生防菌弗氏链霉菌S-221所产抗菌物质的抗菌活性测定

对弗氏链霉菌S-221所产抗菌物质的抗菌活性进行研究,通过弗氏链霉菌S-221所产抗菌物质对7种细菌和10种植物病原真菌的抗菌活性测定,抗菌活性物质对被检测的大肠杆菌7种细菌最低抑菌质量浓度为:0.098～3.130 mg/L;抗菌活性物质分别对水稻纹枯病等供试10种病原真菌的EC50为0.39～4.83 mg/L和EC90范围为8.17～28.44 mg/L。实验结果显示弗氏链霉菌S-221所产抗菌物质具有广谱和强效的抗菌性,具有较广的应用前景。

弗氏链霉菌S-221变种发酵液的抗菌活性及稳定性研究

采用管碟法和抑制菌丝生长法测定了弗氏链霉菌S-221发酵液对细菌和10种植物病原菌的抑菌活性。结果表明,发酵液对革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌都有很强的抑菌活性,同时对10种植物病原菌、真菌也具有很强的抑菌活性。通过对发酵液稳定性的初步研究,结果表明发酵液中的抑菌活性物质对温度、紫外光和pH值稳定。

响应面法优化弗氏链霉菌S-221变种发酵培养基

用响应面法对弗氏链霉菌S 2 2 1变种液体发酵生产氨基酸的培养基进行了优化。首先,用全因子试验方法对相关影响因素的效应进行评价,并筛选出有显著效应的羽毛胨和蛋白胨两个因素,第2步用最陡爬坡实验逼近以上两因素最优水平。最后由中心组合设计法及响应面分析确定主要影响因素的最佳条件。在优化培养条件下,发酵液中氨基酸浓度从4 1g/ 10 0mL提高到6 4 12g/ 10 0mL。

弗氏链霉菌变种S-221所产生物活性物质抑菌活性的初步研究

利用无水乙醇分别从弗氏链霉菌变种S-221摇瓶发酵液的上清液和菌丝体中提取生物活性物质,分别对不同细菌、酵母菌和霉菌进行抑菌活性的测定。结果表明,上清液和菌丝体的乙醇提取液对蜡质芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、啤酒酵母、木霉、毛霉、黑曲霉均有较强的抑菌活性。

弗氏链霉菌变种S-221所产生物活性物质对细菌、霉菌及酵母类抑菌效果的初步研究

弗氏链霉菌变种S-221的摇瓶发酵液用无水乙醇提取,制备成弗氏链霉菌变种S-221生物防腐剂200倍稀释液,分别在牛肉膏蛋白胨培养基平板上测定了5种不同的细菌,在马铃薯葡萄糖培养基平板上测定了5种霉菌和3种酵母菌。除大肠杆菌的抑菌效果为94.2%和金黄色葡萄球菌的抑菌效果为98%以外,其余菌的抑菌效果达到100%;对制备好的平板暴露在空气中自然接种微生物的抑菌效果也达到100%。

弗氏链霉菌变种S-221产弹性蛋白酶发酵培养基的优化研究

通过对弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)变种S-221产弹性蛋白酶发酵培养基的优化,以提高该菌株所产的弹性蛋白酶酶活。试验采用单因素与正交试验对发酵培养基的成分进行优化研究。优化后发酵培养基的成分为:果糖6%,干酪素1.5%,碳酸铵0.3%,K2HPO4.3H2O 0.05%,MnSO4.H2O 0.001%。在此条件下该菌所产弹性蛋白酶酶活达到96.63 U/mL,优化后的发酵培养基与优化前相比所产弹性蛋白酶酶活提高了30%。

弗氏链霉菌丝氨酸蛋白酶基因的克隆及表达

从一株具有极强的降解羽毛能力的弗氏链霉菌菌株(Streptomycesfradiaevar.k11)中纯化得到了一种丝氨酸蛋白酶SFP2。经蛋白测序,得到部分氨基酸序列,设计简并引物,PCR扩增得到部分基因序列,通过构建基因文库,获得了包括信号肽序列在内的完整的基因sfp2(EMBL收录号AJ784940),开放阅读框全长924bp,包括114bp的信号肽编码序列和810bp的酶原编码序列,其中成熟蛋白编码基因长576bp,编码191个氨基酸,理论分子量为19.112kD。酶原编码基因和成熟蛋白编码基因均在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中得到了表达,酶原编码基因表达产物具有正常的生物学活性,证明了克隆基因的生物学功能。

从弗氏链霉菌中筛到的1株泰乐菌素产生菌

以泰乐菌素（Ｔｙｌｏｓｉｎ）标准品为对照，采用纸层析法对收集到的１１株弗氏链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉａｅ）的发酵滤液进行鉴别，发现其中０２８菌株的纸层析谱与标准品完全相同。进一步将该菌株经ＮＴＧ诱变后，筛选获得的１株突变株Ｈ１８８，进行摇瓶发酵。并从发酵滤液中分离、提取得到纯品。经紫外分光光度计和高效液相色谱检测表明，它与泰乐菌素标准品属同一物质。从而证明０２８菌株是１株泰乐菌素产生菌。

—株分解羽毛角蛋白的弗氏链霉菌变种的初步鉴定

自土壤中分离到链霉菌Ｓ－２２１菌株，该菌株对羽毛角蛋白有较强的分解利用能力。通过对该菌的培养特征、形态特征和生理生化特性测定，结果与已知的弗氏链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉ－ａｅ）形态特征和生理生化特性上基本相似，但在培养特征和分解利用羽毛角蛋白的特性方面有较大的差异。因此Ｓ－２２１菌株初步鉴定为弗氏链霉菌的一个变种，定名为弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｆｒａｄｉａｅｖａｒ．Ｓ－２２１Ｔｕ，１９９３）。

弗氏链霉菌YH-1菌株抗菌蛋白特性及其对玉米茎腐病菌的抗菌作用

以玉米茎腐病病原菌禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)为靶标菌,用硫酸铵分级沉淀菌株YH-1发酵液获得抗菌粗蛋白,采用混菌法研究抗菌蛋白对热、酸碱、蛋白酶及金属离子的稳定性,并进行了抗菌作用初步研究。结果表明,抗菌蛋白具有很好的耐热、耐酸碱和耐蛋白酶的特性,金属离子Mn2+对抗菌蛋白活性有一定的激活作用,Cu2+完全抑制活性,其他的一价及二价金属离子均有部分抑制作用,抗菌蛋白对禾谷镰刀菌菌丝生长有很强的抑制作用,并使菌丝畸形、局部产生膨大及分支增多、抑制孢子萌发。本研究为玉米茎腐病菌防治方法及途径提供理论基础。

弗氏链霉菌S1-1泰乐霉素发酵配方的筛选

依前人确定的弗氏链霉菌S1-1发酵的基质若干作为供试单因子，以正交设计法筛选得到了新的泰乐霉素发酵基质配方。该配方发酵效价的期望值较原配方的要高10．83％－16．53％。

泰洛星产生菌弗氏链霉菌变株TM4-180的生物学特性

本文报道泰洛星产生菌弗氏链霉菌诱变株的生物学特性:(1)变株TM4—180是弗氏链霉菌(StrePtomyces fradiae)A41多次诱变衍生的产生泰洛星并对泰洛星有高抗性(Tyl^+Tyl^r)的变株,其泰洛星产量是原始菌种A41的18倍。(2)用紫外线、亚硝基胍和光敏诱变剂等诱变剂做菌种诱变,效果很好。筛选的Tyl^+Ty1~r菌株,如TM1-32、TM4—180等产生抗生素的能力为直接亲株的160～200％。(3)TM4-180经γ—射线处理获得阻断变株TM5-221、TM5—257,它们不产生泰洛星,但其发酵时能产生泰洛星,其效价是单独发酵的10～20倍。(4)TM5—257(Tyl^-Tyl^r)用紫外线处理得变株TM5-257-60,它是泰洛星生物合成的回复突变株,具有隔代亲株TM4-180的相同功能。(5)变株TM4-180及有关菌株(Tyl^r)对泰洛星具有抗性,在含5～10mg/ml的培养基中正常生长。而TM5—221等变株Tyl^3)对泰洛星敏感,可能泰洛星抗性基因tlr C缺失。抗药标记的变化,是DNA突变多样性的表现。

一株弗氏链霉菌噬菌体的分离及其分子特性研究

鉴定一株从泰乐菌素异常发酵液中分离出的烈性噬菌体SF1并研究其分子特性。采用双层平板法分离纯化弗氏链霉菌的噬菌体SF1,通过负染法电镜观察噬菌体SF1的大小和形态;测定噬菌体SF1对氯仿和异丙醇的敏感性分析其包膜结构;通过SDS-PAGE分析噬菌体的结构蛋白;提取噬菌体基因组DNA进行限制性片段长度多样性分析。噬菌体SF1的噬菌斑直径约11-15 mm,边缘整齐透明,为烈性噬菌体;SF1为长尾型,头部为多面体,直径约24-30 nm,尾长约52-64 nm,尾宽约为3-5 nm;对氯仿和异丙醇不敏感,无包膜;基因组为双链DNA,大小约为35 kb;至少含有14种相对分子量为14.8-59.5 k D的结构蛋白。

双拷贝tylD、tylF和tylJ弗氏链霉菌工程菌株构建及其发酵性能研究

以弗氏链霉菌工业生产菌株基因组DNA为模板,扩增泰乐星生物合成及组分转化关键基因tylD、tylF和tylJ,构建双拷贝tylD、tylF、tylJ弗氏链霉菌工程菌株。通过摇瓶发酵验证了工程菌株泰乐菌素发酵效价,并对筛选的一株工程菌利用荧光定量PCR检测其tylD、tylF和tylJ基因表达情况。研究结果表明,双拷贝tylD、tylF、tylJ弗氏链霉菌工程菌株泰乐菌素摇瓶发酵效价较出发菌株最高提高了28.1%,该菌株tylD、tylF、tylJ表达水平高于出发菌株,并且在进入稳定期后期表达量达到最大值。构建双拷贝tylD、tylF、tylJ弗氏链霉菌工程菌株可解除泰乐菌素合成限速环节,大幅度的提高泰乐菌素产量。

弗氏链霉菌tylF基因的克隆及其生物信息学分析

[目的]研究弗氏链霉菌tylF基因的克隆及其生物信息学分析。[方法]利用RT-PCR技术、巢式PCR技术和RACE技术从弗氏链霉菌B-62169菌株中克隆获得tyl F基因的全长c DNA序列,并对其生物信息学进行分析。[结果]经Vector NTI 11.0软件拼接获得tyl F基因全长c DNA序列长度为1 245 bp,并带有19 bp长的Poly(A)尾巴,包含927 bp的开放读码框(ORF),编码一个含309个氨基酸残基的蛋白质。生物信息学分析结果表明,tyl F基因编码的酶是大菌素-O-甲基转移酶,参与分子功能中甲基转移酶活性和生物学途径中甲基化过程。对tyl F基因全长c DNA序列进行蛋白质结构域分析,证实该基因编码Tyl F蛋白,并具有223个氨基酸蛋白结构域。[结论]该研究为阐明泰乐菌素生物合成过程中甲基化反应机理,更进一步研究大环内酯类抗生素生物合成代谢途径提供生物信息学数据支持。

弗氏链霉菌产硫酸新霉素高通量选育模型的建立及优化

建立基于多孔板发酵及酶标仪检测的高通量选育模型,提高诱变后硫酸新霉素高产菌株的筛选效率。对影响酶标仪检测的主要影响因素1.0×10^(-4)mol/L曲利本蓝的添加量(μL/m L)进行优化,并建立相应的分光光度法,对适用高通量筛选模型的微孔板进行选择,并对其发酵条件进行正交优化。结果表明,曲利本蓝的添加量为500μL/m L,硫酸新霉素在1.284～10.272 U/m L,吸光度与样品浓度呈良好的线性关系(R^2=0.998 8),平均回收率为98.468 4%,重复性RSD为3.270 0%;24孔板适用于高通量筛选模型,优化后发酵条件:转速、装液量和接种量分别为220 r/min、2 m L和8%,在此基础上,实际发酵效价达到(6 825±77)U/m L,较原发酵条件提高了27.40%。基于多孔板发酵及酶标仪检测建立高通量选育模型,能够达到诱变后快速筛选硫酸新霉素高产菌株的目的,也为后续高通量选育其他抗生素高产菌株奠定了基础。

抗生素链霉菌与弗氏链霉菌原生质体的种间电融合

许多链霉菌能够合成抗生素、酶及抗肿瘤剂等各种重要产物。最近,原生质体融合已经成为菌株改良的有效技术。对于链霉菌原生质体融合,几乎专门使用聚乙二醇(PEG)作促融剂。然而,同新发展的电融合法比较,该法存在许多缺点。因此,电融合法正成为酵母、植物及动物细胞融合的常规方法。虽然电融合法正在不同范围内推广使用,但对于像链霉菌这么小的原生质体,至今尚未加以应用。本文论述由抗生素链霉菌a20和弗氏链霉菌f2所制备的原生质体的电融合。利用由显微镜载玻片和铝箔构成的微型融合室来监测链霉菌原生质体的融合过程。

海洋弗氏链霉菌HNM0089抗真菌活性成分研究

为了从海洋微生物中寻找农药先导化合物,本研究通过16S rRNA基因序列分析对具有抗真菌活性的海洋放线菌HNM0089的种属进行鉴定,并对其抗真菌的活性成分进行研究。结果表明:海洋放线菌HNM0089被鉴定为弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)。利用高分辨质谱、一维和二维核磁波谱技术,将其主要活性成分鉴定为星形孢菌素(Staurosporine)。该化合物对芒果炭疽病菌、水稻稻瘟病菌、香蕉枯萎病菌、薯蓣炭疽病菌和橡胶炭疽病菌均有抑制活性,具有开发成农用抗菌素的潜力。

菜油对弗氏链霉菌甲基丙二酰CoA羧基转移酶活性的影响

大环内酯类抗生素泰洛星(tylosin)在养猪业上用作生长促进剂,并作为兽药用于治疗由革兰氏阳性菌和枝原体所引起的感染.对泰洛星的生物合成及其调节已研究多年.最近有关泰洛星生物合成途径的发现,使研究该途径所包含的酶以及任何可提高泰洛星产量的信息成为可能.泰洛星具有16元分支的内酯环,其生物合成需要3种前体:5个丙酸,2个乙酸。

等离子技术在弗氏链霉菌和侧耳属诱变选育中的应用

在室温常压条件下利用等离子射流对抗生素生产菌种弗氏链霉菌和侧耳属进行诱变，通过对菌落观察和死亡率、变异率、发酵能力的筛选统计，确定针对该两种微生物诱变的最佳照射时间分别为240—270s和25—30S，并分别从中筛选出高于出发株10．4％和9．6％的菌株。本实验可为菌种的诱变选育提供参考。