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基于环介导等温扩增技术检测由强雄腐霉引起的玉米茎腐病
被引量:
15
1
作者
赵媛媛
沈丹宇
+2 位作者
于佳
徐衡
窦道龙
《植物保护学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期626-633,共8页
为建立强雄腐霉Pythium arrhenomanes的快速分子检测技术,基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)以β-tubulin基因为靶标序列,设计强雄腐霉的特异性引物,建立了一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测...
为建立强雄腐霉Pythium arrhenomanes的快速分子检测技术,基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)以β-tubulin基因为靶标序列,设计强雄腐霉的特异性引物,建立了一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测方法的特异性、灵敏度和实际应用效果进行评估。25 μL LAMP最终反应体系为:10×ThermoPol Buffer 2.5 μL、10 mmol/L dNTPs 3.5 μL、6 mmol/L MgSO4 2 μL、5 mol/L甜菜碱4 μL、40 μmol/L FIP-1/BIP-1各1 μL、5 μmol/L F3-1和B3-1各1 μL、40 μmol/L LB-1 1 μL、Bst DNA polymerase 1 μL、2.5 mmol/L HNB 1.9 μL、模板DNA 2 μL、灭菌水3.1 μL。LAMP体系在等温64℃条件下反应60 min,HNB显色反应显示天蓝色即为阳性反应;扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳验证为梯形条带,也可判定为阳性反应。特异性检测结果显示,LAMP体系能特异性地检测出强雄腐霉,而其它卵菌近缘种和常见植物病原真菌均未检测出。灵敏度检测结果显示,LAMP体系的最低检测灵敏度为10 pg/μL,是普通PCR反应灵敏度的1 000倍。在实际应用中,LAMP体系能够快速检测出人工接种和实际发病玉米组织中的病原菌。表明本研究建立的快速、准确、可视化的LAMP检测方法能在60 min内检测出强雄腐霉。
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关键词
强雄腐霉
环介导等温扩增
快速检测
羟基萘酚蓝(HNB)
原文传递
寄生玉米的6种腐霉及其致病性研究
被引量:
35
2
作者
王晓鸣
吴全安
+1 位作者
刘晓娟
马国忠
《植物病理学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994年第4期343-346,共4页
从国内12省、自治区、直辖市玉米植株上分离出腐霉菌菌株,依据形态特征、培养性状、生长抑制温度,以及产生的有性与无性器官,鉴别出6个腐霉种:棘腐霉(Pythium acanthicum Drechsler),瓜果腐霉(P.aphanidermatum(Edson)Fitzpatrick),强...
从国内12省、自治区、直辖市玉米植株上分离出腐霉菌菌株,依据形态特征、培养性状、生长抑制温度,以及产生的有性与无性器官,鉴别出6个腐霉种:棘腐霉(Pythium acanthicum Drechsler),瓜果腐霉(P.aphanidermatum(Edson)Fitzpatrick),强雄腐霉(P. arrhenomanes Drechsler),禾生腐霉(P.graminicola Subramaniam),肿囊腐霉(P.inflatum Matthews),寡雄腐霉(P.oligandrum Drechsler),其中肿囊腐霉出现频率高,分布广泛。回接玉米表明,腐霉能够侵染玉米并引起病害,肿囊腐霉、禾生腐霉、强雄腐霉、棘腐霉是玉米青枯病的重要致病菌;瓜果腐霉能够引起玉米中部茎节腐烂;寡雄腐霉虽寄生玉米,但对玉米成株无致病力。
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关键词
玉米
青枯病
棘
腐
霉
瓜果
腐
霉
强雄腐霉
致病性
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职称材料
题名
基于环介导等温扩增技术检测由强雄腐霉引起的玉米茎腐病
被引量:
15
1
作者
赵媛媛
沈丹宇
于佳
徐衡
窦道龙
机构
南京农业大学植物保护学院
出处
《植物保护学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期626-633,共8页
基金
国家公益性行业(农业)科研专项(201503112)
中央高校基本科研业务费专项(KJQN201660)
文摘
为建立强雄腐霉Pythium arrhenomanes的快速分子检测技术,基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)以β-tubulin基因为靶标序列,设计强雄腐霉的特异性引物,建立了一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测方法的特异性、灵敏度和实际应用效果进行评估。25 μL LAMP最终反应体系为:10×ThermoPol Buffer 2.5 μL、10 mmol/L dNTPs 3.5 μL、6 mmol/L MgSO4 2 μL、5 mol/L甜菜碱4 μL、40 μmol/L FIP-1/BIP-1各1 μL、5 μmol/L F3-1和B3-1各1 μL、40 μmol/L LB-1 1 μL、Bst DNA polymerase 1 μL、2.5 mmol/L HNB 1.9 μL、模板DNA 2 μL、灭菌水3.1 μL。LAMP体系在等温64℃条件下反应60 min,HNB显色反应显示天蓝色即为阳性反应;扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳验证为梯形条带,也可判定为阳性反应。特异性检测结果显示,LAMP体系能特异性地检测出强雄腐霉,而其它卵菌近缘种和常见植物病原真菌均未检测出。灵敏度检测结果显示,LAMP体系的最低检测灵敏度为10 pg/μL,是普通PCR反应灵敏度的1 000倍。在实际应用中,LAMP体系能够快速检测出人工接种和实际发病玉米组织中的病原菌。表明本研究建立的快速、准确、可视化的LAMP检测方法能在60 min内检测出强雄腐霉。
关键词
强雄腐霉
环介导等温扩增
快速检测
羟基萘酚蓝(HNB)
Keywords
Pythium arrhenomanes
loop-mediated isothermal amplification
rapid detection hydroxynaphthol blue (HNB)
分类号
S435.131 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
原文传递
题名
寄生玉米的6种腐霉及其致病性研究
被引量:
35
2
作者
王晓鸣
吴全安
刘晓娟
马国忠
机构
中国农科院作物品种资源研究所
中国科学院微生物研究所
出处
《植物病理学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994年第4期343-346,共4页
基金
国家自然科学基金
文摘
从国内12省、自治区、直辖市玉米植株上分离出腐霉菌菌株,依据形态特征、培养性状、生长抑制温度,以及产生的有性与无性器官,鉴别出6个腐霉种:棘腐霉(Pythium acanthicum Drechsler),瓜果腐霉(P.aphanidermatum(Edson)Fitzpatrick),强雄腐霉(P. arrhenomanes Drechsler),禾生腐霉(P.graminicola Subramaniam),肿囊腐霉(P.inflatum Matthews),寡雄腐霉(P.oligandrum Drechsler),其中肿囊腐霉出现频率高,分布广泛。回接玉米表明,腐霉能够侵染玉米并引起病害,肿囊腐霉、禾生腐霉、强雄腐霉、棘腐霉是玉米青枯病的重要致病菌;瓜果腐霉能够引起玉米中部茎节腐烂;寡雄腐霉虽寄生玉米,但对玉米成株无致病力。
关键词
玉米
青枯病
棘
腐
霉
瓜果
腐
霉
强雄腐霉
致病性
Keywords
Maize stalk rot Pythium acanthicum P. aphanidermatum P. arrheno-manes P. graminicola P. inflatum P. oligandrum
分类号
S435.131.4 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于环介导等温扩增技术检测由强雄腐霉引起的玉米茎腐病
赵媛媛
沈丹宇
于佳
徐衡
窦道龙
《植物保护学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
15
原文传递
2
寄生玉米的6种腐霉及其致病性研究
王晓鸣
吴全安
刘晓娟
马国忠
《植物病理学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994
35
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