中国弯颈霉多糖抗氧化和抑制氧化应激活性研究

目的:探究中国弯颈霉菌丝体多糖(Tolypocladium sinense polysaccharide,TSP)的体外抗氧化活性和抑制过氧化氢诱导小鼠胰岛MIN6细胞氧化应激导致的细胞凋亡。方法:采用热水浸提法提取中国弯颈霉菌丝体多糖,随后测定其超氧阴离子自由基(superoxide anion,O^(-)_(2)·)、羟自由基(hydroxy radical,·OH)、对1,1-二苯基苦基苯肼自由基(P-1,1-diphenylpicryl phenylhydrazine radical,DPPH·)清除能力;采用200μmol/L过氧化氢(hydrogenperoxide,H_(2)O_(2))诱导小鼠胰岛MIN6细胞氧化应激,给予高剂量和低剂量TSP(0.625、0.156 mg/mL)进行保护,MTT法测定MIN6细胞生存率;倒置显微镜观察细胞形态;采用试剂盒测定培养基中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平,细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor2,Nrf-2)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,pJNK)相对表达量。结果:TSP对于三种自由基具有显著的清除效果;细胞实验结果显示,与过氧化氢模型组相比TSP高低剂量给药组细胞生存率显著上升(P<0.01,P<0.05);悬浮细胞数量极显著下降(P<0.01);培养基中LDH极显著含量下降(P<0.01);细胞凋亡率显著降低(P<0.01,P<0.05);细胞内SOD水平显著增高(P<0.01,P<0.05),丙二醛含量极显著下降(P<0.01);Western Blot结果显示相较于模型组,高剂量给药组Nrf-2表达量显著增高(P<0.05),高剂量和低剂量给药组pJNK表达量显著下降(P<0.01,P<0.05)。结论:TSP具有显著的抗氧化活性,能够通过调节Nrf-2和pJNK的表达来减少氧化应激导致的细胞凋亡。

地生弯颈霉C41-3产低温脂肪酶发酵条件优化

[目的]优化地生弯颈霉C41-3产低温脂肪酶发酵条件,为扩大低温脂肪酶的应用提供理论依据。[方法]使用棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)比色法测定脂肪酶的活性。[结果]最佳发酵培养基为胰蛋白胨40 g/L、α-乳糖20 g/L、MnSO_(4)·H_(2)O 1 g/L、NH_(4)NO_(3)1 g/L、乳化芥花油20 mL;最佳发酵条件为pH 5、发酵温度15℃、培养时间4 d。优化后,地生弯颈霉C41-3的脂肪酶活性从199.40 U/mL增加至5700.72 U/mL,脂肪酶活性增加了约27.6倍。[结论]该新型脂肪酶具有潜在的工业应用价值。

高山弯颈霉(Tolypocla dium nubicola),中国弯颈霉属一新记录种

报道了分离自土壤的一个弯颈霉属新记录种 ,即高山弯颈霉 (TolypocladiumnubicolaBissett)。其主要鉴别特征是 :①在查氏培养基上 ,2 5℃ ,14d ,直径达 30～ 35mm ,平展 ;②瓶梗直接着生于菌丝或简单的分生孢子梗上 ,有再育现象 ,基部拟椭圆形膨大或球形膨大 ,(2 .6～ 7.2 ) μm× (1.3～ 3.2 ) μm ,颈部细长 ,常弯曲 ,(3.0～6 .3) μm×0 .3μm ;③分生孢子单生 ,柱状至椭圆形 ,(1.6～ 3.8) μm× (0 .8～ 1.2 ) μm ,外无黏液层。

非洲菊鲜切花弯颈部位及有关原因

研究了非洲菊鲜切花瓶插过程中弯颈易发部位 (中部茎段 )及其上部、下部茎段水分平衡动态和某些生理指标的变化。结果表明 ,非洲菊鲜切花瓶插过程中 :①鲜样质量和含水量先增后减 ,吸水逐渐减少 ,蒸腾失水相对稳定 ,水分饱和亏缺增大 ;②可溶性蛋白质含量呈下降趋势 ,但上部茎段一直高于中部和下部茎段 ;③MDA的含量呈上升趋势 ,上部茎段低于中部和下部茎段 ;④中部茎段的粗纤维含量与上部茎段无显著差异 ,但大大低于下部茎段 ;⑤瓶插初期POD活性略有下降 ,后期迅速上升 ,上部茎段POD活性一直高于中部茎段和下部茎段。

中国弯颈霉培养物的化学成份分析

中国颈霉T.sinense是与冬虫夏草无性型密切相关的真菌。对中国弯颈霉ZN923菌株培养物进行测试，证明其所含化学成分如甘露醇、氨基酸、生物碱、有机酸及甾醇类等与天然冬虫夏草基本相同。红外、紫外吸收图谱也表明两者所含的各类化学成份极为相似。

中国弯颈霉提取物抗氧化和抗肿瘤体外活性研究

中国弯颈霉(Tolypocladium sinense)分离自冬虫夏草,其生长最适温度25～28℃,最适pH6～7。在液体培养基(葡萄糖4%、蛋白胨0.5%、酵母膏1%、KH2PO40.1%、MgSO40.05%)中,经过28℃下摇床(150r/min)培养4～10d后,菌丝体生物量达8.49～9.73g/L。其菌丝体石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇和蒸馏水提取率分别为3.51%、1.62%、4.84%、23.33%,菌丝体多糖提取率为5.31%。各提取物对DPPH自由基均具有清除作用,2mg/ml多糖具有较强的清除作用,清除率为49.13%;菌丝体多糖(0.08mg/ml)能显著地清除羟自由基,清除率为82.5%。MTT法检测发现乙酸乙酯提取物具有较强的抑制白血病细胞增殖作用;作用于K562和SHI-1细胞2d后,乙酸乙酯提取物IC50分别为26.55、17.75μg/ml;该提取物对正常细胞(人PBMC和小鼠骨髓细胞)的抑制作用较弱;AO/EB双染和TUNEL法检测提示菌丝体的乙酸乙酯提取物可以诱导K562细胞凋亡。上述实验结果表明,中国弯颈霉具有抗氧化和抗肿瘤方面的应用开发前景。

不同品种非洲菊的生物解剖学特征与弯颈关系的研究

以切花非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)不易弯颈品种Fiona和易弯颈品种Sondance为试材,通过石蜡切片光学显微镜和扫描电镜观察,分析了这2个品种间的生物学结构的数量差异。结果显示:这2个品种间所含的超微结构的类型大致是相同的,不易弯颈品种比易弯颈品种具有较多的穿孔,且不易弯颈非洲菊品种的导管直径、薄壁细胞面积较大,易弯颈品种导管则多含有侵填物,导致了这2个品种采后贮藏保鲜期间的弯颈率和耐贮性的不同。

无机离子对非洲菊切花弯颈现象的影响

以非洲菊大红品种(Gerbera jamesonii)为试材,以不同浓度的CoCl2和K2SO4为瓶插保鲜液,通过整体形态观察和生理指标测定相结合的方法,评定Co+和K+在抑制、减少或延缓非洲菊切花弯颈的作用。结果表明:K+对非洲菊切花水分的调节作用优于Co+,Co+对可溶性蛋白质、花青素和弯颈的抑制、减少或延缓作用优于K+,0.5mmol.L-1CoCl2是最佳浓度。

弯颈月季切花水剪试验

【目的】探讨水剪对弯颈月季切花的保鲜效果,为长途运输后的弯颈月季切花提供有效的保鲜复苏方法。【方法】分别从失水胁迫后的弯颈月季切花花枝基部水剪掉5、10和15cm茎杆,以不水剪为对照,对比不同处理下月季切花的花头弯曲程度、鲜重、花朵直径、花朵寿命及水分平衡值。【结果】在水中剪切掉弯颈月季切花大于或等于5cm花枝基部,瓶插1d内吸水量明显增加,弯颈处挺直,萎蔫柔软的花苞恢复坚实状态,花梗表皮由皱缩变光滑、饱满,花朵鲜重明显增加,花朵直径变化明显且呈正常的桔红色,花朵能正常开放至寿命结束,花朵平均寿命约7d。【结论】水剪大于或等于5cm花枝基部,可确保弯颈月季切花茎杆基部的输导系统畅通,促使月季切花瓶插后能恢复正常状态,是弯颈月季切花有效的保鲜复苏方法。

中国弯颈霉的培养性状和药理作用研究

中国弯颈霉ZN923菌株分离自蔗褐蠹蛾PhragmatoeciacastaneaeHubner虫尸。其生长最适温度为25～28℃，最适pH6～7，在富氮培养基上菌丝生长茂盛、洁白，有香气。药理试验表明，该菌株培养物具有镇静、抗炎、增强耐缺氧能力、扩张气管和雄性激素样作用，急性毒性试验以80g／kg（最大允许容积）剂量对小鼠一次灌胃，未见不良作用。中国弯颈霉是与冬虫夏草Cordycepssinensis（Berk．）Sacc．无性型密切相关的真菌。具有潜在的药用价值。

中国弯颈霉ZN_(923)菌株代谢产物的初步研究

中国弯颈霉ZN92 3菌株在以葡萄糖、蛋白胨为主要原料的液体培养基中发酵培养 ,发酵液用等体积乙酸乙酯萃取 ,无水NaSO4 脱水 ,减压浓缩获粗提品 ,经紫外光谱、高效液相色谱、硅胶G薄层层析以及拮抗试验 。

不同发酵条件对中国弯颈霉发酵产物成分影响的实验观察

目的:探讨不同发酵条件对中国弯颈霉(tolypocladium sinense)发酵产物成分的影响。方法:实验选用4种不同培养基进行该菌摇瓶培养,3种不同培养基通气发酵培养,用高效液相色谱法、紫外分光光度法、容量法等分别测定培养产物中的甘露醇、腺苷、多糖、粗蛋白和氨基氮等主要活性成分。结果及结论:不同培养基中的碳源和氮源种类及数量、发酵不同时间和供氧方法对中国弯颈霉人工发酵产物成分影响较大,可能影响产物的药理活性。因此应对产品成分和生产成本等因素综合考虑确定生产工艺。

中国弯颈霉ZN_(923)菌株发酵培养条件的研究

中国弯颈霉ZN923菌株在以葡萄糖蛋白陈为主要原料的培养液中进行摇瓶发酵培养，用正交试验和方差分析、交互作用分析方法检验试验结果，选出最优发酵条件为糖浓度6％，温度25℃，发酵时间72h．

中国弯颈霉ZN_(923)菌株耐自身产物突变株的选育

中国弯颈霉ZN92 3菌株在代谢过程中能产环孢素 .采用耐药性育种方法 ,从紫外线诱变菌株中选育出比出发菌株产量提高 4 0 %～ 12 5

膨大弯颈孢SCKDC10菌株的杀虫活性及培养条件

采用室内毒力测定方法,测定了膨大弯颈孢(Tolypocladiuminflatum)SCKDC10菌株对家蚕4龄幼虫、蚕蛹及柑橘全爪螨雌成螨的毒力,并比较了不同培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基、综合马铃薯培养基、淀粉琼脂培养基、察氏培养基、萨氏培养基、高氏一号培养基、L–broth培养基)、不同碳源(可溶性淀粉、甘露醇、肌醇、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、甘油、蔗糖)、不同氮源(硝酸钾、尿素、蛋白胨、硝酸铵、甘氨酸、赖氨酸、氯化铵)、不同温度(10、15、20、25、28、30、35、40℃)、pH值(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0)、紫外线照射时长(0、20、40、60、80、100、120min)以及常用杀虫剂(螺螨酯悬浮剂、甲氰菊酯乳油、丁氟螨酯悬浮剂、四螨嗪悬浮液、噻螨酮乳油)、杀菌剂(戊唑醇悬浮液、吡哆嘧菌酯乳油、咪鲜胺乳油、多菌灵可湿性粉剂、唑醚·代森联水乳剂)对SCKDC10菌株生长、产孢和孢子萌发的影响。结果显示:SCKDC10菌株对家蚕幼虫及蚕蛹的LC50分别为1.47×10^8个孢子/mL和4.25×10^8个孢子/mL,LT50值分别为6.51 d和7.87 d;对柑橘全爪螨雌成螨的LC50为9.26×10^7个孢子/mL,LT50值为6.34d;萨氏培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基分别为SCKDC10菌株最适生长和产孢培养基;葡萄糖和甘氨酸更有利于该菌的生长和产孢;SCKDC10菌株的最佳生长和产孢温度均为28℃;最适pH值均为7.0;紫外线照射时长对孢子萌发产生较大影响;紫外线照射时长对孢子萌发产生较大影响,随紫外线照射时间延长,菌株生长速率、产孢量以及孢子萌发率逐渐降低,紫外线照射100min后,孢子完全不能萌发。SCKDC10菌株与杀虫剂相容性较好,对杀菌剂比较敏感。

蝙蝠蛾拟青霉和中国弯颈霉蛋白质氨基酸分析及质量评价

目的对蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)和中国弯颈霉(Tolypocladium sinenis)2种虫生真菌菌丝的蛋白质氨基酸进行含量分析及质量评价,为2种真菌的其他相关研究和应用提供依据。方法采用盐酸水解法水解菌丝粉,用Agilent 1200高效液相色谱仪C18反相柱梯度进行分离,上柱前加入邻苯二甲醛-氯甲酸芴甲酯(OPA-FMOC)自动衍生化。参照标准品氨基酸,计算待测样品的氨基酸含量。结果测定了17种蛋白水解氨基酸的含量,其中蝙蝠蛾拟青霉中有4种氨基酸(天冬氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸)的含量高于中国弯颈霉,中国弯颈霉中有11种氨基酸(谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、脯氨酸)的含量高于蝙蝠蛾拟青霉。中国弯颈霉氨基酸总量、必需氨基酸总量、非必需氨基酸总量高于蝙蝠蛾拟青霉,蝙蝠蛾拟青霉支链氨基酸含量高于中国弯颈霉。两者必需氨基酸的模式均符合世界卫生组织和联合国粮农组织(WHO/FAO)提出的必需氨基酸模式谱和参考标准。结论蝙蝠蛾拟青霉与中国弯颈霉均具有较高的营养价值,但两者的蛋白质氨基酸含量并不等同。

雪白弯颈霉产环孢菌素发酵条件的优化

[目的]探讨雪白弯颈霉(Tolypocladium inflatum)产环孢菌素的最适发酵条件。[方法]采用正交试验,研究不同培养时间、培养基种类、装瓶量、菌种接种量(以菌片计)对雪白弯颈霉产环孢菌素的影响。[结果]在培养时间为4 d,发酵培养基为马铃薯200.00 g、甘露醇40.00 g、蛋白胨6.00 g,装瓶量为100 m L,菌片投放为9片时雪白弯颈霉产环孢菌素的发酵条件为最优。[结论]试验结果为提高雪白弯颈霉产环孢菌的产量提供了理论依据。

膨大弯颈霉中与Bmt生物合成相关的PKS基因功能研究

环孢霉素A是一种主要由膨大弯颈霉Tolypocladium inflatum产生的环肽类次级代谢产物,临床上被广泛用作免疫抑制剂,其合成需要特殊底物(4R)-4-[(E)-2-butenyl]-4-methyl-L-threonine(Bmt),但目前相关Bmt的研究很少。基因敲除实验证实Bmt的生物合成需要一个聚酮合酶(polyketosynthase,PKS)基因(simG)参与,并推测其功能为合成Bmt的前体化合物羧酸分子3(R)-hydroxyl-4(R)-methyl6(E)-octenoic acid(B1)。本研究通过在同为虫生真菌的球孢白僵菌Beauveria bassiana中异源表达simG,以证明该基因的功能。通过克隆获得了较大基因simG,利用根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导方法将该基因转化到球孢白僵菌中,通过基因检测和半定量RT-PCR筛选出目标基因表达量高的菌株,获得4株simG高表达菌株。将其发酵培养后,利用LC-MS检测发酵产物,发现在simG高表达菌株中存在与B1分子量相同的产物峰。本研究进一步证明了simG负责化合物B1的合成,是Bmt合成的关键基因。本研究进一步加深了对环孢霉素的生物合成机理的认识,为构建Bmt高产的工程菌株提供理论支撑,有望从解决底物来源角度促进环孢霉素生产效率的提高。