宿主细胞弗林蛋白酶对SARS-CoV-2刺突蛋白切割作用的研究

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)S蛋白与宿主表面受体ACE2结合后,S蛋白中的Furin裂解位点RRAR被宿主细胞内的弗林蛋白酶(Furin)识别,并将S蛋白切割为S1/S2亚基。为研究Furin对SARS-CoV-2S蛋白的切割活性、对病毒的感染性及其形成细胞-细胞膜融合(合胞体)的影响,本研究采用套式PCR分别扩增S蛋白Furin裂解位点突变(将裂解位点由RRAR分别突变为RRRR、SRAS和AAAA)的编码基因片段,并分别克隆至pCAGGS载体中,构建重组质粒pRRRR-Flag、pSRAS-Flag、pAAAA-Flag,均经酶切和测序鉴定正确后构建pEGFP-RRRR、pEGFP-SRAS、pEGFP-AAAA质粒并经测序鉴定。采用慢病毒包装系统包装慢病毒后感染Huh7细胞,48 h后采用杀稻瘟菌素筛选共表达ACE2和TMPRSS2的Huh7细胞系Huh7-A+T;利用CRISPR-Cas9方法构建Furin敲除(Furin-KO)细胞系,并均经western blot鉴定。结果显示,上述两种细胞均正确构建。将与Flag融合表达的RRAR、RRRR、SRAS和AAAA质粒分别转染HEK293T细胞,24 h后利用western blot检测S蛋白的表达。将pRRAR-Flag和pFurin-His共转染HEK293T细胞;同时将pRRAR-Flag分别转染HEK293T和Furin-KO细胞,24 h后利用western blot检测上述两种细胞中S蛋白的表达。结果显示,转染pRRAR-Flag的细胞中检测到S蛋白和S2亚基的表达,即Furin能够切割S蛋白,但转染pAAAA-Flag和pSRAS-Flag的细胞中均检测不到S2亚基的表达,转染p RRRR-Flag的细胞中S2亚基的表达量增加。与仅转染pRRAR-Flag的对照细胞相比,在HEK293T细胞中共转染pFurin-His和pRRAR-Flag能够显著增加S蛋白切割为S2亚基的量;而在Furin-KO细胞中未检测到S2亚基的表达。采用假病毒系统包装Furin裂解位点RRAR及其突变体(SRAS、AAAA)的假病毒SARS-CoV-2;利用HEK293T和Furin-KO细胞包装SARS-CoV-2假病毒,通过计算荧光素酶活性Luc与各病毒p24蛋白含量的比值比较不同假病毒对Huh7-A+T细胞及内源性Furin对两种细胞包装的假病毒的相对感染性。结果显示,与pRRAR-Flag及HEK293T细胞包装的假病毒相比,pSRAS-Flag和pAAAA-Flag及Furin-KO细胞包装的假病毒对Huh7-A+T细胞的感染性均极显著降低(P<0.01)。将质粒pEGFP-RRAR、pEGFP-RRRR、pEGFP-SRAS、pEGFP-AAAA与pEGFP-Furin分别转染HeLa细胞,24 h后经激光共聚焦显微镜观察Furin蛋白和S蛋白在细胞中的定位;将前4种质粒与表达Furin-His的质粒共转染HeLa细胞,24 h后经间接免疫荧光试验(IFA)检测Furin蛋白和S蛋白及其突变体在细胞中共定位。观察结果可见,Furin蛋白主要位于细胞浆中,S蛋白与Furin裂解位点突变的S蛋白均位于细胞膜;IFA结果显示,Furin与S蛋白及Furin裂解位点突变为RRRR的S蛋白在细胞浆中均存在共定位,但与Furin裂解位点突变为AAAA的S蛋白不存在共定位。将pRRAR-Flag、pSRAS-Flag分别与pCAGGS-m Cherry共转染HEK293T细胞,同时利用细胞示踪剂(CMFDA)预处理Huh7-A+T细胞1 h后将两种细胞混合培养,24 h后观察结果显示,共转染pRRAR-Flag和pCAGGS-m Cherry的HEK293T中出现明显的合胞体,而当Furin裂解位点突变为SRAS时,合胞体的形成明显减少。本研究首次证实Furin在细胞浆中对S蛋白预切割,且将S蛋白的Furin裂解位点突变为SRAS后能够降低SARS-CoV-2的感染性和细胞合胞体的形成能力。本研究为新冠疫情的防治提供新思路。

虚拟筛选和分子动力学模拟研究:筛选弗林蛋白酶的潜在抑制剂

通过分子对接和分子动力学模拟的方法,进行基于弗林蛋白(Furin)受体的虚拟筛选,以寻找Furin的潜在抑制剂。利用Sybyl软件构建基于Furin受体的药效团模型,在ZINC数据库中筛选出符合药效团模型的小分子,将小分子与Furin蛋白进行分子对接,最终筛选出4个符合条件的小分子。对4个复合物进行100 ns分子动力学模拟,并对轨迹进行RMSD和RMSF分析。通过分子力学-广义Born表面积法(MMGBSA)分析Furin受体和小分子配体平衡后的结合能,对比发现ZINC7664的结合能最低。所以小分子ZINC7664与Furin受体的结合最稳定,具有较好的应用前景,可用于设计有效的抑制Furin的药物。

新疆哈萨克族人弗林蛋白Furin基因变异与高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症的相关性

目的研究新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白(Furin)基因变异的相关性。方法本研究是以横断面流行病学调查为基础的病例-对照研究,878例研究对象均来自新疆哈萨克族自然人群。测定48例随机选择的哈萨克族高胆固醇血症患者(女性24例、男性24例)弗林蛋白基因启动子、外显子区序列,筛查代表性变异。采用TaqMan PCR分析弗林蛋白基因变异在878例哈萨克族自然人群(男性370例、女性508例)中的分型,分析其与哈萨克族人血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平的相关性。结果在48例高胆固醇血症患者中,共筛查出弗林蛋白基因的12个变异,包括4个代表性变异(rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178)。4个代表性变异均在大样本哈萨克族人中基因型分型成功(成功率≥99%)。在哈萨克族自然人群中,rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多态性的基因型、等位基因、单体型频率分别在高胆固醇血症组、对照组间及高低密度脂蛋白胆固醇血症组、对照组间的分布差异均无统计学意义(P均>0.05);每个多态性的不同基因型携带者之间的血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇平均水平差异无统计学意义(P均>0.05)。结论新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白基因变异不相关,该变异可能不是哈萨克族人高胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症的易感因素。

肾透明细胞癌中弗林蛋白酶、C-myc和Bcl-2的表达及意义

目的探讨肾透明细胞癌组织中弗林蛋白酶(Furin)、人C-myc癌基因产物(C-myc)和B细胞淋巴瘤/白血病基因(Bcl)-2的表达及临床意义。方法 123例肾透明细胞癌临床资料及术后存档的蜡块组织作为观察组,80例正常肾组织作为对照组。应用免疫组化SP法检测两组中Furin、C-myc和Bcl-2的表达。结果两组中Furin、C-myc和Bcl-2的表达差别显著。观察组Furin、C-myc和Bcl-2的表达与肿瘤的细胞核分级、Ki67增殖指数及是否伴有坏死密切相关。相关性分析显示观察组中Furin、C-myc和Bcl-2的表达均无明显相关性(P>0.05)。结论 Furin、C-myc和Bcl-2高表达是肾透明细胞癌发生发展的促进因素,三者间未见明显关联性。

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞弗林蛋白酶表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)弗林蛋白酶表达的影响,初步探讨在高血压中,AngⅡ导致纤维化病变形成的作用机制。方法选择体外培养大鼠VSMCs,按实验方案给予不同浓度AngⅡ作用24 h后,采用实时定量PCR和Western blot法,检测各组细胞弗林蛋白酶mRNA及蛋白的表达量;用荧光分析法检测各组弗林蛋白酶的活性。本实验共分为5组;对照组、AngⅡ10^(-7)mol/L组、AngⅡ10^(-6)mol/L组、AngⅡ10^(-5)mol/L组、AngⅡ10^(-4)mol/L组。结果与对照组比较,不同浓度AngⅡ组弗林蛋白酶mRNA表达量及活性均明显升高,AngⅡ10^(-5)mol/L组和AngⅡ10^(-4)mol/L组升高更明显,AngⅡ10^(-4)mol/L组达到最大值(P<0.05,P<0.01)。结论 AngⅡ能够促进大鼠VSMCs中弗林蛋白酶的表达,AngⅡ可能通过促进弗林蛋白酶的表达,使活性转化生长因子β产生增加从而促进纤维化病变的形成。

弗林蛋白酶的研究进展

弗林蛋白酶(Furin)属于枯草杆菌蛋白酶家族的细胞内丝氨酸Ca2+依赖性内肽酶,是前蛋白转化酶(PCs)家族中的一员,在人体的各种组织和细胞中普遍存在。Furin分别在内质网和高尔基体中进行自剪切后活化,活化后的Furin能激活细胞内众多具有重要功能的蛋白质前体。Furin在人体众多的生理过程中处于必不可少的位置,它不仅出现于各种前体蛋白加工以及许多生长因子的成熟过程中,还涉及许多疾病,如由新冠病毒引起的感染、骨相关疾病和肿瘤等,具有重要的生物学功能。

弗林蛋白酶抑制剂对乳腺癌细胞MCF-7迁移的影响

目的:探讨乳腺癌转移的机制,为深入研究乳腺癌发生、发展机制提供理论基础。方法:不同浓度的弗林蛋白酶(furin)抑制剂处理人乳腺癌细胞MCF-7 48 h。细胞划痕实验(wound healing assay)和细胞趋化实验(Transwell assay)检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力。Western blotting检测细胞迁移相关蛋白膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)、血管内皮生长因子(VEGF)-C和VEGF-D水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中基质金属蛋白酶(MMP)2和9水平。结果:与对照组相比,200 nmol/L的furin抑制剂α1-PDX即对细胞迁移及侵袭起显著抑制作用(均P<0.05);细胞迁移相关的MT1-MMP、VEGF-C和VEGF-D表达水平均显著降低(P<0.05);MCF-7细胞上清液中MMP2和MMP9的表达均显著降低(P<0.05)。结论:Furin抑制剂通过下调乳腺癌细胞MCF-7的MMPs及VEGFs表达抑制其迁移。

原发性舍格伦综合征患者血浆弗林蛋白酶和Th1型细胞因子水平表达与唇腺损害及相关腺体功能的关系研究

目的探讨原发性舍格伦综合征(pSS)患者血浆弗林蛋白酶(FURIN)和辅助性T细胞1(Th1)型细胞因子水平表达与唇腺损害及相关腺体功能的关系。方法将邯郸市中心医院2017年8月~2019年8月收治的pSS患者109例作为pSS组,选取同期于邯郸市中心医院体检的健康志愿者90例作为对照组。比较两组血浆FURIN水平及Th1型细胞因子[白介素(IL)-2,IL-7,γ干扰素(INF-γ)]与Th2型细胞因子(IL-4,IL-13)水平。根据欧洲抗风湿联盟舍格伦综合征疾病活动指数(ESSDAI)将患者分成轻度组(n=37)、中度组(n=48)和重度组(n=24),比较三组上述各指标水平与唇腺损害及相关腺体功能指标(唾液流率、唇腺病理分级和Schirmer试验)水平。分析pSS患者抗SSA抗体、抗SSB抗体、血浆FURIN及Th1和Th2型细胞因子的关系,并观察血浆FURIN水平和Th1,Th2型细胞因子水平与唇腺损害及相关腺体功能指标的相关性。结果pSS组血浆FURIN及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平均高于对照组(t=8.054~156.875,均P<0.05),Th1/Th2低于对照组(t=3.624,P=0.000)。中、重度组血浆FURIN及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平、唇腺病理评分高于轻度组(t=5.339~36.092,均P<0.05),且重度组高于中度组(t=4.240~13.707,均P<0.05),而中、重度组Th1/Th2,唾液流率及左、右眼Schirmer试纸浸湿长度低于轻度组(t=3.013~42.715,均P<0.05),且重度组低于中度组(t=3.178~18.641,均P<0.05),差异均有统计学意义。抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性患者的血浆FURIN水平及血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平高于阴性患者(t=2.560~14.333,均P<0.05),Th1/Th2低于阴性患者(t=2.363~4.604,均P<0.05),差异有统计学意义。血浆FURIN水平与血清IL-2,IL-7,INF-γ,IL-4,IL-13水平及唇腺病理评分呈正相关(r=0.362~0.640,均P<0.05),与Th1/Th2,唾液流率及左、右眼Schirmer试纸浸湿长度呈负相关(r=-0.715~-0.404,均P<0.05)。结论pSS患者血浆FURIN水平明显升高,且其水平变化和Th1及Th2型细胞因子水平与唇腺损害及相关腺体功能指标相关,临床可能通过测定血浆FURIN水平,进一步了解pSS的发病机制。

弗林蛋白酶—一种重要的前体蛋白内切蛋白酶

在真核生物细胞中,许多具有生物活性的多肽和蛋白是在其分泌过程中由前体蛋白经内切蛋白酶切割后激活形成的。弗林蛋白酶(Furin)就是这个内切蛋白酶家族重要成员之一,它可以识别剪切多种蛋白质,如生长因子、血清蛋白、基质金属蛋白酶、受体、病毒囊膜蛋白和细菌外毒素等。近年来Furin得到了迅速而广泛的研究,本文简介了它的表达与加工运输、生物学功能、与病毒侵染的关系,以及它的抑制剂。

肺腺癌CT增强值与弗林蛋白酶、基质金属蛋白酶-14表达的关系

目的观察肺腺癌患者CT增强值与术后癌组织中弗林蛋白酶(Furin)和基质金属蛋白酶-14(MMP-14)表达的关系。方法选择在该院确诊为肺腺癌的患者97例作为研究对象,均行CT增强扫描,术后标本应用免疫组化方法检测Furin和MMP-14的表达。结果肿瘤中CT增强值、Furin和MMP-14的阳性率在不同肿瘤的最大径、胸膜侵犯和Ki67增殖指数均表现出了明显差异,其病理状况越差,肿瘤中CT增强值、Furin和MMP-14的阳性率越高(P<0.05)。表达强度中,Furin和MMP-14表达强度比较,差异无统计学意义(P>0.05),且病理状况越差,强阳性与阳性例数所占比例越高(P<0.05)。肺腺癌中CT增强值与Furin(r=0.45,P=0.0485)、MMP-14(r=0.49,P=0.0341)均呈显著正相关(P<0.05)。结论肺腺癌患者CT增强值及Furin和MMP-14与肿瘤病况有密切关联,术前进行CT扫描可一定程度上反映Furin和MMP-14的表达。

弗林蛋白酶、转移抑制基因23和血管内皮生长因子在老年眼睑基底细胞癌中的表达及意义

目的检测老年眼睑基底细胞癌中弗林蛋白酶(Furin)、转移抑制基因(nm)23和血管内皮生长因子(VEGF)表达特点及临床意义。方法收集79例老年眼睑基底细胞癌术后组织蜡块及临床资料为观察组,老年基底细胞乳头状瘤术后组织蜡块56例为对照组,切缘为正常皮肤组织的56例为正常对照组,应用免疫组化方法检测3组Furin、nm23和VEGF表达。结果 Furin、nm23和VEGF在3组中表达阳性率差别显著(P均<0.01),观察组中Furin、nm23和VEGF表达与肿瘤最大径、脉管浸润和TNM分期密切相关(P均<0.05)。观察组中Furin和VEGF表达呈正相关(r=0.04,P=0.043),Furin和nm23表达呈负相关(r=-0.49,P=0.034 8)。结论老年眼睑基底细胞癌术后组织中Furin、nm23和VEGF异常表达,三者在肿瘤癌变及肿瘤进展过程中可能起促进作用。Furin可能通过促进VEGF表达对肿瘤血管生成有一定的调节作用。

弗林蛋白酶裂解位点在微生物感染宿主中的作用

弗林蛋白酶(Furin)裂解位点广泛存在于微生物前体蛋白中,它在病原感染宿主的过程中被Furin识别并裂解活化,从而使病原微生物进入细胞并发挥致病作用;它还与病原感染宿主过程中的毒力、宿主和细胞嗜性等相关;它可能还是微生物传播效率和规模影响因素之一。为此,本文对其在微生物感染宿主中所起的作用进行了详细综述,以期为微生物致病机制的研究和阻断药物的开发提供参考。

弗林蛋白酶(furin)多肽抑制剂的合成研究

目的以绿豆胰蛋白酶抑制剂(MBTI)Lys活性片段22肽为模板,设计能抑制弗林蛋白酶(furin)的多肽抑制剂。方法根据furin的专一性底物的特定氨基酸序列来改造设计抑制剂,用Fmoc法固相合成了两条多肽抑制剂(MBI 13和MBI 14)。结果纯化的MBI13和MBI14经HPLC和质谱鉴定合成正确,对furin的抑制常数分别为:5.6×10-7M和2.3×10-7M。结论以MBTI Lys片段为模板经过突变和优化设计,得到了较为理想的furin抑制剂,为进一步的药物设计提供依据。

磷酸弗林蛋白酶酸性氨基酸簇分选蛋白-2在代谢综合征及糖尿病肾病中的研究进展

磷酸弗林蛋白酶酸性氨基酸簇分选蛋白-2(phosphofurin acidic cluster sorting protein-2,PACS-2)是一种具有膜转运及维持线粒体相关内质网膜(mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane,MAM)结构与功能的多功能蛋白。近年研究发现PACS-2不仅参与调节细胞凋亡等细胞生理与病理活动,同时参与MAM结构调节及胰岛素功能调节,与代谢综合征及糖尿病肾病等多种疾病发病机制相关,并有望成为相关疾病的药物新治疗靶点。本文就国内外有关PACS-2分子特征、表达定位、生物学功能及其在代谢综合征与糖尿病肾病研究中的最新进展进行阐述。

^(19)F核磁共振探针用于体外和活细胞内弗林蛋白酶的活性检测

设计合成了19F磁共振成像探针CBT-Lys(FMBA)-Cys(StBu)-Arg-Arg-Val-Arg-Ac(1),经GSH还原和肿瘤细胞内高表达的弗林蛋白酶识别剪切后,1,2-氨基硫醇与氰基发生缩合反应生成二聚体,其具有亲脂性的大环内核,可以通过π-π堆积自组装形成纳米粒子,导致19F核磁共振信号因横向弛豫而消失.使用透射电镜(TEM)、扫描电镜(SEM)、高效液相色谱(HPLC)对生成的纳米粒子的组成和结构进行了表征,通过细胞摄取和19F NMR波谱分析其对弗林蛋白酶的检测能力.结果表明,该探针很容易被细胞摄取,能够检测肿瘤细胞中的弗林蛋白酶,使之19 F NMR信号消失,可潜在应用于19F磁共振成像.

弗林蛋白酶裂解位点对IBV致病性的影响机制

传染性支气管炎病毒(IBV)属于γ冠状病毒,是人类分离到的第一种冠状病毒,主要损伤鸡的呼吸系统和泌尿生殖系统,严重影响我国及世界养禽业的健康发展。IBV主要编码4个结构蛋白:S、E、M和N。其中,S蛋白含有S1/S2和S2’两个裂解位点。近年研究表明,S2’位置的弗林蛋白酶裂解位点(FCS)对MHV和SARS-Co V侵入易感细胞的途径具有重要调控作用,对IBV Beaudette株的传代细胞适应性起决定作用,FCS的缺失会导致Beaudette株无法在细胞系中正常生长。

弗林蛋白酶切割位点影响冠状病毒细胞入侵的研究进展

弗林蛋白酶是一种宿主丝氨酸蛋白酶,在多种生理功能中发挥重要作用,是人体正常发育所必需的蛋白酶,与多种病毒的细胞入侵、感染性、毒力等密切相关。冠状病毒为单股正链RNA病毒,外膜有蘑菇状刺突蛋白(spike,S),弗林蛋白酶的切割位点广泛存在于冠状病毒S中。弗林蛋白酶对于冠状病毒入侵宿主细胞起着至关重要的作用。此文重点综述弗林蛋白酶切割位点对各种冠状病毒入侵宿主细胞的影响,总结了该酶作为病毒入侵潜在药物靶点的最新进展,为其在病毒感染中的机制研究以及作为靶点的药物研发提供理论支持。

弗林蛋白酶:一种广泛参与前体蛋白切割的内切蛋白酶

弗林蛋白酶(Furin)是真核生物细胞中一种重要的内切蛋白酶。Furin能识别特定的氨基酸序列,在内质网-高尔基体中经两次自剪切活化后,对分泌途径中许多重要的多肽和蛋白的前体进行剪切加工,使之具有生物活性。Furin底物广泛,包括大多数的肽类激素、许多生长因子、受体、黏附分子、基质金属蛋白酶和某些病毒包装糖蛋白以及细菌外毒素,因此具有重要的生物学功能,并与许多疾病的发生发展有密切的关系。

磷酸弗林酸性簇分选蛋白2对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大的影响及其机制

目的探究磷酸弗林酸性簇分选蛋白2(PACS-2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的影响及其机制。方法剪取并消化出生1~2 d的SD大鼠乳鼠的心脏组织,采用差速贴壁法获取乳鼠心肌细胞(NRCMs),原代培养24 h。以浓度为1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,采用Western blot方法检测细胞中FUN14域蛋白1(FUNDC1)、PACS-2、三磷酸肌醇受体蛋白(IP3R)的表达水平,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测细胞中心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA的表达水平。将NRCMs分为A~C组,A组使用无血清培养基培养,B、C组分别转染si-NC和si-PACS-2,采用Western blot方法检测各组细胞中PACS-2蛋白的表达水平。将NRCMs分为D~G组,D组使用无血清培养基培养,E组以浓度0.15μmol/L的AngⅡ培养,F、G组分别转染si-NC、si-PACS-2后再以浓度0.15μmol/L的AngⅡ培养,采用TRITC-鬼笔环肽染色技术检测各组心肌细胞表面积,RT-qPCR检测各组细胞ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平,以Fluo-4,AM探针检测各组细胞胞质Ca^(2+)的水平。将NRCMs分为H~K组,H组使用无血清培养基培养,I、J组分别转染si-NC、si-PACS-2,K组转染si-PACS-2并且以浓度1μmol/L的钙调蛋白(CaM)拮抗剂处理后,采用RT-qPCR方法检测各组细胞ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平。结果以浓度1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,NRCMs中ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平呈时间依赖性上调(F=25.73~58.30,P<0.05),并且处理第24小时时相较于第0小时时均显著上调(t=5.35~37.50,P<0.05)。以浓度1.5μmol/L的AngⅡ处理NRCMs 0、3、6、12、24 h,NRCMs中IP3R、PACS-2以及FUNDC1蛋白的表达水平均呈时间依赖性下调(F=5.37~9.07,P<0.05),并且处理第24小时时相较于第0小时时显著下调(t=6.55~7.42,P<0.05)。与B组相比,C组NRCMs中PACS-2蛋白的表达水平显著下调(t=5.92,P<0.05)。与F组相比,G组NRCMs中心肌细胞表面积增大,ANP、BNP、β-MHC mRNA的表达水平及胞质Ca^(2+)水平均上调(t=3.50~26.60,P<0.05)。与J组相比,K组NRCMs中ANP、BNP、β-MHC mRNA表达水平均显著下调(t=3.27~5.13,P<0.05)。结论敲低PACS-2可增加NRCMs中胞质Ca^(^(2+))水平,并且可能以Ca^(^(2+))-CaM依赖的方式加重AngⅡ诱导的心肌肥大的发生。

氧化低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞弗林蛋白酶表达的影响

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)弗林蛋白酶(furin)表达的影响,初步探讨ox-LDL影响活性转化生长因子-β(TGF-β)产生的作用机制。方法:本实验分为5组:对照组,ox-LDL 20、40、80、100mg/L组;体外培养大鼠VSMCs,按实验方案给予不同浓度ox-LDL作用24h后,采用实时定量PCR和western blot方法检测各组细胞furin的mRNA及蛋白表达量,用荧光分析法检测各组furin的活性。结果:与对照组比较,ox-LDL 20、40mg/L组的furin蛋白表达量升高[(0.628±0.013),(0.991±0.009),(1.078±0.033),P<0.01],而ox-LDL 80、100mg/L组furin的蛋白表达量下降[(0.584±0.017),(0.559±0.021),P<0.05]。结论:低浓度ox-LDL(20、40mg/L)促进大鼠VSMCs中furin的表达,而高浓度ox-LDL(80、100mg/L)则抑制furin的表达;ox-LDL可能通过furin途径影响活性TGF-β的产生,从而影响斑块的稳定性。