多重耐药弗劳地枸橼酸杆菌的基因组及耐药机制分析

目的对多重耐药弗劳地枸橼酸杆菌进行全基因组分析,为研究其耐药机制提供依据。方法采用含美罗培南的MH培养基对粪便标本进行初筛,经BD Phoenix100全自动微生物鉴定仪进行菌种鉴定及药敏试验,提取耐药菌总DNA进行二代测序和细菌多位点序列分型(MLST),经质粒全基因组序列分析检测质粒的组分和功能,并与参考质粒进行比较,通过质粒接合转移实验分析耐药质粒传递情况。结果413份粪便标本中分离出1株多重耐药弗劳地枸橼酸杆菌,该菌株对头孢菌素类、碳青霉烯类抗菌药物、复方磺胺甲噁唑的耐药率均为100%,对氨曲南、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素等抗菌药物呈现不同程度耐药;MLST分型的耐药弗劳地枸橼酸杆菌为ST22型,该菌株共含有5412个基因,含耐药基因367个,包括碳青霉烯酶类耐药基因、AmpC酶基因、大环内酯类耐药基因、氨基糖苷类耐药基、喹诺酮类耐药基因等。质粒的全基因组分析结果显示,该质粒含碳青霉烯类耐药基因blaNDM-1、blaSHV12,该质粒与泄殖腔肠杆菌菌株ECN49质粒和肺炎克雷伯菌菌株质粒pA575-NDM有极高的同源性;质粒接合实验显示,blaNDM-1和blaSHV-12可以通过质粒转移。结论弗劳地枸橼酸杆菌耐药的主要原因之一是含有blaNDM-1、blaSHV-12等耐药基因,并且该耐药性能通过质粒进行水平转移。

弗劳地枸橼酸杆菌中质粒介导的KPC-2和NDM-1型碳青霉烯酶基因结构分析

目的对携带bla_(NDM-1)和bl_(aKPC-2)的弗劳地枸橼酸杆菌的碳青霉烯酶基因结构进行分析。方法收集4株耐碳青霉烯类药物弗劳地枸橼酸杆菌(CF-05、CF-17、CF-35、CF-43),琼脂稀释法测定抗菌药物敏感性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性;特异性PCR扩增和序列测定分析碳青霉烯酶耐药基因和ESBLs耐药基因、接合试验、耐药基因周围序列分析对菌株的耐药机制进行分子水平研究。结果 4株细菌仅CF-05对阿米卡星敏感,所有菌株对其他检测药物全部耐药;PFGE结果显示4株细菌不同源;特异性PCR扩增和序列分析显示2株(CF-35、CF-43)同时携带blaNDM-1和blaKPC-2、另2株(CF-05、CF-17)仅携带blaNDM-1,CF-35同时携带bla_(CTX-M-15);其中3株细菌(CF-05、CF-17、CF-43)接合成功,CF-05、CF-17接合子(CF-05-1和CF-17-1)携带bla_(NDM-1),CF-43获得2种接合子(CF-43-1携带bla_(KPC-2)、CF-43-2同时携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2));分析blaNDM-1和blaKPC-2周围序列发现,4株细菌周围序列分别与国内报道携带bla_(NDM-1)和bla_(KPC-2)的肺炎克雷伯菌质粒pNDM-HN380和PK048周围序列高度相似。结论在4株弗劳地枸橼酸杆菌中检测到NDM-1型碳青霉烯酶,其中2株同时携带KPC-2型碳青霉烯酶,bla_(NDM-1)周围序列和bla_(KPC-2)周围序列与国内已知肺炎克雷伯菌相关耐药基因周围序列高度相似。

碳青酶烯类抗生素耐药弗劳地枸橼酸杆菌KPC-2基因的检测

目的研究弗劳地枸橼酸杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法采用琼脂对倍稀释法检测弗劳地枸橼酸杆菌对亚胺培南和美罗培南以及其他常见药物的最低抑菌浓度(MIC)。等电聚集电泳分析其β-内酰胺酶类型,聚合酶链反应(PCR)和DNA序列分析检测β-内酰胺酶基因型,接合试验分析其耐药质粒传递情况。结果弗劳地枸橼酸杆菌对亚胺培南和美罗培南的MIC均为64 mg·L-1,对青霉素类、头孢菌素类、头孢西丁、氨曲南和氨基糖苷类均耐药。转移接合结果显示对亚胺培南和美罗培南的耐药性可以通过质粒转移。等电聚焦电泳结果显示转移接合子具有等电点(PI)约为5.0、7.5的2种β-内酰胺酶。PCR检测及序列分析结果显示该菌产生KPC-2基因。结论 KPC-2型碳青酶烯酶的产生是引起弗劳地枸橼酸杆菌对碳青酶烯酶耐药的主要原因,并且该耐药性能通过质粒进行转移。

产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌整合子和插入序列共同区1检测及分型

目的研究临床分离产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌中整合子和插入序列共同区1(ISCR1)移动元件的分布和携带耐药基因盒情况,以及菌株的同源性。方法收集昆明医科大学第一附属医院2012年6月-2014年10月产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌18株,采用VITEK 2全自动药敏鉴定仪进行菌种鉴定和药敏试验;PCR及测序法检测Ⅰ~Ⅲ类整合酶基因和ISCR1元件保守区,以及可变区携带的耐药基因盒;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对菌株进行分型研究。结果检测菌株中77.8%(14/18)菌株Ⅰ类整合子保守区阳性,27.8%(5/18)菌株ISCR1元件保守区阳性,未检测到Ⅱ、Ⅲ类整合子;72.2%(13/18)菌株Ⅰ类整合子可变区阳性,未检测到ISCR1元件的可变区;整合子可变区含有编码对氨基糖苷类抗生素耐药的基因盒(aad A1、aad A5、aac(6')-Ib-cr)和编码对磺胺类抗菌药物耐药的基因盒(dfr A、dfr A15、dfr A17),可变区基因盒未检测到NDM-1耐药基因;PFGE分型将18株菌分成17种型。结论产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌克隆播散趋势不明显,Ⅰ类整合子广泛存在于此类菌中,ISCR1元件携带率较低,并且这两类移动元件与我院NDM-1基因的传播无关。

弗劳地枸橼酸杆菌肺脓肿1例

弗劳地枸橼酸杆菌肺脓肿临床未见报道，我们遇1例，报道如下。

临床分离弗劳地枸橼酸杆菌耐药性分析及质粒介导的AmpC酶基因检测

目的了解安徽地区临床分离弗劳地枸橼酸杆菌临床分布、耐药性及质粒介导AmpC酶(pAmpCs)基因的流行情况。方法收集2012~2017年安徽省细菌耐药监控中心监测网内的34所医院报送的临床分离的104株弗劳地枸橼酸杆菌,采用琼脂稀释法进行抗生素敏感性实验。提取细菌质粒,聚合酶链式反应(PCR)检测质粒介导AmpC酶基因,对阳性扩增产物进行测序分析;AmpC酶阳性菌株做转移接合试验,PCR扩增并测序确定接合子的基因型;测定供体菌、受体菌和接合子对多种抗生素的最低抑菌浓度(MIC)。结果104株弗劳地枸橼酸杆菌临床分布广泛,最多见于呼吸内科(30.77%)及重症监护病房(24.04%),标本来源以痰液、尿液最多。4株AmpC酶基因阳性的菌株中,有3株DHA-1基因阳性,1株ACT-1基因阳性。4株AmpC酶基因阳性的菌株有3株转移接合成功。这3株接合子与受体菌相比,对多种常用抗生素尤其是β-内酰胺类抗生素的MIC值提高了8~128倍。结论弗劳地枸橼酸杆菌临床分布广泛,耐药严重,携带有质粒介导的AmpC酶基因的菌株对多种β-内酰胺类抗生素耐药,并且可通过接合性质粒在不同菌属间播散。

一起弗劳地枸橼酸杆菌引起的食物中毒调查

目的查明引起某学校食物中毒事件的原因,为及时控制公共卫生突发事件提供科学依据。方法通过病例定义、病例搜索、个案调查,对某学校食物中毒事件进行调查,并采集可疑样品进行实验室检测。结果共搜索到病例193例,均为在校师生,男性103例,女性90例,年龄4~43岁,临床表现以发热、腹泻、腹痛、恶心、呕吐、头痛为主;潜伏期为5.5h^4.5d,平均60h。1名擀面皮加工人员和1例病例的肛拭子中检测出弗劳地枸橼酸杆菌。结论该食物中毒事件为弗劳地枸橼酸杆菌引起。需加强学校食品卫生管理,避免此类事件发生。

132株弗劳地枸橼酸杆菌致重症患者医院感染的原因与耐药性分析

目的分析该院重症监护病房患者弗劳地枸橼酸杆菌医院感染的原因和耐药特点,为今后的临床治疗和预防弗劳地枸橼酸杆菌感染提供依据。方法收集该院2011年12月至2014年11月重症监护病房患者的临床标本,常规分离培养细菌,KB纸片法进行药敏试验,利用WHONET 5.6软件分析处理实验数据。结果从重症患者分离的弗劳地枸橼酸杆菌以下呼吸道为主,占64.4%;产ESBLs高,达35.6%;药敏试验表明该菌对亚胺培南、美罗培南、呋喃妥因、卡那霉素、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/他唑巴坦都较敏感,耐药率分别为3.8%、4.5%、8.3%、9.1%、17.4%、18.1%和22.7%,其余抗菌药物的耐药率均大于25.0%。结论弗劳地枸橼酸杆菌引发的重症患者医院感染已日益严重,下呼吸道是其主要感染部位,该菌对临床常用的头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类及多种β-内酰胺类抗菌药物呈高度耐药,临床应加强耐药性监测,以减少耐药菌株的产生和医院内扩散。

1株与沙门A-F群多价诊断血清交叉凝集的弗劳地枸橼酸杆菌的检出与分析

目的在对日常环境监测水样的监测中发现病原菌的血清学交叉凝集,进行检测与分析。方法参照中华人民共和国标准GB/T4789《食品卫生微生物学检验》对检测的样品进行病原学的检测。结果由于沙门菌属与枸橼酸杆菌属的部分抗原相同,在血清凝集时容易发生交叉凝集,引起混淆,应加以多种生化试验进行鉴别。结论通过这次对监测样品的检测,提高了对致病菌的分离鉴定能力,为以后的工作提供宝贵经验。

弗劳地枸橼酸杆菌引起的猕猴腹泻

对从腹泻猕猴脓血便中分离的一株细菌,经ATB细菌分析仪,选用ID32E肠杆菌测试条鉴定为弗劳地枸橼酸杆菌(Citrobacterfreundii),id%=99.9。用K-B纸片法做药敏试验,结果表明,该菌对诺氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、头孢曲松、头孢他定、氯霉素敏感。对庆大霉素、头孢拉定、痢特灵等十几种抗生素耐药。总之,在做腹泻病猴粪便培养时,应重视弗劳地枸橼酸菌的检测。

医院获得性感染弗劳地枸橼酸杆菌败血症

本文报告医院感染枸橼酸杆菌败血症11例,显示该菌易患对象为接受放疗、化疗、免疫抑制剂及长期广谱抗生素治疗和皮肤粘膜屏障受破坏的免疫功能低下的患者。提示合理用药、保护人体各种防御屏障、增强和保护宿主免疫机能、维持人体内环境平衡,对防止医院感染有重要临床意义。

弗劳地枸橼酸杆菌对喹诺酮药物耐药状况的探讨

目的 了解弗劳地枸橼酸杆菌对喹诺酮药物耐药性的变迁 ,并比较几种喹诺酮药物对弗劳地枸橼酸杆菌的作用 ,为临床合理应用该类抗生素提供依据。方法 分析 2 0 0 0～ 2 0 0 3年 5月住院患者痰、尿、血等标本中分离出的 60株弗劳地枸橼酸杆菌对环丙沙星的药敏结果 ,并用E试验检测弗劳地枸橼酸杆菌的最低抑菌浓度MIC来比较几种喹诺酮药物对弗劳地枸橼酸杆菌的耐药情况。结果 弗劳地枸橼酸杆菌对环丙沙星的耐药率由 2 0 0 0年的 6%上升至 2 0 0 2年 2 4% ,MIC90 由小于 1μg/ml上升至小于 16μg/ml。弗劳地枸橼酸杆菌对加替沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星的MIC50 ( μg/ml)分别为 1 0 ,1 5 ,4 0 ,4 0。 结论 弗劳地枸橼酸杆菌对喹诺酮类药物的耐药率呈上升趋势 ,应参照病原学和药敏试验结果合理选用该类抗生素。

一起由弗劳地枸橼酸杆菌引起感染性腹泻暴发疫情调查

目的查明阆中市一起感染性腹泻暴发疫情的发生原因,为食物中毒提供防控策略。方法采用食物中毒卫生学调查方法开展个案调查寻找可疑的食物和餐次,通过队列研究确定中毒食物,采集标本送往实验室进行相关致病微生物分离和鉴定。结果 2017-07-17中午42名共同聚餐者中26人发病,其中11例病例的肛拭中分离到弗劳地枸橼酸杆菌。队列研究发现,食用者的发病率是未食用的3. 8倍(RR=3. 8),RR95%的可信区间为(2. 0～7. 4)。干酥肉可能为加工前肉制品污染,未熟半成品与成品混装,在室温(28℃～35℃)中保存时间长,交叉污染或人为污染,且食用前未加热。结论本次疫情为一起弗劳地枸橼酸杆菌感染性腹泻疫情暴发,食用干酥肉可能是引起暴发的原因。

碳青霉烯类耐药弗劳地枸橼酸杆菌中质粒介导blaNDM-1基因的研究

目的研究碳青霉烯类耐药弗劳地枸橼酸杆菌中bla_(NDM-1)基因的传播特征。方法收集昆明医科大学第一附属医院2012年6月-2014年10月产NDM-1酶弗劳地枸橼酸杆菌18株,采用VITEK 2全自动鉴定药敏仪进行菌种鉴定和药敏试验;通过接合试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)及Southern印迹杂交试验对bla_(NDM-1)基因的水平传播机制进行研究。结果 18株细菌对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类抗生素的耐药率为100%,对其他抗生素也呈现不同程度的耐药;13株细菌接合试验成功,接合子对碳青霉烯类抗生素耐药;PFGE及Southern印迹杂交试验表明16株细菌中bla_(NDM-1)基因均位于约33.3kb大小的质粒上,剩余2株细菌的bla_(NDM-1)基因位于33.3～54.7kb大小的质粒上。结论质粒介导碳青霉烯类耐药弗劳地枸橼酸杆菌中bla_(NDM-1)基因水平转移。

重庆某三甲医院耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌感染危险因素分析及分子流行病学调查

目的分析耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌(Carbapenem resistant Citrobacter freundii,CRCF)感染危险因素及分子流行病学特征。方法收集来自重庆医科大学附属第二医院2013年1月-2018年3月138例弗劳地枸橼酸杆菌感染患者临床资料,按照是否对碳青霉烯类抗生素耐药分为两组,CRCF组32例,非CRCF(Non-CRCF,NCRCF)组106例;用卡方检验及多因素logistic回归分析方法分析CRCF感染的危险因素;多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性。结果 138株弗劳地枸橼酸杆菌中CRCF检出率为23. 2%;多因素logistic回归分析显示肿瘤(OR=4. 057,95%CI=1. 574～10. 458,P=0. 004)和手术(OR=2. 938,95%CI=1. 160～7. 441,P=0. 023)是CRCF感染的独立危险因素;共有7个MLST克隆型,以ST22(n=9)和ST115(n=9)型多见,两个新的ST型已被PubMlst数据库收录并分别命名为ST115和ST116; PFGE与MLST分型结果基本保持一致。结论肿瘤和手术是CRCF感染的独立危险因素; ST22和ST115是CRCF感染的优势克隆型;应加强对CRCF的监测和控制,预防CRCF的播散流行。

弗劳地枸橼酸杆菌分离鉴定及其三重PCR 检测方法的建立

为鉴定导致鲫鱼嘴部溃烂、肛门红肿、腹部有出血点症状的病原菌,并建立一种快速检测该病原菌的方法,本研究采用形态学、生理生化特性分析及16S rDNA序列分析方法从患病鲫鱼中分离鉴定病原菌株,并进行了动物回归实验。结果显示,从患病鲫鱼中分离菌株为弗劳地枸橼酸杆菌(Citrobacter freundii),命名为fsznc-08,该菌对鲫鱼具有致病性。针对该菌GalF基因、petA基因和FliC基因设计了3条特异性引物,通过对反应体系和条件的优化,建立了检测该菌的三重PCR方法,结果显示,三重PCR方法可准确扩增出弗劳地枸橼酸杆菌GalF、petA和FliC 3个目的基因,而其它菌株均未扩增出目的基因,特异性良好;该方法对该菌DNA最低检出限为6.09×101拷贝/μL。利用该方法检测人工感染患病鱼样品的阳性率约为93.33%,与单一PCR方法的检测率一致,但特异性和敏感性均高于单一PCR。本实验建立的弗劳地枸橼酸杆菌三重PCR检测法具有特异性强、敏感性高、操作简单、成本低的优点,为临床弗劳地枸橼酸杆菌的检测提供可行方法。

弗劳地枸橼酸杆菌引发大连某公司员工食物中毒的调查报告

目的:分析大连某公司部分员工发生食物中毒的原因、特点、致病菌及防控措施。方法:应用流行病学和卫生学调查方法进行发病经过和病例调查、现场卫生勘验与控制。结果:(1)发病时间为2008年7月19日0-6时,潜伏期为7～13h、平均10h;(2)共有19人发病,主要症状为上腹部阵发性疼痛(占89.5%)和水样便(占89.5%),对症治疗后预后良好;(3)引起中毒的餐次为7月18日晚餐,从剩余晚餐标本和患者粪便标本中检出弗劳地枸橼酸杆菌。结论:本次事件是一起由弗劳地枸橼酸杆菌引起的细菌性食物中毒,中毒餐次为7月18日晚餐;弗劳地枸橼酸杆菌所致食物中毒潜伏期短,主要症状为腹泻和腹痛,对症治疗后预后良好。

1例先天性心脏病患儿术后感染多重耐药弗劳地枸橼酸杆菌的药学服务

目的:探讨临床药师为多重耐药弗劳地枸橼酸杆菌感染患儿提供药学服务的意义。方法:通过药师参与1例由弗劳地枸橼酸杆菌引起的血流感染患儿的治疗过程,讨论弗劳地枸橼酸杆菌多重耐药的抗感染策略,并进行充分的药学监护。结果:弗劳地枸橼酸杆菌多重耐药应选择敏感的抗菌药物治疗方案,严密监测可能发生的不良反应。该患儿应用阿米卡星治疗后体温恢复正常,复测血培养阴性,预后良好。结论:临床药师全程参与该患儿抗感染方案的制定,可优化治疗方案,提高临床治疗的有效性和安全性,体现药师的价值。