栗疫病菌单个营养体不亲和性基因差异对弱毒性病毒传递的影响

研究了栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)菌株间单个营养体不亲和性(vegetative incompatibility,vic)基因差异对弱毒性病毒传递的影响。将含病毒菌株与具单个vic基因座位差异的野生型菌株配对培养,10 d后调查菌株间的病毒传递率。结果表明,相同vic基因型菌株间的病毒传递率为100%;在1个vic座位上的基因不同通常会降低病毒的传递率,在vic-Cc座位上基因差异菌株间的病毒平均传递率为85.93%,而在vic-Dd座位上基因不同菌株间病毒的平均传递率仅为10.30%,在vic-Aa、vic-Bb座位上基因不同的菌株间病毒平均传递率分别为44.12%、47.93%。vic-Bb座位上基因不同菌株间的病毒正反向传递率相差非常大,由vic-b菌株向vic-B菌株的平均病毒传递率为83.13%,而从vic-B菌株向vic-b菌株的平均病毒传递率只有23.15%;其他3个vic座位上基因不同菌株间的病毒传递率也具有方向性,但不明显。

同核盘菌菌株Ep-1PN弱毒性状相关的RNA及其属性

研究了同核盘菌自然弱毒株Ep-1PN弱毒性状相关的双链RNA及其属性。结果表明3种RNA同Ep-1PN的弱毒性状有关,其片段大小分别为7400bp,6420bp和1090bp。这些RNA分子对RNA酶十分敏感,高浓度的NaCl不能协助其抵抗RNA酶的降解。但它们对专一性降解单链核酸的S_1核酸酶不敏感。因此,同Ep-1PN弱毒性状相关的RNA是双链(ds)RNA。研究还发现核盘菌强致病性菌株Clone38也含有属性类似于Ep-1PN特异性RNA的双链RNA片段。但片段数量和大小不同于Ep-1PN。

栗疫病菌弱毒性菌株的筛选及其dsRNA的转化稳定性

为获取栗疫病生物防治的基础信息,本研究根据菌株在PDA培养基上培养7天后的菌丝生长速度、分生孢子形成能力等培养特性,从韩国国立山林科学院树木病理研究室保藏的60个栗疫病菌菌株中筛选了2个弱致病力菌株,进行dsRNA检测、弱致病力菌株和强致病力菌株间的细胞融合试验。结果表明:2个弱致病力菌株(KCP-135和KCP-136)中均检测到了dsRNA,弱毒性菌株KCP-22和其他19个强毒性菌株之间的菌落形成明显的隔离带并沿着隔离带产生分生孢子,没有明显的细胞融合现象,而弱毒性菌株KCP-22和强毒性菌株KCP-9之间的菌落则呈现了显著的细胞融合现象,而且其细胞融合菌株的培养特性和转化dsRNA数量均发生了变异。

柑桔病毒症防治新技术：接种弱毒性病毒促进柑桔增产研究

接种弱毒性病毒是防治柑桔病毒症、促进柑桔增产的一项新技术。本文就该技术在柑桔生产上应用的意见、试验效果及使用注意事项做了重点介绍。

栗疫病的生物防治:可传递弱毒性的利用和限制因素

本世纪初传入北美的栗疫病(Cryphone-ctria parasitica)对当时相对年轻的植物病理学构成了最主要的挑战。这种传入纽约城珍贵栗树上的浅桔黄色子囊菌长期以来并没有给人们留下奇特性。

优化鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)的生产工艺参数

鸭肝炎病毒属于小核糖核酸病毒,分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个血清型。目前,我国只发现鸭病毒性肝炎病毒I型。鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(CH60株)可用于预防I型鸭肝炎。根据制苗用毒液的制备工艺环节中,不同的鸡胚接种日龄、毒种不同的稀释倍数对鸡胚死亡的高峰时间、每胚的平均收获单产结果都不同。目前存在鸡胚的死亡时间靠前,收率低等问题,为了得到更稳定的产品质量,还需要进一步优化疫苗的生产工艺参数。

鸭α-干扰素真核表达质粒的构建及其对DVH弱毒苗免疫鸭细胞免疫调节作用研究

为检测鸭α-干扰素对鸭细胞免疫的调节作用，本文按常规方法构建了鸭α-干扰素真核表达质粒（pcDNA-DuIFN-α），并以50、100、200μg分别肌注28日龄樱桃谷鸭，15d后免疫鸭病毒性肝炎（DVH）弱毒疫苗，设空载体＋DVH弱毒疫苗、生理盐水、DVH弱毒疫苗以及pcDNA—DuIFN-α对照组，采用流式细胞仪（FACS）和淋巴细胞增殖试验（MTT法）分别对免疫鸭外周血的CD3^＋淋巴细胞总数和T淋巴细胞转化能力进行动态检测。结果：①CD3^＋淋巴细胞数量：7～56d实验组极显著（P≤0．01）高于生理盐水和显著高于（P≤0．05）DVH弱毒苗、空载体＋DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN—α对照组，14～28d 100μg组显著（P≤0．05）高于50和200μg组；②T淋巴细胞对ConA的反应能力（OD值）：21～56d实验组极显著（P≤0．01）高于生理盐水和显著高于（P≤0．05）DVH弱毒苗、空载体＋DVH弱毒疫苗和pcDNA-DuIFN—α对照组，50和100μg组差异不显著，28～56d均略高于200μg组。研究表明pcDNA—DuIFN—α是一种优秀的鸭细胞免疫的分子增强剂和DVH弱毒疫苗的分子佐剂，肌注100μg／只的效果最佳。

鸭病毒性肝炎活疫苗（CH60株）规模化生产工艺改进试验

在鸭病毒性肝炎活疫苗（CH60株）生产时，用10日龄和11日龄进行病毒增值，同时把病毒稀释倍数由100倍改为5000倍，将鸡胚死亡高峰期、最终死亡率、单胚平均收获单产、病毒含量ELD50进行对比分析，结果表明将病毒进行100倍稀释后，用11日龄鸡胚增值鸭病毒性肝炎目日毒（CH60株）与10日龄鸡胚相比死亡高峰期时间、最终死亡率、病毒含量ELD50、单胚平均收获单产等基本相同；将病毒进行5000倍稀释后，用11日龄鸡胚增值鸭病毒性肝炎弱毒（CH60株）与10日龄鸡胚相比死亡高峰期时间推迟12～24h，最终死亡率基本相同、单胚平均收获单产可提高30％左右、病毒含量ELD50略有上升；采用5000倍稀释病毒，接种l1日龄鸡胚的生产工艺可以提高收获单产，降低生产成本，提高产品效价。

猪支原体肺炎的防治措施

随着养猪业逐渐实现规模化、集约化的饲养场生产模式,生产数量扩增,在饲养过程中传染性疾病发病率增高的问题也逐渐显现。猪支原体肺炎虽然被发现已久,但是在规模化饲养后,患病率明显增高,成为发病率最高、影响范围最广的疫病之一,造成了巨大经济损失的同时,也严重的影响了养猪业的良性发展。现阶段对猪支原体肺炎的预防主要以疫苗接种为主,我国主要以研发的弱毒疫苗为主,虽然免疫效果极佳,但是因为疫苗接种的方法与难度较大、养殖人员的专业性不足等问题一直得不到理想的预防效果。在患病猪只的治疗过程中,因为抗生素仅能起到抑制作用,能够避免并发症与二次感染,但是无法完全清楚病原,造成停药后反复复发,并且同一种药物长时间进行治疗还会使支原体对其产生耐药性,严重的影响了正常治疗与生产。本文将对猪支原体肺炎的防治措施与研究发展进行详细的阐述,为养殖户与相关工作人员提供相应的参考。

棉子饼简易去毒法

棉子饼富含蛋白质,是家畜的好饲料,但长期多量饲喂未经去毒处理的棉子饼,易引起家畜中毒。因此用棉子饼作饲料要去毒。 煮沸法:棉子饼加热水处理1～2小时,并加入10％的面粉或麸皮同煮,可使棉子饼的毒性大大减弱。

真菌病毒BmPV1抑制Bipolaris maydis侵染寄主作用研究

玉米小斑病是我国玉米生产上的重要病害之一,每年造成玉米大幅减产。Bipolarismaydis partitivirus 1(BmPV1)病毒是玉米小斑病菌B.maydis携带的一种dsRNA病毒,具有弱毒性,能够引起B.maydis的致病力降低,但BmPV1对寄主侵染的影响并不明确。本研究采用农杆菌转化法将gfp基因分别导入到携带BmPV1病毒的玉米小斑病菌株3086-BmPV1以及脱毒菌株3086-non中,通过PCR扩增及荧光观察分析荧光标记菌株的稳定性;检测gfp基因的插入对菌株生物学特征的影响;采用叶面喷施孢子悬浮液的方式接种,并利用共聚焦显微镜观察带毒菌株及脱毒菌株对玉米叶片的侵染情况。PCR扩增和荧光观察结果表明,gfp基因成功整合到菌株3086-BmPV1和3086-non中;生物学特征分析表明gfp基因的插入对菌株的生长速度、产孢量和致病力无显著影响;侵染观察发现脱毒菌株3086-non-GFP对玉米叶片侵染有两条途径:直接侵染玉米表皮细胞并向邻近细胞扩散;侵染气孔,并通过气孔沿着细胞间隙向邻近细胞扩散。带毒菌株3086-BmPV1-GFP只能在叶片表面生长,多数不能侵染表皮细胞。综上所述,本研究观察了玉米小斑病菌带毒和不带毒菌株对玉米的侵染过程,明确了病毒BmPV1能够通过抑制小斑病菌对玉米叶片的侵入达到弱毒作用。

新城疫疫苗的研究进展

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种高度接触性传染病,是危害养禽业发展最为严重的疫病之一,被OIE列为法定报告动物疫病。现对ND灭活疫苗、活疫苗及基因工程疫苗的研究现状及发展动态等进行简要综述。

改进型反向基因操作系统的构建和流感病毒变异株的选育

目的构建一个新型的反向基因操作系统,并利用该技术获得流感病毒变异株。方法用分子生物学方法把表达蛋白载体(pQBI50_BFP_fA1)和转录基因载体(pHH21)两个载体有机地整合,构建出既能表达病毒蛋白又能转录基因的单一载体(pPol_Ⅱ/Ⅰ);同时通过RT_PCR提取A/Ann Arbor/6/60病毒的cDNA,然后把8个病毒基因分别克隆到pPol_Ⅱ/Ⅰ载体;通过点变异和基因删除方法对M和NS基因进行改进;用细胞培养和细胞免疫染色法测定重组病毒的生物特征。结果成功构建了由8个小质粒组成的转染细胞能力较强的一个新型反向基因操作系统。同时在M和NS基因上加以分子生物学的改进,并获得2个对温度敏感和增殖力低的新毒株。结论一个改进型反向基因操作系统被成功建立,且利用这个系统拯救出2个流感变异株。这个系统不仅在流感病毒的分子基础研究而且将在减毒性活疫苗的研发上发挥重要作用。这2个流感变异株作为减毒性活疫苗的候选株具有较好的开发前景。