用阴离子交换色谱法制备寡聚核苷酸

建立了用Source 15Q强阴离子交换柱分离纯化寡聚核苷酸的方法.在pH 9.0,以20 mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0 mol/L NaCl为流动相,线性浓度梯度洗脱,紫外检测波长为260 nm,流速为1 mL/min的分离条件下,能很好地分离18-78 mer的合成寡聚脱氧核苷酸和PCR的单双链产物,探讨了流速和盐浓度对分离的影响,并测得24mer OligoDNA的回收率为90%左右.该方法简便、快捷、分辨率高,可用于寡聚核苷酸、反义核酸药物的分离、纯化、鉴定和制备.

高效阴离子交换色谱法分离不对称PCR产物

目的为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法.方法利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链,并测定回收率.结果SOURCE 15Q柱在紫外检测波长为260nm,流速为1ml/min,流动相为pH9.0时,以20mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0mol/LNaCl,线性浓度梯度洗脱的分离条件下,能很好地对85个碱基长度不对称PCR产物的单双链进行分离;对24mer单链样品进行回收率测试,回收率为92.46%.结论利用SOURCE 15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链的方法简便、快捷、稳定、分辨率高、纯度高,适合核酸单链和双链样品的分离、纯化、鉴定和制备.

离子交换纤维柱分离-电感耦合等离子体原子发射光谱法测定金属镍及其化合物中铬

当镍的共存质量浓度大于铬5 800倍时,对电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICPAES）直接测定铬有明显的负干扰,而且干扰程度随着镍共存质量浓度的增大而增大。试验结果表明：将25.00mL 5.00×102μg/mL Ni（Ⅱ）、1.50mol/L NH4SCN的试液（pH 1.0）,以0.5mL/min的流速通过3.00g强碱性阴离子交换纤维柱（=10mm）,Ni（Ⅱ）能被纤维柱吸附,因铬在此条件下不被吸附而收集在待测流出液中,从而消除了镍基体对测定铬的干扰。方法中铬的测定下限为2.00×10-3μg/mL。按照实验方法对实际样品以及合成样中铬进行测定,合成样测定结果的相对误差绝对值不大于3.2%,实际样品回收率在93%~99%之间,测定总值的相对标准偏差（RSD,n=6）不大于2.9%。

重组人瘦素的分离纯化

目的 :探索毕赤酵母表达的人瘦素的非亲和层析纯化方法。方法 :采用强阴离子交换柱 (SepharoseQfastflow)和疏水层析柱 (PhenylSepharose 6fastflow)在 pH 7.5的条件下进行纯化。结果 :经Q柱一步纯化后 ,产物纯度由 4 2 .3%到达89 .6 % ,随后通过疏水层析纯化后 ,产物纯度达到 96 .2 %。经SDS -PAGE证实为单一蛋白条带。结论 :通过上述手段已成功分离纯化得到纯度较高的由毕赤酵母表达的重组人瘦素。

亲水作用色谱法测定甜菊糖主要极性组分

以亲水作用色谱(HILIC)模式,建立一种强碱性阴离子交换分析柱(SAX)分离检测甜菊糖中甜菊糖甙、莱鲍迪甙C、莱鲍迪甙A的方法。根据吸附剂、吸附质的结构特点及物理特性,对分离机理进行初探,推测导致此机理的诱因可能为氢键、偶极作用等。与国标法相比,所建立的检测方法中色谱图杂质峰数目增多,主要物质分离度明显提高。甜菊糖甙、莱鲍迪甙C和莱鲍迪甙A的线性范围分别为0.056～5.600、0.032～3.200mg/mL和0.204～24.000mg/mL,R2分别为0.9991、0.9989和0.9992。3组分低、中、高3个质量浓度水平的加标回收率在95.8%～101.1%之间,相对标准偏差(n=6)均小于1.00%。该方法简单、灵敏、准确、重现性好,为准确分析甜菊糖主要极性组分提供了更加可靠的检测方法。

全自动SPE-HPLC法测定食品中丙酸钙(钠)和双乙酸钠

主要探讨利用全自动固相萃取法进行食品常规样品前处理的方法研究，与国标方法比较，明显优于现有方法能够实现快速准确高效的测定食品中丙酸钙（钠）和双乙酸钠。结果表明，利用Cleanert SAX强阴离子交换枉的全自动固相萃取法可以作为检测食品中的丙酸钙（钠）和双乙酸钠的有效方法，2mL 10％HCl洗脱效果最佳，方法的检出限为0．03mg／kg，回收率为92．5％，102．5％，测定结果的相对标准偏差分别为1．47和1．32（n=5）。利用强阴离子交换柱及全自动固相萃取仪，可以大幅提高工作效率，降低方法检出限，保证检测结果的准确性及方法的重现性。

电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)测定食品中的六价铬

采用超声浸提和净化的前处理方式,利用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)测定食品中三价铬的含量,得到食品中六价铬含量(六价铬=总铬-三价铬)。通过单因素分析,分别考察酸的种类、酸的浓度、超声时间、称样量变化、脱脂试剂对方法回收率的影响,并利用正交试验得出最佳前处理条件为:对称样量0.5 g(精确到0.0001g)的样品,用1+99(体积比)的盐酸超声浸提60 min,采用正己烷进行脱脂。选取猪肉、木耳、茶、菠菜等不同基质对该方法的适用性进行考察,分别对上述基质进行3个水平(0.16,0.32和0.48 mg/kg)的加标回收试验,回收率在85%~107%,该方法适用于食品中六价铬的定量检测。

高效液相色谱串联质谱测定粮谷及饲料中玉米赤霉烯酮及其代谢物和伏马毒素B_1、B_2

为建立粮谷及饲料中玉米赤霉烯酮及其代谢物和伏马毒素B1、B2的高效液相色谱串联质谱检测方法,本试验将样品经甲醇:水(3∶1)提取,强阴离子交换柱(MAX)富集净化,利用C18色谱柱分离,电喷雾串联四极杆质谱ESI源,在多反应监测模式(MRM)下采用正负离子同时扫描,对8种真菌毒素进行高效液相色谱串联质谱法测定。结果经方法学验证,8种物质的回收率大于70%,标准偏差均小于10,变异系数均小于10%,表明该检测方法能够满足包括欧盟、日本、美国等国家和地区对玉米赤霉烯酮及其代谢物,伏马毒素B1、B2等毒素的痕量检测的要求。