病毒卫星RNA及其致弱病毒的机理──我国病毒学基础研究进展之一例

病毒卫星ＲＮＡ及其致弱病毒的机理──我国病毒学基础研究进展之一例田波（中国科学院微生物所分子病毒与生物工程研究室，北京１０００８０）１卫星ＲＮＡ的本质和生物学地位病毒卫星ＲＮＡ是美国ＫａＰｅｒ等于１９７６年在黄瓜花叶病毒中首先发现的［１］，它是伴随病...

利用弱病毒防治植物病毒病害的研究现状

植物病毒间普遍存在干扰现象。目前已能从自然感染的植物中分离选择和通过人工诱变或组建弱病毒。把弱毒株对强毒株的干扰作用应用于数种作物病毒病害的防治实践,获得了明显的增产效果。尽管还有许多问题尚待明确,但研究表明今后可能会制造出更有效的弱病毒,或将其干扰基因赋予植物而成为病毒抗性植物,显示了弱病毒研制上和利用上的广阔前景。

新城疫弱病毒对人肺腺癌细胞系A549多细胞球体的作用

用人肺腺癌细胞系Ａ５４９多细胞球体研究了新城疫弱病毒（ＮＤＶ）的抗癌细胞增殖作用。实验证明使用各种ＮＤＶ稀释液（１／２０、１／１００、１／５００）作用于球体３ｄ，均能使球体延缓生长，与对照组相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。球体表面生长单层细胞能力的测定证实，用ＮＤＶ１／２０、１／１００稀释液处理后的球体，可以在２４孔盘中贴壁，但不能向外生长细胞，球体萎缩。ＮＤＶ１／５００稀释液作用后的球体能贴壁，但只向外生长部分细胞。对照组球体接种后立即贴壁，并向外生长大片细胞，形成较大的生长晕。

新城疫弱病毒对人体肿瘤的作用

新城疫弱病毒对人体肿瘤的作用首都医科大学细胞室潘李珍研究者们早就发现病毒作为一种抗肿瘤制剂具有治疗潜力。５０～７０年代，许多临床文献记载在感染腮腺炎病毒和新城疫病毒后肿瘤病人的肿瘤消退［１，２］。由于新城疫病毒（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒ...

弱病毒生物技术的现状及开发展望

农作物的病毒病是当代农业最为棘手的问题,它是造成粮食、瓜果、蔬菜等农作物减产的重要病害之一,至今没有十分奏效的对策。但是人们在研究中发现有些作物的弱病毒有干涉作用,可以利用它来抑制同种或者是近缘病毒的二次感染。根据这个原理就可以把弱病毒接种到植物的体内,进行预防强病毒感染的试验。在试验中成功的例子很多,

栗疫病菌单个营养体不亲和性基因差异对弱毒性病毒传递的影响

研究了栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)菌株间单个营养体不亲和性(vegetative incompatibility,vic)基因差异对弱毒性病毒传递的影响。将含病毒菌株与具单个vic基因座位差异的野生型菌株配对培养,10 d后调查菌株间的病毒传递率。结果表明,相同vic基因型菌株间的病毒传递率为100%;在1个vic座位上的基因不同通常会降低病毒的传递率,在vic-Cc座位上基因差异菌株间的病毒平均传递率为85.93%,而在vic-Dd座位上基因不同菌株间病毒的平均传递率仅为10.30%,在vic-Aa、vic-Bb座位上基因不同的菌株间病毒平均传递率分别为44.12%、47.93%。vic-Bb座位上基因不同菌株间的病毒正反向传递率相差非常大,由vic-b菌株向vic-B菌株的平均病毒传递率为83.13%,而从vic-B菌株向vic-b菌株的平均病毒传递率只有23.15%;其他3个vic座位上基因不同菌株间的病毒传递率也具有方向性,但不明显。

马传染性贫血病毒弱毒株感染驴胎皮肤细胞(FDD)的前病毒DNA整合动态

马传染性贫血病毒（Ｅｑｕｉｎｅｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓａｎｅｍｉａｖｉｒｕｓ，ＥＩＡＶ）弱毒株，经驴胎皮肤（Ｆｅｔａｌｄｏｎｋｅｙｄｅｒｍａｌ，ＦＤＤ）细胞培养、斑点杂交及ＰＣＲ检测，在感染后２－１０天的细胞染色体中均检出前病毒ＤＮＡ，证明ＥＩＡＶ弱毒株对感染细胞具有整合作用。在感染后第６天，整合的前病毒的量达到高峰，其含量与病毒的致细胞病变作用（ＣＰＥ）相对应。前病毒的存在形式为整合形式，未检出非整合形式的前病毒，在健康的ＦＤＤ细胞中未检出前病毒，说明ＥＩＡＶ属于外源性病毒。ＥＩＡＶ弱毒株基因组两端的ＬＴＲ序列之中各存在一个限制酶ＭｌｕⅠ位点，这与美国强毒株相同，但弱毒株基因组的３端ＭｌｕⅠ位点上游２ｋｂ位置可能存在另一个ＭｌｕⅠ位点。

传染性法氏囊病病毒弱毒株对Vero细胞的适应性研究

传染性法氏囊病病毒疫苗的传统生产工艺是利用鸡胚成纤维细胞增殖 IBDV,但易被外源病原污染 ,且生产成本很高 .借鉴国内外流行性乙型脑炎疫苗生产的经验 ,使用 Vero细胞增殖 IBDV弱毒株 ,从病毒高峰出现时间、滴度峰值的高低、对细胞代谢的影响等方面研究了 IBDV对 Vero细胞的适应性、敏感性以及适应后的种毒的长期保存过程中发现病毒滴度有下降趋势 ,试用了不同试剂对病毒进行保护 .

猪细小病毒弱每株(PPVs-1A)对猪的安全性试验

为了证买PPV_(S-1)株的黄全性,以1—4毫升肌注接种5月龄左右阴性猪6只,观察8天,接种猪无明显临床症状,没有发生病毒血症和排毒.以4毫升(TCIDS_(50)10^(7.5)HA:4096)肌注接种孕猪(孕龄38～46天)4只,一头未接种怀孕母猪与接种孕猪同居饲养42天.结果5只孕猪都没有发生病毒血症,接种后42天宰杀,共收集到胎猪68只,从68只胎猪中没有分离到PPV.

番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律的研究

为明确番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律,采用固定病毒稀释血清法,测定了经弱毒疫苗免疫后的雏番鸭不同时间其血清中和抗体效价。结果显示:疫苗注射1日龄雏番鸭,免疫后28d部分鸭血清中出现抗体,35d全部鸭血清中出现抗体;6个月抗体效价达高峰,有效免疫期在18个月以上。表明番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗诱导的中和抗体产生期较晚,但持续期长。

鸡传染性支气管炎病毒变异机制及致弱方法研究进展

因鸡传染性支气管炎病毒(IBV)基因组RNA聚合酶缺乏校正功能和其特有的套式转录方式,IBV容易发生变异,导致新的变异毒株不断出现,使现有的疫苗难以完全满足预防的需要,这就要求根据流行特点不断研究新的疫苗。根据IBV的变异机制,利用鸡胚连续传代、改变生长温度和基因工程方法可人工获得致弱的IBV毒株,为研究IBV弱毒疫苗毒株奠定基础。论文就近几年来IBV的变异情况及致弱方法研究进展做一综述,为更好的预防IBV提供参考。

羊传染性脓疱皮炎病毒弱毒株的培育研究

羊传染性脓疱皮炎(Contagious Pustulaz dermatitis)是羊的一种急性病毒性传染病,在全国养羊区普遍流行,危害严重。1980年开始,我们首先确定了病原,并在犊牛睾丸细胞上培养成功。在此基础上,对毒力强、免疫原性好的HCE毒株通过犊牛睾丸细胞连续继代,毒力出现不同程度的减弱。

猪细小病毒病弱毒疫苗的保存期试验

将2批猪细小病毒病弱毒疫苗分别在2—8℃保存11个月、12个月、13个月,-20℃保存22个月、24个月、26个月,进行物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全试验及免疫效力试验,探讨不同保存条件和保存期对疫苗的影响。结果表明:物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验均符合《中国兽药典》的要求。安全试验每批次疫苗接种乳鼠全部健活;以10头份/头的剂量接种PPV HI抗体阴性猪,接种后定期采集血样和鼻肛分泌物进行病毒分离,结果均为阴性。疫苗在2—8℃保存至13个月,-20℃保存至26个月TCID_(50)均≥10^(6.25)笛/头份;接种PPV HI抗体阴性豚鼠抗体全部转为阳性;疫苗免疫PPV HI抗体阴性猪,免疫后1个月、7个月分别用PPV强毒攻击获得100%保护。

猪细小病毒自然弱毒N株VP2基因的克隆及原核表达

为了进一步研究猪细小病毒自然弱毒株(PPV-N株)的自然弱毒分子生物学机理,对PPV-N株VP2基因进行克隆、测序和原核表达研究。结果表明,成功构建PPV-N株VP2基因的克隆重组质粒pMD18-T-VP2及表达重组质粒pET32a-VP2,经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,PPV-N株VP2基因在BL21(DE3)plysS菌中成功进行融合表达,表达出约85.4 KDa的VP2融合蛋白,且表达的VP2融合蛋白能与PPV阳性血清发生特异性反应。PPV-N株VP2基因的成功克隆及原核表达为今后研究PPV-N株的自然弱毒的分子生物学机理和研制PPV诊断抗原奠定了基础。

猪细小病毒N株弱毒疫苗区域试验

用三批PPV-N株弱毒疫苗分别在三个规模化猪场进行了较大范围的区域试验,共免疫后备母猪32930头,观察其安全性和免疫效力。结果表明,三批苗均能使豚鼠产生良好的抗体反应。猪只注苗后食欲、体温均正常,无任何不良临床反应。平均每胎产健活仔10.96头,而死胎仅为0.52头,说明PPV-N株弱毒疫苗是预防猪细小病毒感染安全、有效的弱毒疫苗。

马传染性贫血病病毒弱毒疫苗株感染性分子克隆的构建

采用ＰＣＲ方法分三段扩增出马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株（ＥＬＡＶ ＤＬＡ）的前病毒ＤＮＡ，这三个片段覆盖马传染性贫血病毒的全部基因组，ＰＣＲ产物经克隆后顺次连接，获得一个含有ＥＬＡＶ全基因（８．０Ｋｂ）的重组质粒，将其命名为ｐ８．０。将此８．０Ｋｂ ＥＩＡＶ全基因再亚克隆到含有一完整 ＥＩＡＶ ＤＬＡ株长末端重复序列的质粒中，获得一含有 ＥＩＡＶ驴白细胞弱毒前病毒全基因的重组质粒，将其命名为ｐ８．２，经核苷酸序列分析，证明ｐ８．２含有ＥＩＡＶ前病毒的全基因。用ｐ８．２转染驴白细胞，将其作为种毒进行传代，于感染该克隆毒的细胞培养上清中检测出了反转录酶，说明在驴白细胞中由ｐ８．２衍生出了ＥＩＡ病毒。驴白细胞经该克隆毒感染后，第４天出现病变，经透射电镜可观察到典型的马传染性贫血病毒粒子，进一步证明ｐ８．２具有感染性，我们获得了马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株的感染性分子克隆，为进一步在分子水平上阐明我国ＥＩＡＶ疫苗株的减毒机理和免疫保护机制奠定了基础。

高度致弱的痘苗病毒—MVA的研究进展

1989年,WHO等国际组织提出要发展一种理想疫苗[1],使其具有安全、高效、多价、应用方便等特点,从而为疫苗的研究指明了方向.痘苗病毒一度曾作为天花疫苗使用,由于以痘苗病毒为载体构建的重组疫苗具有价廉、高效、易于构建多价疫苗等特点,被科学家们视为表达外源基因的首选载体之一.但是它也有两个主要缺点.其一,接种人体后会产生较重的局部反应,幼儿或患严重免疫缺陷的成人反应更明显.其二,机体内针对痘苗病毒的抗体会降低它的免疫效果.因此,增强痘苗病毒的安全性就成为痘病毒研究的当务之急.

柑桔病毒症防治新技术：接种弱毒性病毒促进柑桔增产研究

接种弱毒性病毒是防治柑桔病毒症、促进柑桔增产的一项新技术。本文就该技术在柑桔生产上应用的意见、试验效果及使用注意事项做了重点介绍。