不同的引导肽对丝状噬菌体基因8蛋白展示外源多肽的影响

为了研究不同的引导肽对在基因8蛋白上展示外源多肽的影响,利用基因工程方法将一短肽插入基因8蛋白的N端,并将引导多肽去除或用基因3蛋白的引导肽序列替代基因8的引导肽序列.采用放射性脉冲追踪技术检测不同的引导肽对在基因8蛋白上展示外源多肽的作用.结果表明,无引导肽序列的引导,蛋白前体无法向成熟蛋白转化.基因3蛋白的引导肽可以引导展示有外源多肽的基因8蛋白,完成从前体向成熟蛋白的转化,但转化率明显下降.研究结果对阐明噬菌体外壳蛋白在大肠杆菌中的跨膜机制具有重要的意义.

Sporamin引导肽基因序列与sacB基因融合植物表达载体的构建

枯草杆菌(Bacillus subtilis)果聚糖蔗糖转移酶基因(SacB)在植物中表达,可以明显提高果聚糖的积累,增强植物的耐寒、耐旱和抗盐碱的能力。本实验采用PCR方法从枯草杆菌基因组中扩增出果聚糖蔗糖转移酶基因(SacB),序列分析结果与Ebskamp公布的编码果聚糖转移酶基因氨基酸序列同源性为100%采用PCR方法从甘薯总DNA中获得sporamin基因的定位于液泡的引导肽序列,序列分析与GenBank上公布的sporamin基因引导肽氨基酸序列同源性为97%。将sporamin引导肽基因序列与sacB基因体外重组,构建了融合植物表达载体pBI-sacB和pBI-sp-sacB,为下一步作物的遗传转化打下了基础。

携带信号肽NT4-GFP-穿膜肽Ant融合基因的重组腺相关病毒载体的构建及意义

目的:构建携带具有穿膜功能的融合报告基因NT4-GFP-Ant基因的重组腺相关病毒载体。方法:应用PCR技术和T载体克隆法克隆绿色荧光蛋白(GFP)基因;用T4DNA连接酶将测序正确的GFP与已构建成功的Ant基因片段及PBV220/NT4线性质粒载体定向连接,构建PBV220/NT4-GFP-Ant融合载体,酶切获取融合基因,并将其连入腺相关病毒载体PSSHG中,构建PSSHG/NT4-GFP-Ant重组腺相关载体并进行酶切鉴定。结果:T-easy/GFP经EcoRⅠ酶切后,可得到730bp左右的片段,GFP基因经DNA测序证实与GenBank序列一致;pBV220/NT4-GFP-Ant经BamHI/EcoRⅠ联合双酶切后,得到约为1000bp的基因片段;PSSHG/NT4-GFP-Ant经BamHI/EcoRⅠ联合双酶切后,得到大小约为1000bp长度的基因片段。结论:成功克隆GFP基因,成功构建NT4信号肽-GFP-Ant穿膜肽融合基因和PSSHG/NT4-GFP-Ant重组腺相关病毒载体。

NT4-GFP-Ant重组腺相关病毒载体的构建及病毒包装、滴度测定

目的为使基因治疗时,较大分子的功能蛋白能通过血脑屏障,构建NT4-GFP-Ant重组腺相关病毒载体,包装重组病毒,并测定滴度。为进一步动物实验研究该重组病毒液感染鼻粘膜细胞,在鼻粘膜内表达的大分子融合蛋白沿“鼻-脑”通路人脑的可行性奠定基础。方法将已构建成功的NT4-GFP-Ant融合基因插入病毒载体质粒PSSHG中,构建重组腺相关病毒载体质粒,酶切电泳鉴定。用腺病毒辅助质粒PFG140、包装质粒pAAV/Ad及已构建的重组腺伴随病毒载体质粒,三质粒磷酸钙共沉淀法转染80％融合的293细胞系,包装重组腺病毒（rAAV）。回收病毒、斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果成功构建了重组腺相关病毒质粒PSSHG/NT4-GFP- Ant。包装、回收病毒后斑点杂交方法测定重组病毒滴度为3．36×10^9 PFU/ml。结论成功构建了PSSHG/NT4- GFP-Ant重组腺相关病毒载体,并成功包装了较高浓度的重组病毒。

A、O型口蹄疫T/B细胞多抗原表位融合基因植物表达载体的构建

通过对(pMD-xsB/xsT/xsBT/xsBTT)4个克隆载体进行PCR,在(xsB/xsT/xsBT/xsBTT)目的基因前接入引导肽序列(用Y表示),克隆中间载体(pMD-xsYB/xsYT/xsYBT/xsYBTT),再利用同尾酶的酶切及连接得到4个重组植物表达载体(pB I-xsYB/xsYT/xsYBT/xsYBTT)。经限制性酶切鉴定和测序分析证实表达载体构建正确,为下一步热研2号柱花草转基因植株的获得奠定了基础。

重组胰岛素原在毕赤酵母中高效分泌表达的研究

为了提高胰岛素在酵母的分泌表达效率,首先合成了胰岛素原基因,并在其序列的N端引入了一段引导肽,构建成p PICZα-A-Pro-INS重组分泌型表达载体。将表达载体线性化处理后电击转化毕赤酵母GSll5感受态细胞,筛选获得分泌型高表达工程菌株,重组蛋白的表达水平为300 mg/L,占分泌总蛋白的40%左右。该结果表达明引导肽的存在对于在毕赤酵母中高效表达胰岛素的基因至关重要。

RHAG血型抗原研究进展

RHAG血型抗原是系统抗原,国际输血协会(ISBT)的命名RHAG,系统编号030,已确认该系统有4个抗原。RHAG抗原过去被称为RH50,是一个与RHD/CE相关的抗原(RHD/CE被称为RH30)。本文就RHAG抗原的最新研究进展,做一简略介绍。