RhC弱表达变异型标本同时发生RHCE、RHD基因突变1例

目的分析1例血清学RhC抗原弱表达标本的RH基因背景。方法标本经RhD阴性确认及Rh分型后,抽取基因组DNA。QRT-PCR检测是否具有RHD基因,由于该标本具有RHD基因,对RHD和RHCE基因同时进行测序分析,并对RHD基因进行合子型分析。结果标本血清学RhC弱表达,同时RhD阴性,RHD和RHCE基因同时发生突变,RHD基因突变为RHD*01N.16(c. 711delC;p. Val238Cysfs*8),合子型为RHD/-。RHCE基因发现2个突变,分别是RHCE*01.01(c. 48G>C;p. Trp16Cys)及RHCE-D(4)-CE。结论 RhC/c/E/e抗原同样具有大量变异型,RH基因背景也相当复杂,为进一步提升输血安全性,开展针对RhC/c/E/e变异型的研究具有一定意义。

恶性肿瘤和血液病患者ABO血型抗原弱表达及输血对策

目的对恶性肿瘤及血液病患者ABO血型抗原弱表达进行系统性分析并对其输血对策进行探讨。方法随机抽取恶性实体肿瘤及血液病患者198例,查阅诊断和输血情况,并对抗原弱表达的病例进行吸收放散、唾液中和等试验鉴定正确血型,同时将两种病情结果进行对照分析。结果发现两种病情均有呈现ABO血型抗原弱表达情况,分别为1.65%、20.78%,血液病患者抗原弱表达明显高于恶性实体肿瘤病例(χ2=18.58,P<0.05)。因贫血而导致的血液病输血病例中,输注同型血与输注洗涤红细胞后血红蛋白值相比差异无统计学意义(t=1.76,P>0.05)。结论采用血清学正反定型试验、吸收放散试验和唾液血型物质检测的方法可以更为准确对ABO血型抗原弱表达的病例进行血型鉴定,输血时以输注正确鉴定的同型血为原则,特殊情况下输O型洗涤红细胞更为安全。

不同方法筛查RhD弱表达变异体

目的研究不同检验方法在RhD弱表达变异体中的应用范围及相互之间的关系。方法应用酶介质法和间接抗球蛋白试验(indirect antiglobulin test,IAT)在盐水凝集法初筛出的RhD阴性个体中进一步筛查弱D/部分D,然后在IAT确认的RhD阴性个体中采用吸收放散试验筛查DEL型。结果 278例RhD阴性个体酶介质法和IAT分别筛查出13和15例弱D/部分D,吸收放散试验筛查出64例DEL型。结论在这几种RhD弱表达变异体筛查方法中,盐水凝集法不能筛查RhD弱表达变异体,只能筛查正常表达的RhD抗原;酶介质法和IAT可以筛查弱D/部分D,酶介质法比IAT少检出两例(P>0.05),但得出酶介质法不如IAT敏感的结论尚早,有待于大样本的进一步研究;在IAT确认的RhD阴性个体中,若采用更为敏感的吸收放散试验,仍有部分个体RhD抗原检测为阳性。

B等位基因新突变导致B抗原弱表达1例

目的研究1例B抗原减弱患者的血清学和基因学特征。方法采用盐水法和微柱凝集法等血清学方法进行患者ABO血型检测;采用PCR技术特异性扩增ABO基因第1~7外显子,PCR产物纯化后进行Sanger测序分析并确定突变位点的位置。结果患者血清学方法表现为红细胞B抗原弱表达,同时血清中存在抗-A抗体,无抗-B抗体。PCR-SSP技术基因分型结果为ABO*B.01/ABO*O.01.01型,测序结果显示在其第7外显子上的第448位碱基发生了T>C的杂合突变,进一步进行单链测序证明该突变点位于B基因上,属于新的未被NCBI和dbRBC数据库收录的B等位基因。结论B等位基因新突变是造成ABO*B.01/ABO*O.01.01基因型中B抗原弱表达的原因之一,血清学和基因学联合应用有助于发现血型表现型和基因型特点,为制定临床输血策略提供参考。

B等位基因新突变导致AB弱表型

目的对血清学血型鉴定困难的患者进行ABO基因分型。方法采用Diagnostic Grifols,S.A公司的DG Gel Confirm卡、Neutral卡、Coombs卡以及WADiana/8XT Compact Analyzer全自动系统进行血清学血型鉴定、抗球蛋白试验和抗体筛查,采用聚合酶链反应结合直接测序法检测该患者ABO基因的增强子、启动子、第1-7外显子及其邻近内含子序列。结果患者红细胞与抗B反应为弱阳性表型,即在凝胶卡中呈双群(DP),试管中呈混合视野(MF);而与抗A反应均为强阳性。DNA测序发现患者ABO基因存在9个变异,第6外显子的297A>G杂合突变,第7外显子的467C>T、526C>G、657C>T、703G>A、796C>A、803G>C、829G>T、930G>A8处杂合突变,其中829G>T为新变异。根据Blood Group Antigen Gene Mutation Database数据库,该患者为A102/B101血型弱表达。结论 B等位基因的新变异是造成A102/B101基因型中B弱表达的主要原因,血清学和分子生物学检测有助于深入了解血型表型和基因型的特点,为正确制定临床输血策略提供依据。

ABO基因调控区变异对其表型的影响

目的探讨ABO基因调控区增强子、启动子变异对ABO表型的影响。方法对4名来自上海儿童医学中心血型鉴定正反不符的患儿标本,采用ABO-Rh血型确认卡(DG Gel Confirm)、中性卡(DG Gel Neutral)、抗球蛋白检测卡(DG Gel Coombs)在全自动血型检测系统上做血清学血型鉴定、抗球蛋白试验和抗体筛查,采用PCR结合直接测序法检测患儿及其中1个家系的ABO基因增强子、启动子、第1—7外显子及其邻近内含子序列。结果4名患儿的红细胞分别与凝胶卡中抗-A、抗-B试剂反应出现弱阳性或双群现象(DP),其表型分别为ABweak、Aweak、Aweak、AweakB型。DAN测序:4名患儿基因型分别为ABO*A1.02/B.01、ABO*A1.02/O.01.02、ABO*A1.01/O.01.02、ABO*A1.02/B.01/O.01.04,同时ABO基因调控区增强子或启动子分别存在变异现象;2例为增强子微卫星拷贝数异常、其中1例伴启动子变异,2例为血型嵌合体引起增强子突变而导致的血型抗原弱表达。病例3患儿父母表型分别为A和B型,基因型分别为ABO*A1.02/O.01.01和ABO*B.01/O.01.02。结论ABO基因调控区对ABO血型的正常表达起着非常重要的作用,增强子异常或启动子的变异将导致ABO血型抗原的表达减弱;检测增强子序列也可以发现可能存在的ABO血型嵌合体。

中国人群中RHAG基因序列的观察

目的探讨中国人群中不同Rh血型表型的RHAG基因序列。方法用血清学方法检测20例中国人群中不同Rh血型表型[包括了15例Rh(D)阳性样本和5例Rh(D)阴性样本,Rh(D)阳性样本中包含5例Rh Cc Ee抗原弱表达、5例弱D和5例正常Rh(D)阳性样本],依据RHAG基因序列的特异性,设计10对特异性引物扩增20例样本的RHAG基因第1~10外显子,确认条带符合后送公司纯化并测序。结果 20例不同Rh血型表型的样本在统一PCR条件下均扩出RHAG基因1~10外显子,扩增产物测序结果与标准序列对比一致。结论了解中国人群中RHAG基因的多态性需观察更多有意义的样本。