基于通用质粒标准品的实时荧光定量PCR检测组织因子剪接异构体F3tv1及F3tv2

目的建立基于通用质粒标准品的实时荧光定量PCR(qPCR)法检测人组织因子(TF)两种剪接异构体(F3tv1和F3tv2)。方法设计基因特异性上游引物与通用下游引物,通过引物末端延伸法将2种扩增产物进行序列简并,用于构建通用质粒标准品。用qPCR法检测人白血病细胞株THP-1、Jurkat及外周血单核细胞中F3tv1与F3tv2的表达,分析该法的线性范围与特异性。结果所建qPCR方法对F3tv1与F3tv2扩增特异,线性范围均为108～101copies/μL。THP-1与外周血单核细胞中F3tv1相对表达量分别为(5.70×10-4)±(2.62×10-5)与(1.79×10-4)±(4.37×10-5);F3tv2分别为(4.94×10-5)±(2.19×10-6)与(2.98±2.18)×10-6,Jurkat细胞株F3tv1与F3tv2均未检出。结论建立的qPCR方法可对TF两种剪接异构体同时进行精确、定量地检测,为深入研究TF的选择性剪接调控机制提供实验依据。