张力蛋白1抑制非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭

目的:探讨张力蛋白1(tensin1,TNS1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达水平、与NSCLC患者预后的关系及其对NSCLC细胞生物学功能的影响。方法:收集56例NSCLC患者的临床病理资料,通过电话方式进行随访,了解患者生存情况。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测56例NSCLC标本和对应癌旁组织中TNS1 mRNA表达水平,分析其与NSCLC患者临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析TNS1 mRNA与NSCLC患者预后的关系。采用qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测NSCLC细胞A549、H1299与正常肺支气管上皮16HBE细胞中TNS1 mRNA和蛋白表达水平;将A549、H1299细胞各分为2组,分别转染TNS1过表达质粒(pcDNA3.1/TNS1组)和相应的空载质粒(阴性对照pcDNA3.1组);MTT实验、克隆形成实验、细胞划痕、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞上皮间质转化相关分子蛋白水平。结果:与癌旁组织相比,NSCLC组织中TNS1 mRNA表达明显降低(P<0.05)。TNS1 mRNA表达量与NSCLC患者淋巴结转移及术后肿瘤转移相关(P<0.05),与年龄、性别、吸烟、病理分型、肿瘤大小、TNM分期无明显相关性(P>0.05)。TNS1 mRNA高表达患者的3年累积无病生存率和累积总体生存率均高于TNS1 mRNA低表达患者(P均<0.05)。A549和H1299细胞中TNS1 mRNA和蛋白表达量均明显低于16HBE细胞(P均<0.01)。与对照组相比,pcDNA3.1/TNS1组A549和H1299细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-钙黏蛋白表达明显上调(P<0.01),波形蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论:TNS1在NSCLC组织及细胞中表达下调,与NSCLC患者预后相关,可抑制NSCLC细胞增殖和迁移。

2型糖尿病病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1、Parkin蛋白、视神经蛋白表达与肾损伤程度的关系研究

目的探究2型糖尿病(T2DM)病人外周血同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)、Parkin蛋白、视神经蛋白(OPTN)表达及与肾损伤程度关系。方法选取2019年5月至2021年5月河南科技大学第一附属医院156例T2DM病人,根据糖尿病肾病(DN)诊断分期标准,分为非DN组92例、早期DN组(EDN组)38例、临床期DN组(CDN组)26例,另以同期60例健康体检者为健康组。比较四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量(荧光定量PCR法);采用Pearson相关分析法探究PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量与糖脂代谢空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及肾功能指标血尿素氮、血肌酐、预估肾小球滤过率(eGFR)、尿微量白蛋白/尿肌酐(UACR)、24 h尿蛋白排泄率(UAER)相关性,采用多因素logistic回归分析探究DN发生影响因素,绘制ROC曲线分析PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN诊断价值。结果CDN组、EDN组、非DN组、健康组外周血PINK1 mRNA表达量分别为0.31±0.17、0.44±0.20、0.69±0.35、0.73±0.34,Parkin蛋白mRNA分别为0.51±0.12、0.62±0.18、0.79±0.28、0.98±0.35,OPTNmRNA分别为0.05±0.01、0.10±0.03、0.14±0.05、0.18±0.07,四组病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量差异有统计学意义(P<0.05),均表现为CDN组<EDN组<非DN组<健康组。T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白表达量均与空腹血糖、HbA1c、血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05);OPTN与血尿素氮、血肌酐、UACR、UAER呈负相关(P<0.05),与eGFR呈正相关(P<0.05)。糖尿病病程、HbA1c、UACR、UAER是DN的独立危险因素(P<0.05),PINK1、Parkin蛋白、OPTN为其保护因素(P<0.05)。外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量诊断DN的ROC曲线下面积分别为0.709、0.754、0.839。结论T2DM病人外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量均下调,且随着病人肾损伤程度增加而降低,检测外周血PINK1、Parkin蛋白、OPTN表达量对DN有一定诊断价值。

张力蛋白1对放射性脑损伤小鼠认知功能的影响

目的探讨张力蛋白1(TNS1)对放射性脑损伤(RBI)小鼠认知功能的影响。方法选用6周龄健康的C57BL/6小鼠共40只,体质量为(20±2)g,随机将其分为正常对照组(Control组)、单纯放射组(Rad组)、慢病毒敲低TNS1放射组(Rad+LV组,LV即TNS1干扰慢病毒)、对照慢病毒放射组(Rad+LV-NC组,LV-NC即空载慢病毒),每组10只小鼠。(1)RBI模型小鼠的建立:C57BL/6小鼠深度麻醉后固定于木板上,使用医用直线加速器对小鼠进行单次全剂量全脑放射性照射(30 Gy)。(2)各组干预如下,Control组:在进行放射时,仅进行麻醉,不进行放射处理;Rad组:与Rad+LV-NC组、Rad+LV组同时进行30 Gy单次全剂量放射性照射;Rad+LV组:脑立体定位注射TNS1敲低慢病毒,3周后行30 Gy单次全剂量放射性照射;Rad+LV-NC组:脑立体定位注射LV-NC空载慢病毒,3周后行30 Gy单次全剂量放射性照射。实验过程中持续观察各组小鼠生长情况和一般状况,并于放射性照射后第6周进行行为学测试,通过旷场实验、悬尾实验观察小鼠生长情况,通过新物体识别实验和水迷宫实验来检测小鼠的认知功能。结果TNS1在RBI模型小鼠脑组织中表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05);LV3慢病毒可有效敲低BV2细胞及脑组织中TNS1表达,差异有统计学意义(P<0.05);Control组、Rad组、Rad+LV-NC组、Rad+LV组小鼠体质量生长情况及旷场实验总路程等实验结果比较,差异均无统计学意义(P>0.05);新物体识别实验中与Rad组小鼠相比,Rad+LV-NC组、Rad+LV组小鼠识别系数无显著差异(P>0.05);水迷宫实验显示,与Control组相比,Rad组、Rad+LV-NC组、Rad+LV组小鼠的空间记忆能力削弱,而Rad+LV组在第2天和第6天的潜伏期更长(P<0.05),第7天穿越平台时长更短(P<0.05),穿越平台次数显著减少(P<0.01),差异均有统计学意义。结论放射性照射后小鼠认知功能损伤,脑组织中TNS1表达量下降;降低脑组织中TNS1的含量在一定程度上加重了RBI模型小鼠的认知损伤。

磷酸酶和张力蛋白同源基因诱导激酶1与糖尿病难愈创面修复的研究进展

慢性难愈创面已成为糖尿病严重的并发症之一,且缺乏有效的治疗方法。大量研究证实糖尿病创面修复过程中炎性反应、血管形成及基质重塑等事件均与线粒体功能密切相关。磷酸酶和张力蛋白同源基因诱导激酶1(PINK1)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,主要定位在线粒体。PINK1参与调控线粒体自噬,保护细胞免受氧化应激损害;另外,其在调控炎性反应、促进脂质代谢等事件中发挥重要作用。PINK1基因突变与帕金森综合征发病密切相关。最近的研究显示PINK1可参与调控2型糖尿病的发生和发展进程。本文综述了PINK1参与糖尿病创面修复机制的最新研究进展,希望通过阐明PINK1调控创面修复的作用机制,发现目前该方面研究尚存的问题。现有研究未能揭示创面修复的不同阶段PINK1参与的分子机制与信号转导过程的时序性和交互作用,且目前仍缺乏PINK1调控糖尿病难愈创面修复的体内研究,期待后期进一步的临床研究为糖尿病难愈创面治疗提供更多思路。

同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1-Parkin通路在过敏性鼻炎中的作用机制

[目的]探讨同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PINK1)-Parkin通路在卵清蛋白(OVA)所致过敏性鼻炎(AR)中的作用机制.[方法]选择雌性BALB/c小鼠随机分为对照组和模型组,采用OVA致敏(25μg OVA)和激发(100μg OVA)的方法建立AR小鼠模型,在激发期间观察并记录两组小鼠的打喷嚏和挠鼻次数.采用HE染色方法观察鼻黏膜上皮细胞的形态和嗜酸性粒细胞的浸润情况;采用Western blot法检测两组小鼠鼻黏膜组织中PINK1、Parkin和线粒体凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及Caspase-3的表达水平.[结果]与对照组比较,模型组小鼠打喷嚏和挠鼻次数明显增多(P<0.05),鼻黏膜下炎性细胞浸润明显,鼻黏膜组织中PINK1、Parkin和促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达均显著升高,Bcl-2表达显著降低.[结论]P INK1-Parkin信号通路可能改善AR小鼠鼻黏膜组织的炎症反应,抑制炎症细胞因子的表达,对AR具有保护作用.

蛋白激酶PINK1与炎症及免疫反应

磷酸酶及张力蛋白同源物诱导的蛋白激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)是一种与线粒体自噬、帕金森病的发生发展密切相关的蛋白激酶。PINK1蛋白由581个氨基酸残基组成,具有高度保守的结构域,表达广泛。除了帕金森病,PINK1还参与多种疾病的发生、发展和调控,如肿瘤、糖尿病、心肺功能异常等。近年的研究表明,PINK1的表达影响T细胞的增殖和分化,抑制线粒体抗原递呈,参与调节机体固有免疫反应和炎症反应。另外,炎症小体NLRP3对肺内皮细胞的调节作用也与PINK1表达有关。PINK1也能通过NLRP3调节炎症介质的释放,参与脓毒症诱导的免疫代谢活动。本文就近年来PINK1与炎症、免疫反应的相关研究进行综述。

胃癌组织中LncRNA PINK1-AS、miR-134-5p表达及与患者临床病理参数和预后的关系

目的探讨胃癌组织中长链非编码核糖核酸(LncRNA)磷酸酯酶与张力蛋白同源物诱导激酶1反义核糖核酸(PINK1-AS)、微小核糖核酸-134-5p(miR-134-5p)表达及与患者临床病理参数和预后的关系。方法选取接受手术切除的胃癌患者104例,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测胃癌组织及对应癌旁组织中LncRNA PINK1-AS、miR-134-5p表达,分析胃癌组织中LncRNA PINK1-AS、miR-134-5p表达与临床病理参数的关系,采用Pearson法分析LncRNA PINK1-AS与miR-134-5p在胃癌组织中表达的相关性。根据胃癌组织LncRNA PINK1-AS、miR-134-5p表达的中位数分为LncRNA PINK1-AS、miR-134-5p高/低表达组,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。通过Cox回归分析胃癌患者死亡的影响因素。结果胃癌组织中LncRNA PINK1-AS表达高于癌旁组织,miR-134-5p表达低于癌旁组织(P均<0.05)。LncRNA PINK1-AS与miR-134-5p在胃癌组织中表达呈负相关(r=-0.707,P<0.05)。不同组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移的胃癌组织LncRNA PINK1-AS、miR-134-5p表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。随访3年,104例胃癌患者总生存率为61.54%(64/104)。LncRNA PINK1-AS高表达组3年总生存率低于LncRNA PINK1-AS低表达组,miR-134-5p高表达组3年总生存率高于miR-134-5p低表达组(P均<0.05)。胃癌患者死亡的独立危险因素为组织分化程度低分化、TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、LncRNA PINK1-AS表达≥2.15,独立保护因素为miR-134-5p表达≥0.64(P均<0.05)。结论胃癌组织中LncRNA PINK1-AS高表达、miR-134-5p低表达,二者表达与组织分化程度降低、TNM分期增加、有淋巴结转移和预后不良有关。

基于PINK1/Parkin通路探讨丹红注射液对冠心病大鼠心肌线粒体损伤的保护作用及机制

目的:探讨丹红注射液(DHI)对冠心病(CHD)大鼠心肌线粒体的保护作用,以及其对同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路的调控机制。方法:采用高脂饲料、自由饮水持续喂养大鼠8周构建大鼠CHD模型,以丹红注射液低(DHI-L)、丹红注射液高(DHI-H)剂量进行干预,以过表达PINK1的pcDNA3.1-PINK1(pc)进行功能挽救实验;电镜检测各组大鼠心肌组织中完整线粒体的比例;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记试剂盒(TUNEL)检测大鼠心肌组织的细胞凋亡;超氧化物阴离子二氢乙啶(DHE)检测大鼠心肌组织中活性氧(ROS)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)仪检测各组大鼠心肌组织中PINK1、Parkin、线粒体融合蛋白2(MNF2)、线粒体分裂基因动态相关蛋白1(DRP1)、B细胞淋巴瘤-2相互作用蛋白1(Beclin1)、自噬相关基因5(ATG5),微管相关蛋白1轻链3(LC-3)的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western Blot)实验检测大鼠心肌组织中PINK1、Parkin、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。结果:与CHD模型大鼠比较,DHI-L、DHI-H能明显升高CHD大鼠心肌组织中完整线粒体的比例,抑制心肌细胞凋亡,下调心肌组织ROS含量,降低心肌组织PINK1、Parkin、DRP1、Beclin1、ATG5和LC-3的mRNA表达,升高心肌组织中MNF2的mRNA表达;下调PINK1、Parkin和Bax表达,上调心肌组织中Bcl-2表达;pcDNA3.1-PINK1可部分逆转DHI对心肌线粒体的保护作用,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:丹红注射液能明显抑制CHD大鼠心肌组织的氧化应激,降低心肌线粒体的自噬水平,下调心肌组织中的细胞的凋亡率,改善实验动物的心功能,这可能与抑制PINK1/Parkin信号的传导有关。

PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在异烟肼诱导的肝细胞损伤中的作用

目的:结核病患者长期大剂量联合使用抗结核药物会引起肝损伤等不良反应,但引起损伤的机制尚不明确。尽管同源性磷酸酶及张力蛋白诱导激酶1(phosphatase and tensin homolog induced kinase 1,PINK1)/Parkin信号轴可能通过调控线粒体自噬和肝细胞内氧化应激水平而参与肝损伤过程,但目前尚不清楚药物致肝损伤与该信号轴调控的线粒体自噬机制间的相关性。本研究旨在探究PINK1/Parkin信号轴是否可通过调控线粒体自噬改善抗结核药物用药过程中出现的肝细胞损伤,从而为临床结核病患者使用抗结核药物治疗过程导致的肝损伤提供潜在的药物治疗靶点。方法:使用异烟肼(isoniazide,INH)处理小鼠肝实质细胞AML-12以模拟肝损伤状态,分别采用real-time PCR和蛋白质印迹法检测正常AML-12细胞(对照组)、INH刺激的肝损伤模型(模型组)及INH和PINK1激动剂红景天甙共同刺激下的AML-12细胞(干预组)中PINK1、Parkin以及自噬相关分子的表达水平。利用ELISA试剂盒检测肝细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,采用HE染色及透射电镜技术观察细胞的肝细胞形态结构。结果:与对照组比较,模型组中PINK1、Parkin和微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)的mRNA表达水平(P<0.01)以及蛋白质水平(P<0.05)均显著下降,同时泛素化蛋白水平显著下调(P<0.05),ROS水平升高(P<0.05),细胞损伤明显。与模型组相比,干预组中使用红景天甙后PINK1、Parkin和自噬相关分子LC3的mRNA及蛋白质水平均显著升高(均P<0.05),泛素化蛋白水平亦显著升高(P<0.05),同时线粒体介导的ROS水平下降(P<0.05),肝细胞损伤状态明显减轻。结论:本研究利用体外细胞实验证明了PINK1/Parkin信号轴介导的线粒体自噬机制可能与异烟肼所致肝细胞的损伤相关,并能调控损伤状态,提示Parkin是一个潜在的药物致肝损伤预测及诊疗的分子靶点。

PINK1特性及其作用的研究进展

同源性磷酸酶-张力蛋白诱导的激酶1(phosphatase and tensin homologue-induced putative kinase 1,PINK1)是倍受生物学及医学界关注的一种蛋白因子。PINK1是一种线粒体监视器,其表达具有广泛性。PINK1主要位于线粒体外膜,其激酶结构域暴露于细胞质中。最初的研究显示PINK1与家族性帕金森病相关,而新近研究表明,PINK1具有除神经保护作用外的诸多功能。PINK1在许多疾病发生中具有始动作用,与疾病相关的突变分布于整个PINK1蛋白,大多数的突变发生在丝氨酸/苏氨酸激酶结构域中。PINK1的表达可以保护细胞对抗外源性氧化胁迫。PINK1可以调控线粒体自噬,也可以通过磷酸化下游的一些因子减轻凋亡性细胞死亡。PINK1可能与越来越多的人类疾病密切相关。PINK1有可能作为新的靶点,在线粒体受损导致的疾病治疗中具有极为重要的价值。

匙羹藤对胰岛素抵抗小鼠脂肪组织蛋白激酶B的影响

目的:观察匙羹藤对胰岛素抵抗(IR)KKAy小鼠脂肪组织中蛋白激酶B表达及磷酸化的影响以及调节机制。方法:将18只胰岛素抵抗KKAy小鼠按体质量随机分为模型组(DM)和匙羹藤水提物组(GS),并选取9只C57BL/6J小鼠为正常对照组(NC),连续灌胃给药8周。实验结束后取血测定空腹血糖(FPG),空腹血清胰岛素(Fins),并计算胰岛素敏感指数(ISI),测定附睾脂肪组织中磷酸激酶依赖的激酶1(PDK1)、蛋白激酶B(PKB)、P-PKB(Ser473),P-PKB(Thr308)蛋白相对含量,及磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)mRNA相对含量。结果:与DM组相比,GS组小鼠FPG、Fins降低,ISI升高,P-PKB(Ser473)蛋白相对含量及其磷酸化水平升高,P-PKB(Thr308)蛋白相对含量升高,PDK1蛋白相对含量降低,PTEN mRNA表达量降低。结论:匙羹藤可通过增加脂肪组织中P-PKB(Ser473)蛋白相对含量,增强Ser473位点磷酸化水平,以及增加P-PKB(Thr308)蛋白相对含量激活PKB,进而改善IR。

PINK1介导的线粒体自噬对大鼠骨髓内皮祖细胞衰老及其功能的影响

目的采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术敲减大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)中磷酸酶和张力蛋白同源物诱导激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1),探讨PINK1介导的线粒体自噬对EPCs衰老及其功能的影响。方法分离培养大鼠骨髓EPCs并鉴定,EPCs计数后随机分为空白组、阴性对照组(NC siRNA)和PINK1转染组(PINK1 siRNA)。qRT-PCR与Western blot检测各组PINK1 mRNA与蛋白的表达情况;以最佳敲减时间为据点选择不同时间点模拟衰老进程,SA-β-半乳糖苷酶染色法及p16蛋白表达评估细胞衰老情况;CCK-8、Transwell小室、体外血管生成试剂盒检测细胞增殖、迁移、成血管功能;流式细胞术检测细胞ROS水平,Western blot检测PINK1、Parkin、LC3、p62的表达,透射电镜观察线粒体及自噬小体情况。结果转染PINK1 siRNA 48 h后,PINK1被有效敲减。转染48 h和96 h后,与空白组相比,PINK1 siRNA组衰老细胞蓝染阳性率和p16蛋白表达水平均明显上升;细胞增殖、迁移和成血管功能明显降低,ROS水平明显升高;PINK1、Parkin、LC3蛋白表达明显下调,而p62蛋白明显上调;透射电镜下PINK1 siRNA组线粒体肿胀变形,自噬小体减少。结论PINK1基因的下调会加剧EPCs的衰老,PINK1介导的线粒体自噬可能参与并调节了EPCs的衰老和功能。

Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在心肌缺血再灌注损伤中的作用研究进展

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)显著降低了缺血心肌再灌注的效益,是目前缺血心肌治疗过程中亟待解决的关键问题。线粒体自噬参与了MIRI的发病机制,由第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因诱导激酶1(Pink1)/Parkin介导的线粒体自噬是最常见的线粒体自噬途径。由于激活程度不同,Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在MIRI中具有双重作用。Pink1/Parkin介导的线粒体自噬存在于心肌细胞、血小板和微血管内皮细胞中。因此,了解Pink1/Parkin介导线粒体自噬的调控机制,探索心肌细胞、血小板和微血管内皮细胞中的Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在MIRI中的作用,有助于指导未来MIRI的治疗。

PTEN与PTENP1在恶性肿瘤组织中表达及其相互作用的研究进展

人类第十号染色体缺失与磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)作为抑癌基因在多种肿瘤中的作用已被证实。PTEN同源物假基因1(PTENP1)在不同肿瘤中也存在表达差异,PTENP1通过竞争性结合miRNA以促进PTEN的表达,从而抑制肿瘤的生成与转移。PTENP1作为经典抑癌基因PTEN的假基因,对肿瘤的靶向治疗将产生巨大的推动作用。

PINK1介导的线粒体自噬在小鼠皮层神经元氧糖剥夺后表达和意义

目的探究不同时长氧糖剥夺(OGD)后小鼠皮层神经元中线粒体自噬相关蛋白PTEN诱导的假定激酶1(PINK1)表达的时空动态改变。方法 C57BL/6J小鼠皮层神经元原代培养7 d,以OGD不同时长(0 h、2 h、4 h、6 h、8 h)作为观察时间点。倒置显微镜下观察神经元形态变化;MTT比色法检测神经元存活率;蛋白印迹法(Western blot,WB)观察LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin表达的时间变化;免疫荧光观察PINK1OGD后表达的空间改变。结果 OGD严重损伤神经元活性,且随着时间延长细胞活性呈进展性下降趋势;OGD后自噬标志性分子LC3-Ⅱ和PINK1开始升高(4 h达到峰值)(P<0.05),后进行性下降,而Parkin表达逐渐下降(P<0.05);PINK1在胞浆可见均匀表达,在OGD后荧光强度短暂增高,并随OGD时间逐渐减弱。结论不同时长OGD可造成不同程度神经元损伤,并激活PINK1介导的线粒体自噬,PINK1可能通过影响线粒体在脑缺血损伤的病理生理过程中发挥作用。

艾帕素13(apelin-13)通过阻断PINK1/parkin信号通路促进线粒体自噬改善大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的研究脂肪细胞因子艾帕素13(AP13)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中线粒体自噬水平的影响及机制。方法通过结扎大鼠冠状动脉分支建立MIRI模型,大鼠分为假手术组、AP13处理的假手术组、MIRI组、AP13处理的MIRI组。MIRI模型建立24 h后,采用ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平,2,3,4-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测大鼠心肌梗死面积,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测MIRI心肌区的心肌细胞凋亡水平,透射电镜观察受损心肌区心肌细胞线粒体损伤情况及自噬体的形成。取各组大鼠心肌梗死区组织,Western blot法检测细胞中微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)/LC3Ⅰ比值,泛素结合蛋白P62蛋白及线粒体自噬通路中磷酸酶与张力蛋白同源物诱导激酶1(PINK1)、泛素连接酶parkin和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白表达。采用携带GFP-LC3的腺病毒感染分离的各组大鼠心梗区心肌细胞,并采用免疫荧光细胞化学染色观察线粒体外膜转位酶20(TOM20)和LC3的共定位。结果与假手术组或AP13处理的假手术组相比,MIRI组或AP13处理的MIRI组大鼠血清CK、LDH、cTnI和心肌梗死面积和细胞凋亡率均显著增加,前两组无明显差异。而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI大鼠的上述变化均明显降低。与假手术组或AP13处理的假手术组相比,MIRI组或AP13处理的MIRI组大鼠心肌细胞中线粒体结构的完整性明显破坏,且包裹线粒体的自噬体大量出现,而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI组大鼠的心肌细胞线粒体损伤明显减轻,自噬体的数量显著增加。MIRI组或AP13处理的MIRI组梗死心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、PINK1、parkin及c-caspase-3蛋白表达均显著增加,P62表达水平明显降低,而与MIRI组相比,AP13处理的MIRI组中上述蛋白水平的变化趋势明显降低;MIRI造模后LC3与TOM20共定位于心肌细胞线粒体中,且在AP13处理的MIRI组中LC3的表达强度较MIRI组显著增加。结论AP13可能通过阻断PINK1/parkin信号通路,促进线粒体自噬水平减少MIRI造成的心肌梗死面积,降低细胞凋亡率。

假基因PTENP1在前列腺癌中的表达及与PSA水平的关系

目的探讨10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失性基因假基因1(PTENP1)在前列腺癌中的表达及与前列腺特异性抗原(PSA)的关系。方法收集2015年3月至2018年3月泌尿外科行手术切除的前列腺癌根治术或穿刺新鲜的前列腺癌患者64例为病例组,同时选择20例经组织病理学明确诊断为良性前列腺增生患者为对照组,再将64例前列腺癌患者按Gleason评分标准分成高、中、低分化组,检测前列腺癌组织中PTENP1、10号染色体上磷酸酶与张力蛋白同源缺失性基因(PTEN)mRNA的表达和血清中PSA的水平,并进行相关分析。结果与对照组相比,病例组PTENP1和PTEN mRNA的相对表达量降低,f/tPSA比值也降低,差异有统计学意义(P<0.05);血清t-PSA和f-PSA水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。PTENP1和PTEN mRNA的相对表达量随着Gleason评分的增加而降低,f/tPSA比值也随着Gleason评分的增加而降低,差异有统计学意义(P<0.05);血清t-PSA和f-PSA水平随着Gleason评分的增加而增高,差异有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌患者PTENP1mRNA的相对表达量与PTENmRNA的相对表达量、f/tPSA比值呈正相关(R=0.594、0.488,P<0.05);与Gleason评分、t-PSA和f-PSA呈负相关(R=-0.427、-0.720、-0.382,P<0.05)。结论PTENP1在前列腺癌组织中表达显著下调,与Gleason评分和PSA呈负相关,因PTENP1不表达蛋白,提示其在mRNA水平对PTEN的表达具有调控作用。

麦冬皂苷D调控磷酸酶及张力蛋白同源物诱导激酶1/帕金蛋白通路对脓毒症心肌损伤的保护作用

目的 探讨麦冬皂苷D(OPD)对脓毒症大鼠心肌损伤及磷酸酶及张力蛋白同源物诱导激酶1/帕金蛋白(PINK1/parkin)通路的影响。方法 用盲肠结扎穿孔法构建脓毒症大鼠模型,并将造模成功的大鼠随机分为模型组、实验组、对照组和联合组,每组8只。在模型制备成功后12 h,实验组给予腹腔注射40 mg·kg^(-1)OPD,对照组给予腹腔注射20 mg·kg^(-1)3-MA,联合组给予腹腔注射40 mg·kg^(-1)OPD和20 mg·kg^(-1)3-MA;假手术组和模型组均给予腹腔注射等量0.9%NaCl。5组大鼠每12 h重复给药1次,连续给药6 d。用酶联免疫吸附试验法检测血清肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平,用蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织中PINK1和parkin蛋白的表达水平。结果 实验组、对照组、联合组、模型组和假手术组的血清cTnⅠ水平分别为(0.98±0.20)、(3.44±0.69)、(1.64±0.38)、(2.39±0.45)和(0.37±0.07)mg·L^(-1),PINK1蛋白相对表达水平分别为1.73±0.35、0.55±0.11、0.91±0.20、0.83±0.15和0.28±0.05,parkin1蛋白相对表达水平分别为1.78±0.36、0.63±0.12、0.96±0.22、0.94±0.17和0.30±0.06。实验组、对照组和假手术组的上述指标与模型组相比,实验组和对照组的上述指标与联合组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 OPD缓解脓毒症引起的大鼠心肌损伤可能是通过激活PINK1/parkin通路促进线粒体自噬实现的。

miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠疼痛缓解的机制

目的探究miR-339-5p过表达对带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛缓解机制。方法选取48只健康SPF级SD大鼠,分别将48只大鼠分为空白组、模型组、过表达组、沉默组各12只,模型组、过表达组、沉默组构建带状疱疹后遗神经痛模型,做miR-339-5p慢病毒滴定,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-339-5p基因表达量,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠5-羟色胺(HT)、神经生长因子(NGF)、白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α,采用电子测痛仪进行测定机械痛阈,采用Western印迹检测大鼠同源性磷酸张力蛋白诱导激酶1/帕金森蛋白(PINK1/Parkin)信号通路基因表达量。结果与模型组相比,过表达组miR-339-5p基因表达量、不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF、PINK1/Parkin信号通路表达量明显升高(P<0.05)。与模型组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。与过表达组相比,沉默组miR-339-5p基因表达量、PINK1/Parkin信号通路表达量明显降低,不同时间点痛阈值、IL-2、TNF-α、5-HT、NGF明显升高(P<0.05)。结论miR-339-5p过表达基因通过作用于PINK1/Parkin信号通路,调控PINK1、Parkin表达量,显著减轻了带状疱疹后遗神经痛大鼠的疼痛程度。

PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬在重症肺炎中的作用研究

目的探究PINK1(同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1)/Parkin(帕金森蛋白)信号通路介导的线粒体自噬在大鼠重症肺炎中的作用。方法将20只大鼠随机分为对照组及模型组(重症肺炎模型),每组10只,以探讨重症肺炎对大鼠肺功能、病理的影响。之后再将30只大鼠随机分为对照组、模型组及mdivi-1(线粒体自噬抑制剂)组,每组10只,进一步探讨重症肺炎对大鼠线粒体自噬指标的影响。结果与对照组相比,模型组大鼠静息通气量[(3.44±0.22)vs.(1.58±0.18)mL/min]及气道阻力比值(77.48±3.84 vs.47.76±5.54)降低(P<0.05);模型组大鼠肺组织损伤,可见大量炎性细胞浸润;模型组大鼠肺组织中Parkin、PINK1及微管相关蛋白1轻链3Ⅱ的蛋白和mRNA表达水平增加(P<0.05)。与模型组相比,mdivi-1组大鼠静息通气量及气道阻力比值增加(P<0.05);mdivi-1组大鼠肺组织损伤及炎性浸润改善;mdivi-1组大鼠肺组织中Parkin、PINK1及微管相关蛋白1轻链3Ⅱ的蛋白和mRNA表达水平减少(P<0.05)。结论mdivi-1可改善重症肺炎大鼠肺功能结构的异常,其机制可能与PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬相关。