基于网络药理学及分子对接技术探讨川芎-当归-白芍治疗干燥综合征的作用机制

目的采用网络药理学及分子对接技术探究当归、川芎与白芍治疗干燥综合征的药理作用机制。方法从中药系统药理分析平台(TCMSP)数据库提取3味中药的主要活性成分及靶点;从OMIM和GeneCards数据库搜索疾病靶点,数据筛选整理后,利用Venny工具获得药物与疾病的共同靶点基因;利用STRING网站进行蛋白互作分析,通过Cytoscape3.7.2软件获取核心靶点;选取大于平均节点值的关键靶点,利用Cytoscape软件构建药物-活性成分-疾病-靶点图,获取关键活性成分;利用BioGPS数据库获取交集靶点组织定位结果并通过Cytoscape3.7.2软件进行可视化处理;采用DAVID平台进行GO功能和KEGG通路富集分析;取前十名通路与药物-疾病-活性成分-靶点图建立网络与属性文件,构建药物-疾病-活性成分-靶点-通路图并可视化;在SailVina软件上对关键活性成分和核心靶点进行分子对接。结果共获得药物活性成分14个,关键成分为β-谷甾醇、山柰酚、芍药苷、杨梅酮和儿茶素,药物与疾病交集靶点41个;靶点组织器官定位在肝、脾、肾、肺、唾液腺等,且在T细胞、B细胞等中也有显示;核心靶点为AKT1、IL6、CASP3、PPARG和JUN;KEGG通路富集分析发现其主要涉及AGE-RAGE、IL-17、TNF等通路;药物-疾病-活性成分-靶点-通路图显示,川芎-当归-白芍具有多成分、多靶点、多通路治疗干燥综合征的潜质;分子对接表明关键活性成分与核心靶点均可自发结合,杨梅酮、β-谷甾醇等与关键靶点PPARG、CASP3、AKT1等具有良好结合力。结论川芎-当归-白芍可能通过关键活性成分,作用于关键靶标,发挥对多个信号通路的调节作用,进而在炎症反应及免疫应答等方面对干燥综合征的治疗产生积极作用。

基于网络药理学分析当归-白芍药对治疗腰椎间盘退变的潜在靶点及机制

目的探讨当归-白芍药对治疗腰椎间盘退变的作用靶点及机制方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索、筛选当归-白芍的活性成分和作用靶点。在OMIM、Disgenet、Genecards数据库检索腰椎间盘退变的相关基因,通过R软件与当归-白芍的作用靶点相交叠,筛选当归-白芍治疗腰椎间盘退变的关键靶点。分别利用Cytoscape软件、STRING数据库构建药物-成分-靶点-疾病网络和关键靶点蛋白相互作用网络最后利用R软件进行关键靶点基因GO功能富集分析与KEEG通路富集分析结果共筛选出当归-白芍药对的14个活性成分及对应的342个关键靶点,共筛选出1110个腰椎间盘退变疾病靶点,获得药物-疾病共同靶点69个。建立的靶点蛋白相互作用网络包含69个节点、643条边,其中的关键免点蛋白AKT1、EGFR、VEGFA、CASP3、CXCL8、MAPK8、CCND1、JUN、FGF2、MAPK14 GO功能富集分析与KEGG通路富集分析显示,当归-白芍治疗腰椎间退变关键靶点基因的生物学过程和功能主要集中在内肽酶活力、金属内肽酶活性、1-磷脂酰肌醇-3-激酶活性、磷脂酰肌醇3-激酶活性、磷脂酰肌醇磷酸激酶活性、金属肽酶活性等。相关的信号通路主要包括TNF信号通路、IL-17信号通路、HIF-1信号通路、雌激素信号通路等结论当归-白芍药对通过多途径、多把点发挥治疗腰椎间盘退变的作用。

基于生物信息学探究“养血活血安胎”法指导下当归-白芍调节PI3K/AKT改善复发性流产母胎界面血管生成的机制

目的基于生物信息学结合动物实验探究“养血活血安胎”法指导下当归-白芍通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine kinase,AKT)改善复发性流产(RSA)母胎界面血管生成的作用机制。方法基于基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)获取RSA相关基因芯片,并通过R软件limma包进行差异表达分析。通过人类基因数据库(GeneCards)得到血管生成相关基因,并通过Venn在线制图工具将其与得到的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)取交集。应用基因富集分析在线工具进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路分析。建立正常妊娠小鼠模型和Clark经典RSA模型,将正常妊娠小鼠模型作为正常对照组(n=10),将RSA小鼠随机分为模型组、黄体酮组、高剂量、中剂量和低剂量当归-白芍水煎剂组,并于妊娠第1天开始给予相应药物灌胃,每日1次,共给药15 d;正常对照组给予等体积等频次生理盐水灌胃,于末次给药后12 h处死小鼠并取材。采用免疫组织化学法测定各组小鼠蜕膜组织中内皮抑素(endostain,ES)和微血管密度(micro vessel density,MVD)标记物白细胞分化抗原34(cluster of differentiation,CD34)的阳性表达,免疫印迹(Western blotting)法检测蜕膜组织中PI3K、AKT、ES和CD34的水平。结果芯片GSE113790被纳入本研究,从中共获得704个RSA相关的差异表达基因。此外,通过Genecards数据库共获得1258个血管生成相关基因。两者交集共有65个基因,此即为RSA血管生成异常相关DEGs。富集分析结果显示65个DEGs共参与45个信号通路的调控(P<0.05),其中PI3K/AKT富集最为显著。免疫组化结果表明,与对照组相比,模型组ES水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,当归-白芍中剂量、高剂量组CD34水平显著升高,ES水平显著下降(P<0.05)。Western blotting结果表明,模型组ES水平显著升高,CD34、PI3K、pAKT/AKT水平显著下降(P<0.05),而黄体酮组及当归-白芍各剂量组ES水平均显著下降,pAKT/AKT水平显著上升;黄体酮组CD34水平显著上升;黄体酮组及当归-白芍高剂量组PI3K水平显著上升。结论RSA母胎界面存在血管生成障碍,在“养血活血安胎”法指导下,当归-白芍药对可促进RSA小鼠母胎界面血管生成,并与激活PI3K/AKT通路相关。

当归及其药对当归——白芍中阿魏酸的HPLC-DAD定量分析

分析当归及其药对当归—白芍中阿魏酸的含量。采用HPLC-DAD法测定阿魏酸的含量,色谱柱为C18ODS(250 mm×4.6 mm, 5μm);柱温为(35±1)℃;流动相为乙腈—0.085%磷酸溶液;流速为0.9 mL/min;检测波长为322nm;等度洗脱。实验结果表明,当归及其药对当归—白芍检测液中阿魏酸的平均含量分别为25.015、20.975μg/mL,药对中阿魏酸含量下降了16.15%。该方法简便快速,精密度高,重复性好,其结果准确可靠,适用于当归及其药对资源的质量控制。

白芍常用药对配伍探析

白芍,始载于《神农本草经》,具有悠久的应用历史,其性味功效明确,临床应用广泛。白芍中化学成分丰富,含有单萜及其苷类、三萜及其苷类、黄酮类、鞣质类以及多糖类化合物,具有抗炎、抗抑郁、镇痛、促进造血功能、调节免疫等药理作用。白芍配伍桂枝可调和阴阳,对心血管系统疾病的防治起到重要作用;配伍柴胡可增强疏肝解郁之力,对治疗神经系统疾病效果显著;配伍当归可活血止痛,对痛经治疗效果明显;配伍甘草可缓急止痛,可用于治疗各个系统的痛症;配伍白术可健脾止泻,对治疗溃疡性结肠炎作用明显;配伍枳实可行气消胀,对胃肠功能具有双向调节作用。配伍后的药对功效比单味药疗效更强,临床应用范围更加广泛,对于指导临床用药思路及处方具有重要意义。

当归补血药对对血虚便秘模型大鼠的治疗作用

目的:观察当归补血药对对血虚便秘模型大鼠的治疗作用。方法:用乙酰苯肼、环磷酰胺和洛哌丁胺联合复制血虚便秘大鼠模型,观察当归补血药对(当归-黄芪、当归-白芍、当归-熟地黄)对血虚便秘大鼠体征、体重、外周血象、排便情况、肠道传输时间和结肠组织形态的影响,研究当归补血药对的补血润肠作用;ELISA法测定大鼠血清胆囊收缩素(CCK-8)、β-内啡肽(β-EP)、胃动素(MOT)和生长抑素(SS)的含量变化,研究当归补血药对对血虚便秘模型大鼠胃肠激素的影响;从外周血象和血清胃肠激素水平两方面用偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)综合分析当归补血药对对模型大鼠的治疗规律,初步比较当归补血药对润肠通便的差异。结果:单用当归及当归补血药对(6g/kg)均能不同程度改善模型大鼠便秘症状和血虚体征,使大鼠12h排便量和粪便含水量显著增加;与模型对照组比较,单用当归、当归-黄芪和当归-熟地黄均能显著缩短首粒黑便排出时间,均显著升高模型大鼠白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)和红细胞压积(HCT);单用当归的大鼠血清CCK-8、MOT含量显著升高、血清β-EP含量显著降低,当归-黄芪和当归-熟地黄组大鼠血清MOT含量显著升高,血清β-EP、SS含量显著降低;当归-白芍组大鼠血清β-EP、SS含量显著降低;PLS-DA综合分析显示,WBC、HGB和血清CCK-8是研究当归补血药对润肠通便效应的关键指标,当归-黄芪、当归-熟地黄药对具有较强的作用优势。结论:当归及当归补血药对对血虚便秘模型大鼠具有确定的治疗作用,其作用机制可能与调节外周血象和体内CCK-8、MOT、β-EP、SS的含量有关,当归-黄芪、当归-熟地黄药对的效应较强。

核心配伍药改善类风湿性关节炎骨破坏的分子机制预测

目的分析预测核心配伍药(黄芪-当归-白芍-甘草)改善类风湿性关节炎(RA)骨破坏的作用机制。方法首先在《中药大辞典》中检索核心中药的所有化学成分;其次采用中药系统药理学数据库(TCMSP)中的ADME参数,遴选活性成分;然后在Pub Chem和TCMSP数据库中查找活性成分对应的人类靶蛋白,在Gene数据库中查找RA骨破坏的相关基因;把靶蛋白和基因导入分子网络分析平台,采用核心计算分析法则,分别构建药物和疾病的分子网络和生物学通路,并进行比较映射分析。结果在与RA骨破坏关联度较高的生物通路中,核心配伍药靶蛋白主要参与了细胞免疫相关通路、细胞生长增殖相关通路及核受体相关通路。作用位点为toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、过氧化体增殖物激活型受体(Peroxisome Proliferator Activated Receptors,PPARs)、去整合素金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM17)、热休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)、细胞色素P450酶(cytochrome p450)。结论黄芪-白芍-当归-甘草配伍可能通过影响上述作用靶点,以及调控细胞免疫等信号通路,抑制炎症反应,调节破骨细胞免疫功能和机体代谢功能,从而改善RA骨破坏的发病。