当归贝母苦参丸加味方对荷瘤小鼠H22肝癌肿瘤组织MMP13和bFGF表达的影响

目的研究当归贝母苦参丸加味方对H22荷瘤小鼠瘤组织基质金属蛋白酶13(MMP13)和成纤维细胞生长因子2(bFGF)表达的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,将60只荷瘤小鼠随机分为模型组,顺铂阳性对照组,当归贝母苦参丸加味方高、低剂量组,当归贝母苦参丸加味方高、低剂量联合顺铂组,连续灌胃给药14d,观察肿瘤生长情况以及小鼠一般情况,肿瘤大体标本及HE染色后组织形态观察;RT-qPCR和免疫组织化学技术分别检测肿瘤组织中MMP13和bFGF的表达。结果大体观察剥离的肿瘤瘤体发现,模型组与中药低剂量组瘤体较大,瘤体内有溃烂,包膜基本完整;各治疗组瘤体较模型组相比较小,但包膜不完整,有不同程度溃烂,剥离易出血,当归贝母苦参丸加味方高、低剂量联合顺铂组瘤体小,包膜完整,肿瘤溃烂较少;HE染色病理形态观察发现,各治疗组结缔组织明显,细胞稀疏程度增加,坏死癌细胞数目增加。RT-qPCR检测显示,与模型组相比,各用药组中MMP13和bFGF mRNA的表达量均降低,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化检测显示,MMP13和bFGF在当归贝母苦参丸加味方高、低剂量联合顺铂组中蛋白着色变浅,呈弱阳性表达,当归贝母苦参丸加味方高、低剂量联合顺铂组较单独用药蛋白表达量低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论当归贝母苦参丸加味方可以在mRNA和蛋白水平下调荷瘤小鼠肿瘤组织中MMP13和bFGF的表达,进而抑制肿瘤侵袭和血管生成,发挥抑瘤减毒增效目的。

基于网络药理学和药效实验探究当归贝母苦参丸加味治疗慢性前列腺炎作用机理

目的:基于网络药理学及分子对接技术加以药效实验探究当归贝母苦参丸加味治疗慢性前列腺炎(CP)的作用机制。方法:通过中药系统药理分析平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)和文献挖掘获得当归贝母苦参丸加味活性成分;运用SwissTargetPrediction数据库进行活性成分靶点预测,同时对TCMSP数据库成分已有靶点加以补充;运用在线孟德尔人类遗传数据库(OMIM)、GeneCards数据库、美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库收集CP相关靶点;运用Cytoscape软件构建中药-活性成分-靶点-通路网络图;运用STRING数据库进行生信分析,构建靶点蛋白-靶点蛋白互作(PPI)网络图,运用CytoNCA筛选核心靶点,并用Cytoscape进行可视化网络展示;运用DAVID数据库对核心靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;Autodock-Tools、Vina对当归贝母苦参丸加味活性成分和关键靶点蛋白进行分子对接;通过Western Blot法验证活性成分与关键靶蛋白的相互作用。结果:筛选出当归贝母苦参丸加味活性成分67个,包括槲皮素、β-谷甾醇、天竺葵素、等重要成分,对应靶点411个,疾病靶点806个,药物与疾病的共有靶点155个;筛选出的核心靶点包括核转录因子κB(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、MAPK14、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)等39个关键蛋白;GO富集分析得到凋亡过程的负调控、一氧化氮生物合成过程的正调控、MAP激酶活性的正调控、MAPK级联、核内NF-κB输入等369个生物过程,胞浆、细胞质、线粒体、蛋白质复合物等30个细胞组分,蛋白质结合、酶结合、一氧化氮合酶调节活性、MAP激酶活性、NF-κB结合等57个分子功能;KEGG富集分析得到TNF信号通路、PI3K-AKT信号通路、MAPK信号通路、雌激素信号通路、P53信号通路、NF-κB信号通路、等93条;分子对接显示β-谷甾醇与丝裂原活化蛋白激酶P38(P38MAPK)蛋白结合能最高,而应激活化蛋白激酶(JNK)蛋白、NF-κB蛋白与其他分子均有较高的结合能;动物实验结果表明,与正常对照组比较,模型对照组大鼠体质量与前列腺湿质量显著下降,病理状况显著异常,卵磷脂小体视野面积占比显著下降,白细胞个数明显升高,血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著升高,p-P38MAPK、p-JNK、p-NF-κB、P38MAPK、JNK蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,当归贝母苦参丸加味8.1、16.2 g/kg组大鼠体质量以及前列腺湿质量明显升高(P<0.05或P<0.01),当归贝母苦参丸加味16.2 g/kg组病理状况显著改善(P<0.01),白细胞个数显著降低(P<0.01),卵磷脂小体视野面积占比显著升高(P<0.01),当归贝母苦参丸加味8.1、16.2 g/kg组血清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.01),前列腺组织p-P38MAPK、p-JNK、p-NF-κB蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:当归贝母苦参丸加味可能通过调控MAPK信号通路、NF-κB信号通路相关蛋白的表达从而抑制炎性因子释放,进而改善大鼠前列腺炎症水平。

加味当归贝母苦参丸对MFC胃癌荷瘤小鼠瘤组织Toll样受体通路分子的影响

目的观察加味当归贝母苦参丸对MFC胃癌荷瘤小鼠瘤组织Toll样受体(TLR2、TLR4、TLR6)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和髓分化因子88(My D88)表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验。将筛选合格的48只MFC胃癌荷瘤小鼠随机分为模型组,阳性对照组(顺铂组),加味当归贝母苦参丸高剂量组(当高组)、低剂量组(当低组)和顺铂联合加味当归贝母苦参丸高剂量组(顺高组)、低剂量组(顺低组),各给药组给予相应药物灌胃,连续14 d,观察肿瘤生长情况及小鼠一般情况、肿瘤大体标本及HE染色后组织形态;RT-q PCR和免疫组化分别检测肿瘤组织TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88的表达。结果模型组肿瘤细胞丰富,细胞大小不一、体积大、核大深染、异型明显,可见小灶性坏死,间质血管丰富;各给药组肿瘤细胞数量减少、排列疏松、细胞体积明显缩小、核固缩,细胞坏死明显增加,间质血管数量减少,胶原纤维增多,其中以顺低组、顺高组较为明显。与模型组比较,各给药组TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88 m RNA和蛋白表达均降低,顺低组、顺高组TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88蛋白着色变浅,呈弱阳性表达,较顺铂组、当高组、当低组蛋白改变更加明显。结论加味当归贝母苦参丸可能通过下调荷瘤小鼠肿瘤组织TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88 m RNA和蛋白的表达,发挥抗肿瘤作用。

加味当归贝母苦参丸辅助经肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌临床研究

目的观察加味当归贝母苦参丸辅助经肝动脉化疗栓塞术治疗原发性肝癌的临床疗效。方法将原发性肝癌患者84例随机分为联合治疗组和常规对照组各42例。常规对照组采用经肝动脉化疗栓塞术治疗,联合治疗组在此基础上给予加味当归贝母苦参丸汤剂辨证加减。比较2组患者肿瘤体积、生活质量评分、中医证候积分、免疫功能指标及不良反应。结果 2组各有37例患者完成临床观察。3个疗程结束时,肿瘤客观反应率联合治疗组为91.9%,常规对照组为86.4%。2组患者治疗后临床症状(发热、呕吐、腹痛、乏力)均显著改善(P<0.05),联合治疗组优于常规对照组(P<0.05)。联合治疗组治疗后卡氏评分升高(P<0.05),高于常规对照组(P<0.05)。联合治疗组治疗后Th1功能水平升高(P<0.05),高于常规对照组(P<0.05)。联合治疗组肝功能和消化道不良反应低于常规对照组(P<0.05)。结论加味当归贝母苦参丸对化疗栓塞治疗原发性肝癌具有增效作用,并且能够减少不良反应,提高患者的生存质量。

加味当归贝母苦参丸对胃癌荷瘤鼠肿瘤组织VEGFA、MMP13和TGF-β表达的影响

目的:研究当归贝母苦参丸加味方对MFC胃癌荷瘤小鼠瘤组织VEGFA、MMP13和TGF-β表达的影响。方法:建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验,将筛选合格的48只MFC胃癌荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂阳性对照组、加味当归贝母苦参丸高、低剂量组、顺铂联合加味当归贝母苦参丸高、低剂量组,连续灌胃给药14 d,治疗结束后,处死大鼠,RT-q PCR和免疫组织化学技术分别检测肿瘤组织中VEGFA、MMP13和TGF-β的表达。结果:与模型组相比,各用药组中VEGFA、MMP13和TGF-βmRNA和蛋白的表达量均降低;VEGFA、MMP13和TGF-β在联合组中蛋白着色变浅,呈弱阳性表达,联合用药组较顺铂组、当高、低组蛋白表达量降低。结论:当归贝母苦参丸加味方可以下调荷瘤小鼠肿瘤组织VEGFA、MMP13和TGF-β的表达,进而发挥抗肿瘤作用。

加味当归贝母苦参丸对慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织炎症及脊髓氧化应激的影响

目的:探讨加味当归贝母苦参丸对慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠前列腺组织炎症及脊髓氧化应激的影响。方法:取2月龄雄性SD大鼠60只,随机选取10只作为正常对照组,另50只采用前列腺腹叶注射完全弗氏佐剂法制作CNP模。将成模大鼠随机分为加味当归贝母苦参丸低(3 g/kg)、中(6 g/kg)、高剂量组(12 g/kg),前列倍喜组(1.6 g/kg),模型组,各组均灌胃给药,1次/天,连续药物干预4周。取各组大鼠前列腺组织,光镜下观察各组大鼠前列腺组织形态学变化,酶联免疫吸附法检测脊髓组织及神经节8-epi PGF2a(8-异前列腺素)物质水平,采用黄嘌呤氧化酶法测定T-SOD(总超氧化物歧化酶)活力。结果:①前列腺病理学观察:模型组前列腺组织炎症明显,前列腺上皮细胞细胞核明显增大,形状不规则,排列紊乱,间质炎细胞浸润明显,水肿;加味当归贝母苦参丸及前列贝喜胶囊组的病理损伤均有不同程度的减轻。②脊髓氧化应激:与正常对照组相比,模型组及低剂量组8-epi PGF2a水平明显增高,T-SOD活力降低;差异有统计学意义(P<0.01);加味当归贝母苦参丸中、高剂量及前列腺倍喜胶囊组8-epi PGF2a水平明显低于模型组,T-SOD活力高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:加味当归贝母苦参丸能减轻前列腺组织的病理损伤,改善模型大鼠脊髓氧化应激,这可能是加味当归贝母苦参丸改善前列腺炎患者症状的分子机制之一。

加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤及T细胞免疫调节作用

目的:探讨加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤及T细胞免疫调节作用,为加味当归贝母苦参丸联合免疫检查点抗体治疗肝癌提供依据。方法:建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组、加味当归贝母苦参丸低、中、高剂量组(4、8、16 g·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药14 d,第15天处死小鼠。给药第0、4、8、12、15天测量肿瘤体积;称取瘤重、计算胸腺指数和脾指数;将脾脏淋巴细胞与H22肝癌细胞共培养,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测肿瘤细胞增殖抑制率;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测脾脏和肿瘤组织中程序性细胞死亡蛋白-1(PD-1)、淋巴细胞活化基因-3(LAG-3)mRNA的表达情况;免疫组织化学法(IHC)检测脾脏和肿瘤组织中CD4^(+)、CD8^(+)T细胞数量及PD-1、LAG-3蛋白的表达情况。结果:给药后第8天,各给药组肿瘤体积较模型组均有不同程度下降,第15天肿瘤体积和瘤重均较模型组显著降低(P<0.01),其中顺铂组下降最为明显。与模型组、顺铂组比较,加味当归贝母苦参丸中、高剂量组胸腺指数显著升高(P<0.01);与模型组比较,各用药组脾脏指数均明显升高(P<0.05,P<0.01),其中顺铂组升高最为显著;与模型组、顺铂组比较,加味当归贝母苦参丸各组脾脏、肿瘤组织中CD4^(+)、CD8^(+)T细胞数量和肿瘤细胞杀伤率均显著增高(P<0.01),LAG-3 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05,P<0.01);加味当归贝母苦参丸高剂量组肿瘤组织中PD-1 mRNA表达较模型组、顺铂组显著降低(P<0.01)。结论:加味当归贝母苦参丸可能通过下调LAG-3表达,促进H22肝癌荷瘤小鼠CD4^(+)、CD8^(+)T细胞的增殖并向肿瘤微环境浸润,从而改善T细胞免疫活性、抑制肿瘤生长,为加味当归贝母苦参丸与免疫检查点抗体联用治疗肝癌提供实验依据。

加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2,IL-4,IFN-γ表达的影响

目的研究加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠血清白细胞介素(IL)-2、IL-4、γ-干扰素(IFN-γ)表达的影响。方法于昆明小鼠腋下注射接种H22肝癌细胞复制H22肝癌荷瘤小鼠模型,造模后将60只小鼠随机分为模型组、顺铂阳性对照组、加味当归贝母苦参丸高剂量组、加味当归贝母苦参丸低剂量组、加味当归贝母苦参丸高剂量联合顺铂组、加味当归贝母苦参丸低剂量联合顺铂组6组,每组10只。造模后第2天开始各组给予对应药物进行干预,连续治疗14 d后,摘除眼球取血并分离血清,采用ELISA法检测血清中IL-2,IL-4,IFN-γ的含量。结果与模型组及顺铂阳性对照组比较,其他各治疗组IL-4含量明显降低,IL-2,IFN-γ含量明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组与顺铂阳性对照组各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05);加味当归贝母苦参丸高、低剂量联合顺铂对各项指标的作用明显优于单纯加味当归贝母苦参丸高、低剂量,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论加味当归贝母苦参丸可通过影响I L-2,IL-4,IFN-γ的表达调整机体免疫功能,从而起到抑瘤的作用。