应用弱阳离子交换蛋白质芯片捕获的健康成人血清蛋白质/多肽谱分析

目的:分析健康成年人血清蛋白质/多肽谱特点,为人类血清蛋白质组研究提供基础性资料。方法:应用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX2)磁珠处理30例健康成年人血清,通过表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测血清蛋白质/多肽谱,描述性分析其种类、分子质量范围、丰度(用相对强度计量)、个体性差异等。结果:共检测到947种蛋白质/多肽,不同个体其种类数量在34～108不等,相对分子质量范围为1059～10265,表达丰度在95～35419之间;分别有570、154、71、36、32、26、18、16、14、5、2和3种相应血清蛋白质/多肽在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、14例个体血清中存在。结论:WCX2磁珠仅能捕获到数量较少的低丰度、低分子量人血清蛋白/多肽,在受检人群中这些蛋白/多肽呈现高度的个体差异性。

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术筛查肺癌血清特异性蛋白质及其临床意义

目的:探讨用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术筛查肺癌血清特异性蛋白质的临床意义。方法:应用SELDI-TOF-MS对35例正常对照组、43例治疗前肺癌病人的血清样品进行蛋白质指纹图谱测定,用BioMarker Wizard 3．01及BioMarker Parrern System 5．01分析软件对测得的数据进行处理及建立诊断模型。结果:共检测到251个蛋白质峰,筛选出差异蛋白质峰11个,以质荷比(m/z)分别为M2799_26,M3227_41,M5739_70和M8164_30的4个蛋白质峰为依据组合构建分类决策树模型,分出5个终节点。决策树模型的原始判别总准确率为91．0%(71/78),敏感性为88．4%(38/43),特异性为94．3%(33/35);交叉验证总准确率为85．9%(67/78),敏感性为88．4%(38/43),特异性为82．9%(29/35)。结论:SELDI-TOF-MS在肺癌血清特异性蛋白质的筛选及诊断模型的建立有一定的临床意义。

不同结核病患者群血清蛋白质谱分析与比较

目的:比较分析菌阳肺结核与菌阴肺结核、肺结核与肺外结核患者的血清蛋白质谱,从蛋白质组学层面了解不同结核病患者群血清蛋白质谱的特征,为结核病诊断标志物的筛选提供指导。方法:应用表面增强激光解吸-电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片系统,采用弱阳离子交换蛋白质芯片(WCX)对54例菌阳肺结核、45例菌阴肺结核、18例肺外结核患者的血清蛋白质进行检测;应用ClinProTools分析软件依据各蛋白质的质谱峰面积计算相对强度表示该血清蛋白质的丰度,采用t检验(对Anderson-Darling检验P>0.05的正态分布者)或Wilcoxon检验(对Anderson-Darling检验P<0.05的非正态分布者)分析比较菌阳肺结核与菌阴肺结核、肺结核与肺外结核患者各血清蛋白质的平均丰度。结果:(1)在3种不同结核病患者人群中均捕获到102种相对分子质量在1011.41～9435.07的不同血清蛋白质,经Anderson-Darling检验,在菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺外结核患者人群中分别有31、23和29种血清蛋白质呈正态分布。(2)正态分布的血清蛋白质在不同结核病患者人群间其水平未见显著差异。(3)非正态分布的血清蛋白质:在菌阳肺结核与菌阴肺结核患者人群间其水平未见显著差异;在肺结核与肺外结核患者人群间发现1个差异血清蛋白质(P=0.0251),其相对分子质量为5753.76,在肺结核与肺外结核患者人群血清中的平均丰度分别为15.42±4.86和28.29±14.08。结论:不同结核病患者群的血清蛋白质谱具有同质性,为普遍适用性结核病血清学诊断标志物的筛选提供了科学依据。

结核杆菌临床分离菌早期培养滤液蛋白质组的比较

目的：初步了解结核杆菌体外液培养条件下的早期蛋白质代谢和分泌活动状况。方法：将2株对抗结核一线药物敏感的结核杆菌临床分离茵接种Middlebrook7H9液体培养基进行培养，并于培养第7天用0．22μm滤纸过滤培养液制备早期培养滤液，应用与弱阳离子交换蛋白质芯片（WCX2）捕获滤液蛋白行表面增强激光解吸一电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-Ms）检测，描述性分析比较其蛋白质组。结果：在2株结核杆菌7d培养滤液中分别检测到相对分子质量为982～9329与941。9331、丰度为7～210与11-368（通过质谱峰面积计算相对强度值表示）的164与194种蛋白质；与Middlebrook7H9液体培养基本身蛋白质组比较，在2株结核杆菌7d培养滤液中分别有153和183种蛋白质新产生（其中10种在2份滤液中均有存在）、92和90种蛋白质消失、10和13种蛋白质丰度变小。结论：在体外液体培养条件下，结核杆菌蛋白质代谢和分泌活动活跃。且不同菌株间有较大差异。

耻垢分枝杆菌7天培养滤液与Middlebrook 7H9培养液蛋白质组对比分析

目的初步了解耻垢分枝杆菌体外培养过程中对蛋白质的利用及其蛋白分泌活动状况，以进一步了解其生物特性。方法应用与弱阳离子交换蛋白质芯片（WCX2）联用的表面增强激光解吸一电离飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测Middlebrook7H9培养液和耻垢分枝杆菌7天培养滤液蛋白质／多肽，采用描述性分析其蛋白质／多肽谱并比较两者间的差异。结果在Middlebrook7H9培养液中检测到97种蛋白质／多肽，相对分子质量在1050～3940之间，丰度水平在86～7838相对强度值之间（相对强度值通过质谱峰面积计算）；在耻垢分枝杆菌7天培养滤液中检测到125种蛋白质／多肽，相对分子质量在1050～9330之间，丰度水平在111～9961相对强度值之间；相对Middlebrook7H9培养液，耻垢分枝杆菌7天培养滤液的蛋白质／多肽谱发生了下列变化：45种消失、20种丰度降低、3种未变化、30种丰度增大、71种新产生。结论耻垢分枝杆菌作为快速生长分枝杆菌菌种，在体外培养生长时有活跃的蛋白质利用和分泌活动，对于既无侵袭力又无毒素产生的耻垢分枝杆菌而言，这些活动可能与其致病性密切相关，值得人们深入研究。

SELDI-TOF-MS筛查乳腺癌患者血清特异性蛋白的探讨

目的:应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术寻找乳腺癌患者血清特异性蛋白。方法:应用弱阳离子蛋白质芯片(WCX2)及SELDI-TOF-MS技术检测12例正常人、10例乳腺良性病患者和22例乳腺癌患者血清中蛋白的相对含量。结果:三组样本质荷比在2000～30000Da间3939.314Da与3960.478Da的2个蛋白峰有显著差异。结论:SELDI-TOF-MS技术对乳腺癌早期诊断和特异性肿瘤标记物的筛选等方面具有一定价值,值得推广。

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术筛查乳腺癌血清特异性蛋白质及其临床意义

目的探讨表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI TOF MS)技术筛查乳腺癌血清特异性蛋白质的临床意义。方法应用SELDI TOF MS技术检测38例乳腺癌、33例乳腺良性疾病和43例健康对照者的血清蛋白质指纹图谱,并联合应用BioMarkerWizard3.01及BioMarkerPattern Software5.01软件分析处理数据,筛选肿瘤标志物并建立诊断模型。结果质荷比分别为M2077_07、M1827_38、M2650_51和M2060_62的4个蛋白质峰组合构建的诊断模型Ⅰ,鉴别乳腺癌和非乳腺癌的交叉验证敏感性为73.7%(28/38),特异性为73.7%(56/76)。质荷比分别为M2251_62、M3405_56、M3428_16、M4666_98和M16239_8的5个蛋白质峰组合构建的诊断模型Ⅱ,鉴别Ⅰ期乳腺癌和乳腺良性疾病的交叉验证敏感性为84.8%(28/33),特异性为55.6%(5/9)。质荷比分别为M1701_48、M3116_17、M1676_88、M5890_33和M2921_02的5个蛋白质峰组合的诊断模型Ⅲ,鉴别Ⅰ期与Ⅱ～Ⅳ期乳腺癌的交叉验证敏感性为88.9%(8/9),特异性为86.2%(25/29)。结论SELDI TOF MS技术在乳腺癌的筛查、早期诊断及临床分期判定等方面具有一定价值,值得进一步深入研究。

血清SELDI蛋白质指纹图谱在乳腺癌术前分级中的应用

应用SELDI技术和生物信息学方法从血清中筛选能反映乳腺癌术前分期的蛋白质峰并构建检测模型。采用CM10芯片,对34例Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌患者和31例Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌的血清进行了检测,发现11个蛋白质峰在两组患者之间表达量有显著性差异(P<0.05),M/Z为M2042.87、M2459.83、M3881.37、M4804.47、M6683.24和M6706.06的6个蛋白质峰被选为分类变量构成决策树分类模型,该模型的交叉验证(测试组)总准确率为80.0%,Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌检出率为82.4%,Ⅲ～Ⅳ期检出率为77.4%。SELDI技术在乳腺癌患者术前分级的判断方面具有一定的应用价值。

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱筛选大肠癌血清特异标志物

目的采用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测大肠癌患者与健康对照者血清中蛋白的差异,为大肠癌的早期诊断提供理论依据。方法应用SELDI-TOF-MS技术及弱阳离子蛋白质芯片(WCX2)检测36例健康成人(对照组)和36例大肠癌患者(大肠组)血清中蛋白含量。结果在质荷比为2000Da～30000Da的范围内,两组样本检测到了对照组82个蛋白峰。其中3604.240Da蛋白峰大肠癌组明显高于对照组(P<0.05),而12861.368Da的蛋白峰对照组明显高于大肠癌组(P<0.05)。利用这两个蛋白筛查大肠癌的特异度为86.11%(31/36),敏感度为77.78%(28/36),阳性预测值为87.5%。结论质荷比为3604.240Da与12861.368Da的两个蛋白峰可以作为大肠癌早期诊断的备选标志物。

表面增强激光解吸电离飞行时间质谱筛查大肠癌早期肝转移病人血清特异性蛋白的探讨

目的寻找筛查大肠癌早期肝转移病人血清特异性蛋白。方法对中国人民解放军第202医院2007-2009年收治的20例大肠癌和20例大肠癌早期肝转移病人,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测其血清中特异性蛋白的相对含量。结果两组样本质荷比在2000～30000u间有3774u、11851u的2个蛋白峰有显著差异。结论 SELDI-TOF-MS技术对大肠癌早期肝转移的诊断和特异性肿瘤标记物的筛选等方面具有一定价值,值得推广。