归芪聪志汤对血管性痴呆大鼠海马缺氧诱导因子-1α、血管内皮生长因子和血红素加氧酶-1表达的影响

目的研究归芪聪志汤对血管性痴呆(VD)大鼠海马缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)及血红素加氧酶(HO-1)表达的影响。方法采用改良后的双侧颈动脉永久性结扎法制备VD大鼠模型,将80只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、阳性对照组、归芪聪志汤高、中、低剂量组。连续灌胃4 w后采用Morris水迷宫进行行为学检测,同时通过HE染色观察海马神经元的形态改变,采用免疫组织化学法测定各组海马组织HIF-1α、VEGF及HO-1蛋白的表达水平,采用荧光定量PCR技术检测大鼠海马HIF-1α、VEGF及HO-1 mRNA表达的变化。结果经过治疗后,与假手术组比较,模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长、跨原平台次数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05),大鼠海马HIF-1α、VEGF及HO-1蛋白及mRNA表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),HE染色显示大鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,归芪聪志汤中剂量组与阳性对照组大鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),大鼠海马HIF-1α、VEGF及HO-1蛋白及mRNA表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),HE染色显示大鼠海马神经细胞损伤减轻。结论归芪聪志汤能明显改善VD模型大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与上调HIF-1α、VEGF及HO-1的表达,减轻氧化应激损伤,激发脑内的损伤修复有关。

归芪聪志汤对VD大鼠模型脑组织热休克蛋白表达的影响

目的:考察归芪聪志汤对VD模型大鼠的作用及其机制。方法:采用"反复夹闭颈动脉加注射硝普钠降压再加单侧永久结扎颈总动脉法"制备VD大鼠模型,并予归芪聪志汤干预,从行为学、组织病理学、热休克蛋白(HSP)分子水平三个方面考察归芪聪志汤对VD的影响。结果:与假手术组比较,模型组大鼠定位航行潜伏期延长,空间搜索穿越平台次数减少;海马组织细胞数量较少、细胞轮廓模糊皱缩、胞浆深染、核不清晰;HSP27、HSP70mRNA及蛋白相对表达量显著升高。归芪聪志汤中、高剂量能显著改善上述指标,中剂量归芪聪志汤疗效优于脑复康。结论:归芪聪志汤能保护VD大鼠脑组织,改善其病理损伤和记忆功能,其作用机制可能与调节热休克蛋白的表达有关。

归芪聪志汤对血管性痴呆大鼠模型脑组织氧化应激损伤的影响

目的观察归芪聪志汤对血管性痴呆(VD)大鼠模型脑组织氧化应激损伤的作用。方法采用反复夹闭颈动脉加注射硝普钠降压再加单侧永久结扎颈总动脉法制备VD模型,从行为学、组织病理、氧化应激酶学三个方面观察归芪聪志汤对VD的影响。结果对比假手术组,模型组大鼠定位航行潜伏期明显延长,空间搜索穿越平台次数明显减少(P<0.05),海马病理切片显示:细胞数量明显较少、细胞轮廓模糊皱缩、胞质深染、核不清晰,丙二醛(MDA)含量增加,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性均明显降低;归芪聪志汤中剂量组中、高剂量组上述指标明显改变,尤以中剂量组效应最明显。对比模型组,中剂量归芪聪志汤组大鼠定位航行潜伏期明显变短,空间搜索穿越平台次数明显增多,海马病理切片显示细胞损伤减轻,MDA含量明显降低,SOD和GSH-Px活性明显升高;中剂量归芪聪志汤疗效类似于甚至优于西药脑复康。结论中剂量归芪聪志汤通过抗氧化应激作用保护VD大鼠脑组织,改善其病理损伤和记忆功能。

归芪聪志汤对血管性痴呆模型大鼠行为学和海马组织基因表达谱的影响

目的研究归芪聪志汤对血管性痴呆(Vasculardementia,VD)大鼠模型海马基因表达谱的影响及部分筛选基因表达的影响。方法从120只SPF级Wistar雌性大鼠中随机选取10只作为假手术组,其余均采用改良后的两血管阻断法改良法制备血管性痴呆大鼠模型,经水迷宫筛选出合格造模大鼠35只,随机区组分为假手术组,模型组,阳性对照组,归芪聪志汤高、中、低剂量组。归芪聪志汤连续灌胃4周后处死大鼠取材海马组织。Morris水迷宫检测造模后及治疗后行为学变化。全基因组表达谱芯片检测归芪聪志汤中剂量组与模型组海马组织之间差异表达的基因;RT-qPCR检测紧密连接蛋白-1,2,3,14,22(claudin-1,claudin-2,claudin-3,claudin-14,claudin-22),细胞黏附分子(ICAM),血管紧张素转化酶(ACE)的mRNA表达量。结果Morris水迷宫检测显示:模型鼠逃避潜伏期明显延长,跨原平台次数明显减少(P<0.01)。治疗28d后模型组逃避潜伏期明显延长,跨原平台次数明显减少(P<0.05);与模型组相比,各治疗组大鼠逃逸潜伏期均缩短,跨原平台次数均增多(P<0.01),其中归芪聪志汤中剂量组、阳性药物对照组大鼠学习记忆能力改善情况优于归芪聪志汤高、低剂量组(P<0.05)。基因芯片和RT-qPCR检测结果显示:与假手术组比较,模型组claudin-1,claudin-2,claudin-3,claudin-22,ICAM,ACE基因表达量均升高(P<0.05,P<0.01),claudin-14、CDH3基因表达量均下降(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各治疗组claudin-1,claudin-2,claudin-3,claudin-22,ICAM,ACE基因表达量均下降,claudin-14,CDH3基因表达量均升高,其中,归芪聪志汤中剂量组、阳性药物对照组优于归芪聪志汤高、低剂量组(P<0.05)。结论归芪聪志汤能下调VD模型大鼠海马组织claudin-1,claudin-2,claudin-3,claudin-22,ICAM,ACE的表达,并升高claudin-14,CDH3的表达,从而发挥抗VD作用。

归芪聪志汤及其拆方对VD模型大鼠海马神经元HIF-1α,VEGF和HO-1表达的影响

目的：研究归芪聪志汤及其拆方对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠海马组织缺氧诱导因子（-1）α（HIF-1α）,血管内皮生长因子（VEGF）,及血红素加氧酶（-1）（HO（-1））表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法：Wistar大鼠称体质量后,按随机原则选出10只作为假手术组,将其余90只大鼠采用改良后的双侧颈动脉永久性结扎法制备VD大鼠模型,造模后,筛选成功模型大鼠54只随机分为6组,分别为模型组,阳性药组（吡拉西坦,3.6 g·kg（-1））,归芪聪志汤组（9.9 g·kg（-1））,活血通络组（拆方1组,9.9 g·kg（-1））,化痰解毒组（拆方2组,9.9 g·kg（-1））,补气养血组（拆方2组,9.9 g·kg（-1））,每组9只。连续灌胃28 d后,Morris水迷宫予以行为学检测,苏木素-伊红（HE）染色观察海马神经元的形态改变,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测大鼠海马HIF-1α,VEGF及HO（-1） mRNA和蛋白的表达。结果：治疗4周后,与假手术组比较,VD模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长、跨原平台次数明显减少（P〈0.05）,大鼠海马的HIF-1α,VEGF,HO（-1） mRNA及蛋白表达水平明显升高（P〈0.05）,HE染色显示VD模型大鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,归芪聪志汤组与吡拉西坦组大鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加（P〈0.05）,大鼠海马的HIF-1α,VEGF,HO（-1） mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P〈0.05）,HE染色显示归芪聪志汤与吡拉西坦组大鼠海马神经细胞损伤减轻。结论：归芪聪志汤组改善VD模型大鼠的学习记忆能力优于各拆方组,其作用机制可能与上调HIF-1α,VEGF及HO（-1）因子的表达,减轻氧化应激损伤,激发脑内的损伤修复有关。

归芪聪志汤对VD模型大鼠海马神经元Claudin-1,TGF-β表达的影响

目的：研究归芪聪志汤对血管性痴呆（varscular dementia,VD）模型大鼠学习记忆和海马神经元紧密连接蛋白1（Claudin-1）和转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）表达的影响。方法：Wistar雄性大鼠120只,按随机数字表选10只大鼠作为假手术组,其余大鼠制备VD模型,选成功模型大鼠随机分为5组,分别为模型组、阳性组和归芪聪志汤低、中、高剂量组。归芪聪志汤低、中、高剂量组给药量分别为9.9,19.8,39.6 g·kg-1·d-1。阳性组给予脑复康吡拉西坦胶囊0.3 g·kg-1·d-1。假手术组、模型组给予等量水。每日1次。连续灌胃治疗28 d后,Morris水迷宫予以行为学检测,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）,免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）与蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组海马组织Claudin-1,TGF-β基因和蛋白表达。结果：灌胃治疗28 d后,与假手术组比较,VD模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长、跨原平台次数明显减少（P〈0.01）,大鼠海马的Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（P〈0.05）,大鼠海马的TGF-βmRNA及蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）;与模型组比较,各治疗组大鼠逃逸潜伏期均缩短,跨原平台次数均增多（P〈0.01）,大鼠海马的Claudin-1 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）,大鼠海马的TGF-βmRNA及蛋白表达水平明显升高（P〈0.05）,归芪聪志汤中剂量组与脑复康吡拉西坦胶囊组优于其他组（P〈0.05）。结论：归芪聪志汤能够显著改善VD大鼠的学习记忆能力,可能与调节脑组织细胞间黏附作用、抑制炎性因子表达等有关。

归芪聪志汤对血管性痴呆模型大鼠大脑皮层线粒体功能的影响

目的研究归芪聪志汤对血管性痴呆(VD)模型大鼠大脑皮层线粒体功能的影响。方法将120只大鼠称重,进行水迷宫测试,剔除不合格大鼠10只,使用区组随机法选出10只大鼠作为假手术组,其余大鼠采用两血管阻断改良法制备VD大鼠模型,经Morris水迷宫筛选出造模成功的大鼠,随机分为模型组,阳性药物对照组,归芪聪志汤高、中、低剂量组。各组给予相应的药物或蒸馏水灌胃4周后,HE染色观察海马神经细胞的损伤情况,采用比色法检测大鼠海马组织及大脑皮层其他部位线粒体复合物的活性及三磷酸腺苷(ATP)的含量。结果与假手术组比较,模型组海马神经细胞损伤程度严重;与模型组比较,各治疗组海马神经细胞损伤程度均减轻,其中归芪聪志汤中剂量组海马神经细胞损伤程度改善最为明显。与假手术组比较,模型组海马组织及大脑皮层其他部位线粒体复合物Ⅰ~Ⅴ的活性及ATP含量均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性药物对照组与归芪聪志汤中剂量组大鼠海马组织线粒体复合物Ⅰ~Ⅴ的活性及ATP含量明显升高,除归芪聪志汤中剂量组的线粒体复合物Ⅰ与模型组比较差异无统计意义外,其他均有统计意义(P<0.05);阳性药物对照组与归芪聪志汤中剂量组大鼠大脑皮层其他部位线粒体复合物Ⅰ~Ⅴ的活性均升高,其中线粒体复合物Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ差异有统计意义(P<0.05),ATP含量均降低,但差异无统计意义(P>0.05)。与阳性药物对照组比较,归芪聪志汤中剂量组大鼠海马组织线粒体复合物Ⅴ的活性明显升高(P<0.05);归芪聪志汤中剂量组大脑皮层其他部位线粒体复合物Ⅰ活性明显升高,线粒体复合物Ⅴ活性明显降低,差异均有统计意义(P<0.05)。结论归芪聪志汤能明显改善VD模型大鼠海马组织病变,其作用机制与改善海马组织和大脑皮层其他部位线粒体复合物Ⅰ~Ⅴ的活性及ATP含量有关。