自制填充介质对人血浆凝血因子Ⅸ的层析分离

目的采用自制的DEAE Bio-SepFF和肝素Bio-Sep FF介质,从人血浆中快速分离纯化凝血因子Ⅸ(FⅨ)。方法低温离心去除冷沉淀后的人血浆,在不同淋洗条件下,经过两步弱阴离子交换和一步亲和层析分离纯化FⅨ,用活性检测试剂盒检测各组分凝血因子的活性,Bradford法测定蛋白浓度,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析样品的纯度。结果经过三步层析分离,得到的FⅨ比活达到99.40IU/mg,纯化倍数为3823倍,回收率约为30%,纯度较高。结论采用该方法和介质,可从人血浆中纯化FⅨ,且效果较好。

用KTA explorer 10蛋白纯化系统分离纯化家蚕类免疫球蛋白

类免疫球蛋白(Hemolin)是昆虫的先天性免疫蛋白。为了获取纯度高、具有天然活性的家蚕Hemolin,将被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染的家蚕蛹进行匀浆处理,离心后对上清液进行DEAE弱阴离子交换层析,进而利用Superdex 200凝胶过滤层析获得家蚕Hemolin的初级纯化产物,经质谱鉴定验证后再利用Superdex 75凝胶过滤层析对初级产物做进一步分离纯化。获得的纯化产物采用SDS-PAGE和Western blot检测到单一的大小约45 kD的蛋白质条带。采用该层析技术与条件能有效制备出纯度较高的具有天然活性的家蚕Hemolin。

Bacillus sublitis JH-1木聚糖酶的纯化及酶学性质

对枯草芽孢杆菌Bacillus sublitis JH-1胞外木聚糖酶的纯化及酶学性质进行了研究。通过（NH4）2SO4分级沉淀法、透析除盐、DEAE-Sepharose FF弱阴离子交换层析等方法,从枯草芽孢杆菌Bacillus sublitis JH-1发酵液中分离纯化得到了电泳纯的木聚糖酶,其相对分子质量为3.45×10^4,比活力为75 899.68 U/mg。酶学性质研究结果表明：该酶的最适p H为6.0,在最适p H条件下保温2 h后仍能保持75%的活力,而p H越高,活力下降越快,表明为酸性木聚糖酶;最适温度为55℃,在50-60℃保温2 h后仍具有70%左右相对较高的活性,说明该酶具有较强的耐高温性;Fe^2＋、Mg^2＋、Ca^2＋、Zn^2＋、Ba^2＋和低浓度（5 mmol/L）的Fe^3＋对酶的活性有促进作用,而Mn2＋和高浓度（10mmol/L）的Fe^3＋对酶的活性有抑制作用。

不同分离提纯工艺对冬凌草多糖提取率与免疫活性的影响

目的:优选分离冬凌草多糖的方法,探究不同分离方法对冬凌草多糖分离效果的影响。方法:分别以DEAE-Sepharose Fast Flow(Cl-型)弱极性阴离子交换层析法、乙醇分级醇析法对冬凌草粗多糖进行分离纯化,以不同分离组分中多糖含量及其免疫活性比较优选冬凌草粗多糖的分离工艺。结果:DEAE-Sepharose Fast Flow(Cl-型)弱极性阴离子交换层析法分离得到5个组分,通过乙醇分级醇沉初步得到4个冬凌草多糖组分,前者分离产品纯度较高,而后者产品在体外小鼠脾淋巴T细胞的增殖实验中表现出较强生物活性。结论:为进一步研究冬凌草多糖的生物活性,可选用乙醇分级醇沉法对冬凌草多糖进行分离纯化。

海带褐藻糖胶的分离纯化及其抗氧化活性测定

为更好地开发海带资源,分别采用DEAE-Sepharose FF弱阴离子交换柱层析、高效液相凝胶色谱对海带褐藻糖胶粗品进行分离纯化,结果表明,2种方法均可用于褐藻糖胶的分离,均分离出3个组分,离子交换层析分离出的组分命名为D-1,D-2,D-3。高效液相凝胶色谱分离的3种组分命名为H-1,H-2,H-3,其分子量分别为193.148,74.407,44.452 kD。对D-1,D-2,D-33种组分进行抗氧化活性测定,3种组分对DPPH自由基和·OH均表现出一定的清除能力,且分子量越小,清除自由基能力越强,体外抗氧化活性越好。