创伤弧菌ISCOM疫苗的免疫学效应研究

目的探讨创伤弧菌ISCOM疫苗的免疫学效应。方法制备创伤弧菌ISCOM疫苗,通过注射、浸泡与灌胃接种鳗鲡进行安检试验,显示创伤弧菌ISCOM疫苗安全、可靠;注射途径室内免疫欧洲鳗,通过菌体凝集方法和ELISA方法测定血清免疫应答规律,表明两者趋势基本一致,免疫组的血清抗体水平明显高于对照组;攻毒试验表明相对免疫保护率达100%;田间试验口服免疫日本鳗后的攻毒试验证明相对免疫保护率近80%。结果创伤弧菌ISCOM疫苗安全,且免疫鳗鲡能产生强大的免疫保护力。结论创伤弧菌ISCOM疫苗有效且实用。

抗副溶血弧菌IgY的制备及活性检测

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemololyticus,Vp)是我国微生物食源性疾病的主要病因,且是海水养殖业中的常见病原菌,造成巨大的经济损失。本研究制备副溶血弧菌免疫原,并以5×107、5×108CFU/ml两种剂量分别免疫母鸡,获得特异性的抗副溶血弧菌IgY;并建立ELISA方法检测免疫鸡蛋中的抗体效价,高剂量免疫组的抗体效价可达1:57600,低剂量免疫组的抗体效价达1:28800;低剂量组抗体效价可维持250d,高剂量组抗体效价可维持300d以上。

创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡细胞免疫的影响

应用创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡进行腹腔注射免疫,免疫后35 d进行攻毒试验,结果表明,经免疫的欧洲鳗鲡相对存活率达75%,证实创伤弧菌ISCOMs疫苗具有较好的免疫保护性。对创伤弧菌ISCOM疫苗免疫后的欧洲鳗鲡细胞免疫水平的淋巴细胞进行转化试验,检测结果分析表明,试验组与对照组的淋转指数差异不显著,推测该疫苗诱导的免疫保护方式可能与细胞免疫保护无密切相关性。

抗副溶血弧菌IgY的提纯及检测副溶血弧菌的间接ELISA的建立

分离纯化抗副溶血弧菌IgY,并建立一种快速检测副溶血弧菌的间接酶联免疫吸附法(indirect ELISA),分析了该方法的敏感性、特异性和重复性.将水稀释法、乙醇沉淀法和DEAE-Sepharose FF离子交换层析联用以分离纯化抗副溶血弧菌IgY,然后以纯化的IgY为一抗,辣根过氧化物酶标兔抗鸡IgY为二抗,建立检测副溶血弧菌的间接ELISA方法.结果表明:建立的间接ELISA方法,一抗的最佳工作质量浓度为15μg/mL,二抗的最佳稀释度为1∶10 000,副溶血弧菌培养液的检出限为1.0×105cfu/mL,该方法对测定的其他8种菌株没有交叉反应.建立的间接ELISA方法具有良好的灵敏度、特异性和稳定性,能够快速、准确地对副溶血弧菌进行检测.

2018—2019年辽宁省副溶血性弧菌临床和食品分离株分子流行病学分析

目的了解辽宁省副溶血性弧菌(Vibrio Parahaemolyticus,VP)的流行特征,为辽宁省食源性疾病的防控和应急事件的处置提供可靠的技术支持。方法对2018—2019年辽宁省301株临床和食品VP分离株进行血清学分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型、毒力基因(tlh、tdh、trh)鉴定及耐药试验。结果除了59株VP分离株不能进行血清学分型外,其他分离株共分为17个血清型,血清型以O3群、O1群和O2群为主。血清型O3与O1群分离株相似度高。PFGE主要分成11组优势带型,A-K组,其中A-G组为主要流行致病分子型。临床分离株毒力基因携带情况主要为tlh+、tdh+、trh-,食品分离株毒力基因携带情况主要为tlh+、tdh-、trh-。VP分离株主要对β-内酰胺类(CFZ和AMP)、大环内酯类抗菌药物(ERY)耐药。即食食品分离株耐药率远高于非即食食品分离株。结论由于即食食品的特殊性和来自于国外的特性,这些菌株具有引起食源性疾病暴发流行的高风险,应高度重视。部分食品分离株也具有引起食源性疾病的风险,应给予关注。相关部门除了应加强对国内海产品及其抗菌药物使用管控外,更应加强对进口海产品的监管。

创伤弧菌引起的坏死性筋膜炎和血流感染1例

创伤弧菌,属于弧菌属,是一种条件致病菌,主要分布于海洋、河流和湖泊中[1-2],可通过多种途径感染人类,主要有食用未煮熟的受污染海产品、被海产品扎伤或伤口暴露于海水等,可引起胃肠炎、创口感染和脓毒血症。本文报道第九〇九医院收治的1例创伤弧菌感染引起的坏死性筋膜炎和血流感染患者,旨在提高对创伤弧菌的认识和重视,降低患者的病死率。

7株水产品来源的霍乱弧菌的全基因组特征分析

目的了解7株水产品来源的霍乱弧菌污染情况、血清分型、毒力基因和全基因组的遗传特征。方法对2023年采集自辽宁省餐饮环节和流通环节的鱼类、腹足类、虾类和双壳类等共163份水产样品,进行霍乱弧菌的检测,对分离菌株进行血清分型、毒力基因检测和全基因组测序分析。结果163份样品中共检出7株霍乱弧菌,检出率为4.3%,其中6株菌为非O1/O139群,1株为O1群稻叶血清型,所有分离株均不携带ctxAB基因,7株菌的基因组序列长度为3853887~4164351 bp,GC含量为47.07%~47.76%,编码序列数量为3370~3732个,串联重复序列数量为55~73个,基因岛的数量为4~11个。7个分离株包含588~603个毒力相关基因,携带耐药基因的数量为263~286个。7株霍乱弧菌共有2863个共有的基因家族,O1群稻叶血清型菌株含有104个特有基因家族,同源单拷贝基因构建进化树共分为两个簇,其中第一簇中包含2个分离株,且高度同源,第二簇中包含其他5株菌株。结论7个霍乱分离株携带多种毒力相关基因和耐药基因,O1群稻叶血清型分离株各基因序列来源复杂,决定了其对环境的适应性。通过本研究了解霍乱弧菌的基因组特征,为食品安全风险评估、基因组组分和功能研究提供数据支持。

肝门部胆管癌术后非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染1例并文献复习

目的了解非O1/非O139群霍乱弧菌感染的流行病学特征、临床表现、诊断及治疗,以期提高对该病的认识。方法对1例非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染患者的临床表现、实验室检查、治疗及转归进行回顾性分析﹐并以“非O1/非O139群霍乱弧菌”和“血流感染”为主题词,检索万方、维普和中国知网数据库,以“non-O1/non-O139 Vibrio cholerae”和“bloodstream infection”为主题词检索PubMed数据库,获取国内外报道的病例,复习非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染的临床特征及诊疗方法。结果该例69岁男性患者肝门部胆管癌术后6个月,腹胀、发热、无腹泻,血培养检测出霍乱弧菌,经质谱、VITEK 2XL和16S rRNA基因鉴定均为霍乱弧菌,血清学确认为非O1/非O139群。使用哌拉西林抗感染治疗10 d后﹐患者康复出院。通过文献复习发现26例非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染患者大多数有慢性肝炎、肝硬化等消化道基础疾病﹐主要症状为急性腹泻、腹胀腹痛、发热、恶心、呕吐等。菌株对多种抗菌药物敏感,予抗感染及对症治疗后80.77%患者好转出院,15.38%死亡,主要因感染性休克引起的多器官衰竭而死亡。结论非O1/非O139群霍乱弧菌血流感染好发于免疫功能低下者,尤其是慢性肝炎、肝硬化、恶性肿瘤、糖尿病患者,及时血培养检查和准确鉴定对其诊断非常重要。早期应用敏感抗生素治疗预后相对较好。

济南市食品和腹泻病人来源副溶血性弧菌分子分型及毒力基因分析

目的:了解济南市动物性海产品、腹泻患者来源副溶血性弧菌的脉冲场凝胶电泳分子分型特征以及菌株携带毒力基因的情况。方法:按照《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》的方法采集动物性海产品150份,依据《山东省食源性疾病主动监测工作手册》采集腹泻病人样本771份,对上述两类样本进行副溶血性弧菌分离。用脉冲场凝胶电泳对129株副溶血性弧菌进行分子分型和聚类分析,利用多重荧光PCR检测菌株毒力基因的携带情况。结果:动物性海产品来源副溶血性弧菌的总检出率为41.3%,腹泻病人副溶血性弧菌的检出率为6.1%~14.2%。动物性海产品和腹泻患者来源的129株副溶血弧菌可分为93个脉冲场凝胶电泳型别,相似性系数为35.1%~100.0%。患者来源的菌株带型相似系数高于85.0%的占比为90.4%,89.3%动物性海水产品来源的菌株带型相似系数低于85.0%。73株患者来源的菌株携带tdh基因的菌株占比为95.9%,携带trh基因的菌株占比为6.8%,4.1%的菌株同时携带两个毒力基因。动物性海产品来源的56株菌均不携带毒力基因tdh,携带耐热相关溶血素的菌株占比为3.6%。结论:两种来源的菌株在分子分型和毒力基因携带方面存在差异,动物性海产品携带副溶血性弧菌的比例较高,有必要进一步加强对动物性海产品副溶血性弧菌的监测,扩大采样量并增加菌落挑取数量以进一步明确该菌株的传播、流行特征,为制定防控策略提供科学依据。

一起副溶血性弧菌食源性疾病暴发事件的调查分析

目的调查分析一起副溶血性弧菌食源性疾病暴发事件的流行病学特征,为预防类似事件发生提供参考。方法通过流行病学调查和分析确定事件性质和可疑餐次,通过病例对照研究确定可疑食物,通过卫生学调查了解可能的污染环节,通过实验室检测病例标本判定可能致病因素。结果该起事件共发病27例(9.00%,27/300),临床表现以腹泻(100%)和腹痛(88.89%)为主;可疑餐次为2021年7月21日夜宵,可疑食物为凉拌菜(麻辣拌);19份病例粪便样品中均检出血清型为O10∶K4的副溶血性弧菌,经脉冲场凝胶电泳分析,19株菌株的同源性为100%。结论该起事件是一起副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发事件,建议对企业食堂加强监管,加强事件概率调查处置过程中不同部门的沟通。

2012—2023年梧州市水产品和水体中O1/O139群霍乱弧菌监测结果分析

目的了解O1/O139群霍乱弧菌在梧州市水产品和水体中的污染状况,为防控工作提供科学依据。方法2012—2023年每年5—10月,对梧州市各农贸市场和超市的水产品和养殖池水随机采样,并定点采集易受污染的池塘水、江河水。对采集的样本进行霍乱弧菌分离培养、生化鉴定、血清学分型和毒力基因检测。结果2012—2023年梧州市共监测水产品和水体4844份,共检出O1/O139群霍乱弧菌53份,总检出率为1.09%。其中水产品监测3020份,检出率为1.42%(43/3020),水体监测1824份,检出率为0.55%(10/1824),水产品和水体检出率差异有统计学意义(χ^(2)=8.056,P<0.05)。不同月份的水产品霍乱弧菌检出率差异有统计学意义(χ^(2)=16.053,P<0.05),其中9月的检出率较高(3.54%,12/339),7月的检出率较低(0.68%,4/588)。不同类型水产品和水体的霍乱弧菌检出率差异均有统计学意义(χ^(2)=82.308、15.752,P均<0.05);水产品中蛙类检出率较高(10.27%,23/224),水体中养殖池水检出率较高(2.43%,7/288)。检出的53株菌株中,O1群小川型22株,O1群稻叶型24株,O139群7株;霍乱毒素(cholera toxin,CT)毒力基因均为阴性。结论梧州市水产品和水体均存在霍乱弧菌污染,应进一步加强监测工作力度,及时掌握霍乱弧菌的污染状况,严防霍乱疫情发生。

副溶血弧菌VP-5的分离鉴定及其与鲈鱼免疫信号通路相互关系研究

本文以染病鲈鱼为试验材料,对其肝脏的致病菌进行分离、纯化、鉴定,并分析了致病菌与鲈鱼免疫信号通路的相互关系。结果表明,经分离、纯化,从染病鲈鱼肝脏中得到一株菌株VP-5。VP-5呈球杆状、弧形,有单鞭毛,运动活跃,为革兰氏阴性菌,对酪氨酸、葡萄糖、甘露醇等反应阳性,对蔗糖、阿拉伯糖和棉子糖等反应阴性,其16S rRNA和TDH1基因序列与副溶血弧菌的亲缘关系非常接近。经综合鉴定,致病菌VP-5为副溶血弧菌。鲈鱼受到副溶血弧菌VP-5感染后,免疫信号通路基因CD63、CXCR4、IL-8在鲈鱼肝脏组织中12 h和24 h时的相对表达量与无菌生理盐水对照组(CK)相比差异显著(P<0.05);在表皮组织中24 h和36 h时的相对表达量与无菌生理盐水对照组(CK)相比差异显著(P<0.05)。证实鲈鱼肝脏组织免疫信号通路基因的表达与副溶血弧菌VP-5的感染正相关,相对于表皮组织反应更快。鲈鱼的免疫信号通路基因CD63、CXCR4、IL-8积极反应于致病菌,这些基因的快速表达会引发鲈鱼自身免疫应答,增强鲈鱼抵抗致病菌的能力。

嗜酸乳杆菌对3种弧菌的拮抗效果及对凡纳滨对虾肠道菌群结构的影响

使用益生菌是预防和控制水产养殖细菌感染的非抗生素方法之一。嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)可在机体内分泌抗菌物质,具有抑制有害菌生长、调节肠道微生态平衡和增强抗毒抗病能力等功能。研究了不同氧环境和不同培养基条件下嗜酸乳杆菌、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、溶珊瑚弧菌(V.coral-liilyticus)的生长情况,并通过牛津杯法和液体培养法结合PCR荧光定量技术、高通量测序技术,系统评价了嗜酸乳杆菌对上述弧菌的拮抗效果及对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肠道菌群的组成和变化的影响。结果显示,在厌氧条件下,哈维氏弧菌的菌量显著高于在好氧环境培养后的菌量(P<0.05)。不同培养基配比对4种细菌的生长均具有显著性影响(P<0.05)。嗜酸乳杆菌对3种弧菌的生长均有良好的抑制效果。在对虾肠道菌群背景下,嗜酸乳杆菌对副溶血弧菌的生长有显著抑制作用(P<0.05)。处理组的弧菌属比例较对照组显著减少,高菌量组的有益菌属均显著增加。研究表明,嗜酸乳杆菌对上述3种弧菌的生长有良好的抑制效果,在对虾肠道菌群背景下对副溶血弧菌的生长也有良好的抑制效果,且能够优化菌群结构。

养殖环境及贝源溶藻弧菌MLST分型及其毒力基因、耐药性分析

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是近年来贝类病害中最常见的细菌性病原之一,对贝类养殖产业的健康发展构成严重威胁。本研究旨在分析不同养殖环境水体和贝类组织中,溶藻弧菌的基因变异、毒力基因、耐药性及其分布规律。对12株溶藻弧菌分离株开展多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、毒力因子以及菌株耐药性分析,结果显示,12株溶藻弧菌的序列型(sequence typing,ST)分型互不相同,7株为Pub MLST数据库已经收录的ST型,5株因管家基因的等位基因位点变化而形成新的ST型,贝类养殖环境中的溶藻弧菌具有较高的遗传多样性。12株溶藻弧菌都携带tlh、fur和collagenase三种毒力基因,但均未检测到tdh、trh、toxR和tcpA毒力基因。溶藻弧菌携带毒力因子的种类和数量受地区分布等因素的影响。不同来源的溶藻弧菌均具有多重耐药特征,对青霉素和氨苄西林产生抗性。本研究表明,贝类养殖环境中的溶藻弧菌具有种群复杂、遗传多样性高的特点;不同来源菌株在毒力基因携带和耐药性方面存在较大差异。本研究通过探究不同区域内不同来源的溶藻弧菌遗传变异及耐药性差异,对贝源溶藻弧菌的有效防控提供一定理论参考。

噬菌弧菌,一类被严重低估的噬菌益生菌

噬菌弧菌(Bacteriovorax),又称嗜盐噬菌弧菌,隶属于噬菌弧菌科(Bacteriovoracaceae)。虽然噬菌弧菌在分类地位上与隶属于蛭弧菌科(Bdellovibrionaceae)、蛭弧菌属(Bdellovibrio)的噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)明显不同,但却与噬菌蛭弧菌具有相同的噬菌天性。因此,噬菌弧菌作为一类体积小、运动能力强、能有效裂解革兰氏阴性菌的噬菌益生菌(Ottaviani等,2018),具有噬菌谱广、噬菌活性高、环境适应性强、无毒无害、多重功效等独特优势,是一种具有广阔发展前景的抗生素和化学消毒剂的替代品。本文从噬菌弧菌的噬菌原理入手,概述了噬菌弧菌在水产养殖中应用的独特优势,以期加深水产从业者对噬菌弧菌的认识,促进噬菌弧菌助力水产养殖绿色低碳高质量发展。

蛭弧菌对河蟹的安全性

蛭弧菌是一类具有先天噬菌特性的水质改良益生菌,能够减少养殖水体中致病菌污染(汪红等,2014),快速降解养殖水体中的NH_(3)-N、N_(2)-N含量(李怡等,2008;熊英等,2012张学师等,2019),从而提高九孔鲍、石斑鱼等养殖动物的成活率(林阿乞等,2011;林阿乞等,2013)。因此,蛭弧菌制剂是助力水产养殖减抗增效的优良绿色调水用品。需要指出的是,蛭弧菌的一个代表种——噬菌蛭弧菌曾被注册为兽药,用于鸡、鸭、鹅、猪等畜禽肠道细菌病的预防、治疗及促生长,但由于其生产企业于2003年被注销.

副溶血性弧菌引发食源性疾病的病原学检测及同源性研究

目的:深入研究副溶血性弧菌引发食源性疾病的病原学特征,通过全面而系统的病原学检测方法,旨在全面了解该致病菌在食品中的存在情况及潜在风险。方法:采集包括厨工肛拭样、患者样本等在内的多个样本,使用了实时荧光PCR检测试剂盒、3.0%NaCl碱性蛋白胨水、TCBS平板、副溶显色平板等一系列试剂进行病原学检测。其中,神奈川试验和PFGE同源性分析是研究的重点。结果:研究结果表明,在神奈川试验中,经过20h培养的菌落在我妻氏血平板上呈现半透明环的β溶血环,被判定为阳性。

副溶血性弧菌引起食源性疾病暴发事件调查与病原特征分析

目的调查和分析山西省阳泉市一起食源性疾病暴发事件中副溶血性弧菌的病原特征,提高对食物中毒应急事件的处理能力。方法使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、血清学分型、毒力基因检测、药物敏感实验和全基因组测序的方法分析25例有腹泻、腹痛、恶心、呕吐等消化道症状的患者分离出的11株分离菌株。结果11株分离菌株均为副溶血性弧菌,其中8株副溶血性弧菌分离株携带毒力基因tdh,1株同时携带毒力基因trh和tdh,1株只携带毒力基因trh,1株只有毒力基因tlh。血清型分为3种型别,分别是O10:K4、O4:K63以及O5:unknown。根据11株副溶血性弧菌的PFGE图谱将菌株分为5种不同的群,基于全基因组序列的分析显示8株来自患者的副溶血性弧菌具有相同的ST型,属于同一克隆群。副溶血性弧菌病原体毒力、耐药基因和药敏表型相同,符合暴发流行病学特征,判断其为该起食物中毒事件的病原体。11株菌均只含有blaCARB耐药基因,且未检测到耐药质粒,对氯霉素、萘啶酸、四环素、美罗培南、阿米卡星、氨苄西林、厄他培南、替加环素、头孢噻肟、头孢他啶和环丙沙星均敏感,对多黏菌素E中度敏感,均无耐药表型。结论这是一起由多种血清型副溶血性弧菌污染了食品而导致的食源性疾病暴发事件。该食堂储存食物时生熟不分,副溶血性弧菌机会性繁殖在合适的含盐食物中也可以增殖,进而引起该起事件发生。

低浓度微酸性电解水对纯培养及海虾中副溶血性弧菌与腐败希瓦氏菌的杀灭作用

为探究低浓度微酸性电解水(low concentration slightly acidic electrolyzed water,LcSAEW)对纯培养及海虾中的副溶血性弧菌与腐败希瓦氏菌的杀灭作用,该研究通过平板计数、生长曲线、电导率、膜电位、胞内物质渗漏量、活性氧和显微镜观察分析了LcSAEW对两种细菌的抑菌效果、细胞膜完整性以及细胞形态的影响。结果表明,有效氯浓度为4、8 mg/L的LcSAEW处理纯培养副溶血性弧菌与腐败希瓦氏菌30 s时,菌落数均降低8 lg CFU/mL以上。用10 mg/L的LcSAEW处理接种两种目标菌的海虾10 min后,菌落数分别降低1.6、1.25 lg CFU/mL。LcSAEW处理后,2种细菌的代谢活性和胞内ATP浓度均降低,而电导率、胞外DNA、蛋白质和K^(+)含量均上升。此外,膜电位呈现超极化,胞内活性氧累积,细胞形态出现凹陷、皱缩现象。综上所述,LcSAEW可以破坏细胞结构、细胞膜通透性,导致细菌活性紊乱甚至凋亡。该研究可为LcSAEW在水产品中的应用提供理论依据。

实时荧光定量聚合酶链式反应快速检测4种食源性致病弧菌

目的建立和优化4种食源性致病弧菌的实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)快速检测方法。方法基于副溶血性弧菌的toxR基因(GenBank ID:MH047287.1)、霍乱弧菌的ompW基因(GenBank ID:MF100046.1)、拟态弧菌的toxR基因(GenBank ID:EF693743)和创伤弧菌的vvhA基因(GenBank ID:KC821520.1)设计常规PCR引物和qPCR特异性引物和探针。分别建立副溶血性弧菌、霍乱弧菌、拟态弧菌和创伤弧菌4种食源性致病弧菌的单重qPCR检测体系,根据扩增曲线和Ct值对探针浓度进行优化,设置探针浓度梯度。结果4种弧菌的探针最适浓度均为0.1µmol/L。对设计的4种弧菌的引物分别进行常规PCR的扩增,其最低检出限均为1×10^(5) copies/µL,4种弧菌分别进行单重qPCR的最低检出限均为1×10^(1) copies/µL,扩增效率均接近100%。qPCR的灵敏度均高于常规PCR。特异性实验结果表明,4种目的弧菌DNA扩增出特异性曲线,其他的非目的基因未被扩增出扩增曲线。结论该方法准确度和灵敏度高,前处理简单快速,适用于4种食源性致病弧菌的荧光定量PCR快速检测。