多重耐药弗劳地枸橼酸杆菌的基因组及耐药机制分析

目的对多重耐药弗劳地枸橼酸杆菌进行全基因组分析,为研究其耐药机制提供依据。方法采用含美罗培南的MH培养基对粪便标本进行初筛,经BD Phoenix100全自动微生物鉴定仪进行菌种鉴定及药敏试验,提取耐药菌总DNA进行二代测序和细菌多位点序列分型(MLST),经质粒全基因组序列分析检测质粒的组分和功能,并与参考质粒进行比较,通过质粒接合转移实验分析耐药质粒传递情况。结果413份粪便标本中分离出1株多重耐药弗劳地枸橼酸杆菌,该菌株对头孢菌素类、碳青霉烯类抗菌药物、复方磺胺甲噁唑的耐药率均为100%,对氨曲南、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素等抗菌药物呈现不同程度耐药;MLST分型的耐药弗劳地枸橼酸杆菌为ST22型,该菌株共含有5412个基因,含耐药基因367个,包括碳青霉烯酶类耐药基因、AmpC酶基因、大环内酯类耐药基因、氨基糖苷类耐药基、喹诺酮类耐药基因等。质粒的全基因组分析结果显示,该质粒含碳青霉烯类耐药基因blaNDM-1、blaSHV12,该质粒与泄殖腔肠杆菌菌株ECN49质粒和肺炎克雷伯菌菌株质粒pA575-NDM有极高的同源性;质粒接合实验显示,blaNDM-1和blaSHV-12可以通过质粒转移。结论弗劳地枸橼酸杆菌耐药的主要原因之一是含有blaNDM-1、blaSHV-12等耐药基因,并且该耐药性能通过质粒进行水平转移。

弗劳地枸橼酸盐杆菌基因种与小儿腹泻关系、耐药性的研究

从1457例腹泻患儿大便中分离出164株(11.25%)弗劳地枸橼酸盐杆菌复合群的菌株,而对照组中分离率仅4.26%,具统计学差异(P<0.05)。为探讨其致病性,采用不耐热性肠毒素(LT)、耐热性肠毒素(ST)基因探针,菌液直接LT-PCR,家兔肠袢结扎和刚果红结合试验检测细菌的腹泻毒力因子,证实47.1%的菌株产生LT,系腹泻重要毒力因子,不具侵袭性因子。LT阳性菌株见于C.freundii,C.braakii,C.werkmanii。初步认为弗劳地枸橼酸盐杆菌与小儿腹泻密切相关,耐药性检测表明10%的菌株产生超广谱β-内酰胺酶。

弗劳地枸橼酸杆菌中质粒介导的KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶基因结构分析

目的对携带bla_(NDM-1)和bl_(aKPC-2)的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析。方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性;特异性PCR扩增和序列测定分析碳青霉烯酶耐药基因和ESBLs耐药基因、接合试验、耐药基因周围序列分析对菌株的耐药机制进行分子水平研究。结果 4株细菌仅CF-05对阿米卡星敏感,所有菌株对其他检测药物全部耐药;PFGE结果显示4株细菌不同源;特异性PCR扩增和序列分析显示2株(CF-35、CF-43)同时携带blaNDM-1和blaKPC-2、另2株(CF-05、CF-17)仅携带blaNDM-1,CF-35同时携带bla_(CTX-M-15);其中3株细菌(CF-05、CF-17、CF-43)接合成功,CF-05、CF-17接合子(CF-05-1和CF-17-1)携带bla_(NDM-1),CF-43获得2种接合子(CF-43-1携带bla_(KPC-2)、CF-43-2同时携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2));分析blaNDM-1和blaKPC-2周围序列发现,4株细菌周围序列分别与国内报道携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)的肺炎克雷伯菌质粒pNDM-HN380和PK048周围序列高度相似。结论在4株弗劳地枸橼酸杆菌中检测到NDM-1型碳青霉烯酶,其中2株同时携带KPC-2型碳青霉烯酶,bla_(NDM-1)周围序列和bla_(KPC-2)周围序列与国内已知肺炎克雷伯菌相关耐药基因周围序列高度相似。

用固定化弗劳地柠檬酸杆菌XP05从溶液中回收铂

比较了 5种固定弗劳地柠檬酸杆菌XP0 5菌体的方法 ,其中明胶 海藻酸钠包埋法为固定菌体的最佳方法。扫描电子显微镜观察表明 ,XP0 5菌体较均匀地分布于包埋基质中。固定化XP0 5菌体吸附Pt4+ 受吸附时间、固定化菌体浓度、溶液的pH值和Pt4+ 起始浓度的影响。吸附作用是一个快速的过程 ;吸附Pt4+ 的最适pH值为 1 5 ;在 5 0～ 2 5 0mgPt4+ L范围内 ,吸附量与Pt4+ 起始浓度成线性关系 ,吸附过程符合Langmuir和Freundlich吸附等温模型。在Pt4+ 起始浓度 2 5 0mg L、固定化菌体 2 0g L、pH 1 5和 3 0℃条件下 ,振荡吸附 60min ,吸附量为 3 5 3mg g。 0 5mol LHCl能使吸附在固定化菌体上的Pt解吸 98 7%。从废铂催化剂处理液回收铂的结果表明 ,在Pt4+ 起始浓度111 8mg L、固定化菌体 4 0g L、pH 1 5和 3 0℃条件下 ,振荡吸附 60min ,吸附量为 2 0 9mg g。在填充床反应器中 ,在Pt4+ 起始浓度 5 0mg L、流速 1 2ml min、固定化菌体 1 86g的条件下 ,饱和吸附量达 2 4 7mg g;固定化XP0 5菌体经 4次吸附 解吸循环后吸附率仍达 78%。

碳青酶烯类抗生素耐药弗劳地枸橼酸杆菌KPC-2基因的检测

目的研究弗劳地枸橼酸杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法采用琼脂对倍稀释法检测弗劳地枸橼酸杆菌对亚胺培南和美罗培南以及其他常见药物的最低抑菌浓度(MIC)。等电聚集电泳分析其β-内酰胺酶类型,聚合酶链反应(PCR)和DNA序列分析检测β-内酰胺酶基因型,接合试验分析其耐药质粒传递情况。结果弗劳地枸橼酸杆菌对亚胺培南和美罗培南的MIC均为64 mg·L-1,对青霉素类、头孢菌素类、头孢西丁、氨曲南和氨基糖苷类均耐药。转移接合结果显示对亚胺培南和美罗培南的耐药性可以通过质粒转移。等电聚焦电泳结果显示转移接合子具有等电点(PI)约为5.0、7.5的2种β-内酰胺酶。PCR检测及序列分析结果显示该菌产生KPC-2基因。结论 KPC-2型碳青酶烯酶的产生是引起弗劳地枸橼酸杆菌对碳青酶烯酶耐药的主要原因,并且该耐药性能通过质粒进行转移。

弗劳地枸橼酸杆菌肺脓肿1例

弗劳地枸橼酸杆菌肺脓肿临床未见报道，我们遇1例，报道如下。

产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌整合子和插入序列共同区1检测及分型

目的研究临床分离产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌中整合子和插入序列共同区1(ISCR1)移动元件的分布和携带耐药基因盒情况,以及菌株的同源性。方法收集昆明医科大学第一附属医院2012年6月-2014年10月产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌18株,采用VITEK 2全自动药敏鉴定仪进行菌种鉴定和药敏试验;PCR及测序法检测Ⅰ~Ⅲ类整合酶基因和ISCR1元件保守区,以及可变区携带的耐药基因盒;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对菌株进行分型研究。结果检测菌株中77.8%(14/18)菌株Ⅰ类整合子保守区阳性,27.8%(5/18)菌株ISCR1元件保守区阳性,未检测到Ⅱ、Ⅲ类整合子;72.2%(13/18)菌株Ⅰ类整合子可变区阳性,未检测到ISCR1元件的可变区;整合子可变区含有编码对氨基糖苷类抗生素耐药的基因盒(aad A1、aad A5、aac(6')-Ib-cr)和编码对磺胺类抗菌药物耐药的基因盒(dfr A、dfr A15、dfr A17),可变区基因盒未检测到NDM-1耐药基因;PFGE分型将18株菌分成17种型。结论产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌克隆播散趋势不明显,Ⅰ类整合子广泛存在于此类菌中,ISCR1元件携带率较低,并且这两类移动元件与我院NDM-1基因的传播无关。

弗劳地柠檬酸杆菌在医院的分布及其药敏结果分析

对某院2001—2006年临床分离的87株弗劳地柠檬酸杆菌的分布及药敏情况进行统计分析。弗劳地柠檬酸杆菌主要分离自痰(31株)、尿(23株)和分泌物标本(13株);住院及门诊患者均可发生弗劳地柠檬酸杆菌感染,以内科病房(41株)和外科病房(31株)为主,门诊分离11株,重症监护室仅分离1株;对哌拉西林、头孢唑林、庆大霉素、头孢呋辛、复方磺胺甲口恶唑耐药率较高(均>50%),均对亚胺培南敏感(MIC90仅为1μg/mL),对阿米卡星、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦敏感率均>80%,有8株菌产超广谱β-内酰胺酶。

一起弗劳地枸橼酸杆菌引起的食物中毒调查

目的查明引起某学校食物中毒事件的原因,为及时控制公共卫生突发事件提供科学依据。方法通过病例定义、病例搜索、个案调查,对某学校食物中毒事件进行调查,并采集可疑样品进行实验室检测。结果共搜索到病例193例,均为在校师生,男性103例,女性90例,年龄4~43岁,临床表现以发热、腹泻、腹痛、恶心、呕吐、头痛为主;潜伏期为5.5h^4.5d,平均60h。1名擀面皮加工人员和1例病例的肛拭子中检测出弗劳地枸橼酸杆菌。结论该食物中毒事件为弗劳地枸橼酸杆菌引起。需加强学校食品卫生管理,避免此类事件发生。

临床分离弗劳地枸橼酸杆菌耐药性分析及质粒介导的AmpC酶基因检测

目的了解安徽地区临床分离弗劳地枸橼酸杆菌临床分布、耐药性及质粒介导AmpC酶(pAmpCs)基因的流行情况。方法收集2012~2017年安徽省细菌耐药监控中心监测网内的34所医院报送的临床分离的104株弗劳地枸橼酸杆菌,采用琼脂稀释法进行抗生素敏感性实验。提取细菌质粒,聚合酶链式反应(PCR)检测质粒介导AmpC酶基因,对阳性扩增产物进行测序分析;AmpC酶阳性菌株做转移接合试验,PCR扩增并测序确定接合子的基因型;测定供体菌、受体菌和接合子对多种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。结果104株弗劳地枸橼酸杆菌临床分布广泛,最多见于呼吸内科(30.77%)及重症监护病房(24.04%),标本来源以痰液、尿液最多。4株AmpC酶基因阳性的菌株中,有3株DHA-1基因阳性,1株ACT-1基因阳性。4株AmpC酶基因阳性的菌株有3株转移接合成功。这3株接合子与受体菌相比,对多种常用抗生素尤其是β-内酰胺类抗生素的MIC值提高了8~128倍。结论弗劳地枸橼酸杆菌临床分布广泛,耐药严重,携带有质粒介导的AmpC酶基因的菌株对多种β-内酰胺类抗生素耐药,并且可通过接合性质粒在不同菌属间播散。

弗劳地枸橼酸杆菌败血症10例报告

近年来枸橼酸杆菌败血症报告日渐增多,但对该菌的致病能力看法尚不尽统一,有人认为该菌属腐生菌不致病,然而,临床上发现由该菌引起的感染常常较为严重。现将本院1984年6月至1990年6月经血培养证实的10例结合文献加以分析报告。临床资料一、一般情况 10例中男7例,女3例,年龄17～66岁,40岁以上6例,院内感染2例。

132株弗劳地枸橼酸杆菌致重症患者医院感染的原因与耐药性分析

目的分析该院重症监护病房患者弗劳地枸橼酸杆菌医院感染的原因和耐药特点,为今后的临床治疗和预防弗劳地枸橼酸杆菌感染提供依据。方法收集该院2011年12月至2014年11月重症监护病房患者的临床标本,常规分离培养细菌,KB纸片法进行药敏试验,利用WHONET 5.6软件分析处理实验数据。结果从重症患者分离的弗劳地枸橼酸杆菌以下呼吸道为主,占64.4%;产ESBLs高,达35.6%;药敏试验表明该菌对亚胺培南、美罗培南、呋喃妥因、卡那霉素、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦都较敏感,耐药率分别为3.8%、4.5%、8.3%、9.1%、17.4%、18.1%和22.7%,其余抗菌药物的耐药率均大于25.0%。结论弗劳地枸橼酸杆菌引发的重症患者医院感染已日益严重,下呼吸道是其主要感染部位,该菌对临床常用的头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类及多种β-内酰胺类抗菌药物呈高度耐药,临床应加强耐药性监测,以减少耐药菌株的产生和医院内扩散。

1株与沙门A-F群多价诊断血清交叉凝集的弗劳地枸橼酸杆菌的检出与分析

目的在对日常环境监测水样的监测中发现病原菌的血清学交叉凝集,进行检测与分析。方法参照中华人民共和国标准GB/T4789《食品卫生微生物学检验》对检测的样品进行病原学的检测。结果由于沙门菌属与枸橼酸杆菌属的部分抗原相同,在血清凝集时容易发生交叉凝集,引起混淆,应加以多种生化试验进行鉴别。结论通过这次对监测样品的检测,提高了对致病菌的分离鉴定能力,为以后的工作提供宝贵经验。

临床药师参与1例弗劳地氏枸橼酸杆菌感染的抗菌治疗

弗劳地氏枸橼酸杆菌为机会性致病菌,可引起人的原发和继发性感染症,如呼吸道、泌尿系感染及败血症等,近年来由该菌所引发的感染有所增加且感染部位广泛,目前已成为医院感染常见的致病菌之一,在临床分离肠杆菌中占第5位。

51株弗劳地枸橼酸杆菌的鉴定分析

５１株弗劳地枸橼酸杆菌的鉴定分析周庭银（上海长征医院检验科，上海２００００３）王红（江苏省连云港１４９医院检验科，２２２０４２）关键词弗劳地枸橼酸杆菌药物敏感试验弗劳地枸橼酸杆菌为条件致病菌，广泛分布于自然界，可引起原发性和不同程度的继发感染。我们先...

弗劳地枸橼酸杆菌引起的猕猴腹泻

对从腹泻猕猴脓血便中分离的一株细菌,经ATB细菌分析仪,选用ID32E肠杆菌测试条鉴定为弗劳地枸橼酸杆菌(Citrobacterfreundii),id%=99.9。用K-B纸片法做药敏试验,结果表明,该菌对诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、头孢曲松、头孢他定、氯霉素敏感。对庆大霉素、头孢拉定、痢特灵等十几种抗生素耐药。总之,在做腹泻病猴粪便培养时,应重视弗劳地枸橼酸菌的检测。

医院获得性感染弗劳地枸橼酸杆菌败血症

本文报告医院感染枸橼酸杆菌败血症11例,显示该菌易患对象为接受放疗、化疗、免疫抑制剂及长期广谱抗生素治疗和皮肤粘膜屏障受破坏的免疫功能低下的患者。提示合理用药、保护人体各种防御屏障、增强和保护宿主免疫机能、维持人体内环境平衡,对防止医院感染有重要临床意义。

弗劳地枸橼酸杆菌对喹诺酮药物耐药状况的探讨

目的 了解弗劳地枸橼酸杆菌对喹诺酮药物耐药性的变迁 ,并比较几种喹诺酮药物对弗劳地枸橼酸杆菌的作用 ,为临床合理应用该类抗生素提供依据。方法 分析 2 0 0 0～ 2 0 0 3年 5月住院患者痰、尿、血等标本中分离出的 60株弗劳地枸橼酸杆菌对环丙沙星的药敏结果 ,并用E试验检测弗劳地枸橼酸杆菌的最低抑菌浓度MIC来比较几种喹诺酮药物对弗劳地枸橼酸杆菌的耐药情况。结果 弗劳地枸橼酸杆菌对环丙沙星的耐药率由 2 0 0 0年的 6%上升至 2 0 0 2年 2 4% ,MIC90 由小于 1μg/ml上升至小于 16μg/ml。弗劳地枸橼酸杆菌对加替沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星的MIC50 ( μg/ml)分别为 1 0 ,1 5 ,4 0 ,4 0。 结论 弗劳地枸橼酸杆菌对喹诺酮类药物的耐药率呈上升趋势 ,应参照病原学和药敏试验结果合理选用该类抗生素。