当归补血汤超滤物抗H_2O_2致人脐静脉内皮细胞(ECV-304)氧化损伤的影响

目的研究当归补血汤超滤物对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilieal vein endothelial cells,HUVECs)ECV-304氧化损伤的影响,并初步探讨其作用机制。方法通过酶消化法对离体的人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞进行消化传代,建立过氧化氢(peroxide hydrogen,H2O2)诱导的ECV-304细胞氧化损伤模型。采用超滤技术对当归红芪合剂进行分离与纯化,以不同分子量(2万以下、5万以下、10万以下)且浓度均为15.0 g/L的当归红芪超滤膜提取物作用于氧化损伤的ECV-304细胞,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力,硫代巴比妥酸(TBA)法检测细胞内丙二醛(malondialdeyde,MDA)活力,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞内AT1 mRNA的表达。结果经0.5mmol/L H2O2刺激后细胞活性明显降低,SOD活力明显降低,MDA活力明显提高,G0/G1期细胞的数目明显增加,S期细胞的数目明显减少,AT1 mRNA表达增加(P﹤0.05);与H2O2组相比,当归红芪超滤膜提取物可以增强H2O2诱导ECV-304细胞氧化损伤的细胞活性,增加细胞的存活率且以作用72 h为佳,提高氧化损伤的ECV-304细胞的SOD活力,降低氧化损伤的ECV-304细胞的MDA活力,促进氧化损伤的ECV-304细胞向S期转变,减少细胞内AT1 mRNA表达(P﹤0.01,P﹤0.05)。结论当归补血汤超滤物对氧化损伤ECV-304细胞的保护作用可能与其提高了抗氧化酶活性,降低了脂质过氧化物活性,促进了内皮细胞DNA合成复制及减少了细胞内AT1 mRNA的表达有关。

当归补血汤超滤物对大鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的探讨当归补血汤超滤膜提取物对大鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响。方法原代培养Wistar大鼠乳鼠心肌细胞,阿霉素诱导心肌细胞凋亡。实验分正常组、阿霉素组(2.5 mg/L)、当归补血汤超滤膜提取物低、中、高剂量干预组(阿霉素造模前,预先给予含30,60,120 mg/L当归补血汤超滤膜提取物完全培养基培养2 h)。MTT法检测各组细胞存活率,荧光显微镜下各组细胞凋亡形态学观察,激光共聚焦技术测定各组心肌细胞线粒体膜电位水平,蛋白印迹法测定各组Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达水平。结果与正常组相比,阿霉素组心肌细胞存活数明显降低,可见细胞凋亡及线粒体膜电位降低;Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax、Caspase-3表达水平升高(P<0.05);与阿霉素组比较,当归补血汤超滤膜提取物干预组的心肌细胞存活数明显升高,凋亡细胞数目减少,线粒体膜电位升高,Bax、Caspase-3表达水平下调,Bcl-2蛋白表达水平上调(P<0.05)。结论线粒体凋亡通路的激活是阿霉素诱导心肌细胞凋亡的机制之一,当归补血汤超滤膜提取物可调控该通路发挥心肌细胞保护作用。

当归补血汤超滤物延缓大鼠心脏衰老作用及机理研究

目的探讨当归补血汤超滤物延缓大鼠心脏衰老的作用及其机理,并比较不同分子量范围超滤物的作用效果。方法健康Wistar青年雄性大鼠12只作为青年组,将72只Wistar老年雄性大鼠随机分为6组,每组12只,分别为衰老对照组、当归补血汤超滤膜提取物（0-5万,0-10万,0-20万分子量）组、当归补血汤水煎剂组、维生素E组,给药组连续灌胃10周后,利用酶联免疫吸附法检测各组心肌组织中LPF含量水平;光镜下观察心脏病理改变;电镜下观察心肌超微结构;PCR法检测心肌组织mtDNA缺失。结果与衰老对照组相比,当归补血汤超滤膜提取物0-5万、0-10万、0-20万分子量组、当归补血汤水煎剂、维生素E组的心肌组织中LPF含量水平不同程度降低（P〈0.05）;心肌组织中mtDNA缺失水平不同程度降低（P〈0.05）;在组织形态学方面观察到了心肌横纹结构及线粒体形态的差异;各用药组间比较,0-10万分子量组效果最为显著。结论当归补血汤超滤物具有延缓大鼠心脏衰老的作用,其发挥作用的最佳有效组分在0-10万分子量,其通过减少心肌组织中mtDNA缺失,维持细胞内线粒体正常功能发挥抗衰老作用。