ,原因可能是较长的体内半衰期延长了药物作用的时间。

聚乙二醇修饰天花粉蛋白的初步研究

目的:研究聚乙二醇(PEG)修饰天花粉蛋白(TCS)的条件、纯化方法、生物活性及致过敏反应程度。方法:用SDS-PAGE检测反应条件对产物成分的影响,利用离子交换和分子筛凝胶层析对修饰产物进行分离纯化,通过SDS-PAGE和HPLC检测聚乙二醇化天花粉蛋白(PEG-TCS)的纯度,小鼠引产实验测定PEG-TCS体内生物学活性,用TCS和PEG-TCS作为抗原对豚鼠进行致敏和攻击。结果:在PEG修饰TCS的反应中,PEG与TCS的投料(质量)比和pH值是影响修饰效率的主要因素,修饰反应一般在24～48h内达到平衡;纯化的PEG-TCS经SDS-PAGE检测纯度大于95%,HPLC显示单一峰;小鼠引产实验表明,经过PEG修饰后的TCS,引产活性加强;豚鼠过敏反应实验表明,PEG-TCS具有极低的全身性过敏反应。结论:PEG修饰TCS的最佳反应条件为:TCS与PEG投料比为1:6,pH6．0,反应时间为48h,催化剂氰基硼氢化钠浓度为40mmol·L^(-1);PEG-TCS纯度大于95%; PEG-TCS体内活性能较好的保留,且全身性过敏反应降低。