藏药绿萝花彗星试验(SCGE)研究

研究藏药绿萝花的抗(致)突变作用,科学合理地利用藏药资源.根据遗传毒性研究试验组合原则和判定标准,以环磷酰胺、丝裂霉素C为阳性药物对照,采用单细胞凝胶电泳试验(彗星试验),研究不同剂量绿萝花对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL) DNA的影响.结果显示,环磷酰胺、丝裂霉素C具有很强的致CHL细胞SCGE上升、HDNA下降、TDNA上升、TL和TM增加(超过40μm)的作用;生药浓度为0. 224 g/mL、0. 448 g/mL、0. 896 g/mL的绿萝花在分别染毒1次、2次和3次后对CHL细胞DNA无影响,对环磷酰胺和丝裂霉素C引起的DNA损伤无保护作用.研究表明藏药绿萝花无致基因突变作用,研究结果为绿萝花临床安全用药提供了科学依据.

彗星试验检测细胞凋亡的研究

彗星试验是近十年发展起来的在单细胞水平上检测ＤＮＡ断裂的方法，理论上可检测含有大量ＤＮＡ碎片的凋亡细胞。本文在建立地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡模型的基础上，探索了彗星试验检测凋亡的实验方法，并与Ｇｉｅｍｓａ染色、琼脂糖凝胶电泳、ＴＵＮＥＬ法等几种常用的检测凋亡细胞的方法进行了比较研究。结果表明：凋亡细胞在彗星试验中呈现特征性的彗星形态，很小的彗星头，大而圆的彗星尾；以彗星试验检测细胞凋亡的最适电泳条件为２０Ｖ，１５ｍｉｎ；其检测灵敏度与Ｇｉｅｍｓａ染色法和ＴＵＮＥＬ法相当。因此彗星试验是一种灵敏、准确、简便、既可定性又可定量检测细胞凋亡的新方法。

彗星试验检测间接诱变剂对小鼠睾丸细胞的DNA损伤

目的 :探讨组织原代细胞在检测间接诱变剂中的作用。 方法 :采用单细胞凝胶电泳试验 (彗星试验 )对 3种典型的间接诱变剂 (环磷酰胺、2 -氨基芴和二甲基苯蒽 )所致的离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤进行了研究。结果 :在一定浓度范围内 ,3种受试物均可直接引起离体小鼠睾丸细胞的DNA单链断裂 ,出现拖尾的彗星细胞。其拖尾细胞百分率和DNA迁移长度均随受试物浓度的增加而增加 ,且有明显的剂量反应关系。结论 :原代小鼠睾丸细胞具有一定的代谢活化作用 。

彗星试验检测酚类化合物对小鼠脾脏细胞DNA损伤的研究

应用彗星试验技术 ,研究了酚类化合物对小鼠脾脏细胞DNA的损伤作用 ,试验结果表明 ,12种酚类化合物对小鼠脾脏细胞均能引起不同程度的DNA损伤 ,并呈现剂量效应关系。与对照组相比 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。试验结果亦表明 。

应用蚕豆根尖微核技术和彗星试验监测扬中地表水遗传毒物污染的研究

目的与方法 :本文应用蚕豆根尖微核技术和彗星试验对扬中市不同水体的遗传毒物污染状况进行了初步调查。结果 :结果表明 ,扬中市的遗传毒物污染集中在汇集了乡镇工业废水和生活污水的排污河道和死水沟塘 ,各主要河道及通江闸口基本没有污染。对其中的新坝大桥 (基本无污染 )、联合粮管所塘 (中轻度污染 )、扬子河、红星河 (严重污染 )水样的有机提取物进行人外周血淋巴细胞的彗星试验 ,以检测其引起的DNA损伤。结果表明扬子河、红星河水样引起的DNA损伤最为严重 ,其次为联合粮管所塘水样 ,新坝大桥水样最轻 ,趋势与蚕豆根尖微核试验结果一致。然而彗星试验结果显示四个样点的有机提取物引起的DNA损伤与阴性对照相比均有显著差异 (P <0 .0 1) ,结论 :上述结果表明彗星试验在检测遗传毒物污染方面比蚕豆根尖微核试验更为敏感。

微核试验和彗星试验检测雄黄的遗传毒性

目的用短期给药(小鼠骨髓细胞微核试验和彗星试验)和长期给药(利用生殖毒性Ⅰ段试验的大鼠做微核试验和彗星试验)检测雄黄的遗传毒性,探讨利用长期毒性试验或生殖毒性Ⅰ段试验用动物进行遗传毒性检测的可行性。方法小鼠ig给予雄黄0.25,0.5和1.0 g·kg-1,每天1次,2 d后,取骨髓细胞做微核试验和彗星试验;利用生殖毒性Ⅰ段大鼠ig给予0.125,0.25和0.55 g·kg-1,雄性连续给药42 d以上,交配成功后处死;雌性连续ig给药19 d以上,妊娠第15天,取骨髓细胞做微核试验和彗星试验,取血做外周血淋巴细胞微核试验。结果与阴性对照组比较,小鼠雄黄0.25,0.5和1.0 g·kg-1组微核试验微核率分别为3.0‰,4.40‰,7.01‰(P<0.05,P<0.01)和彗星试验拖尾率分别为6.3%,9.7%和11.3%(P<0.05,P<0.01)。与阴性对照组比较,生殖毒性Ⅰ段试验大鼠ig给予雄黄,雄黄0.55 g·kg-1组雄性大鼠的骨髓微核和外周血淋巴细胞微核率分别为2.83‰和6.67‰(P<0.05),雌性大鼠0.25和0.55 g·kg-1的骨髓微核和外周血淋巴细胞微核率分别为1.5‰,2.25‰以及2.58‰和4.40‰(P<0.05,P<0.01);雄黄使雄性和雌性大鼠彗星拖尾率明显升高(P<0.05)。结论利用生殖毒性Ⅰ段试验多次给药后取材做微核试验和彗星试验方法可行;外周血微核试验简便易行;在所观察的剂量下雄黄具有遗传毒性。

用微量全血彗星试验观察砷中毒病区人群DNA损伤

目的将微量全血彗星实验方法及微量血样保存方法在地方性砷中毒病区进行实践,以验证该方法的可行性。方法采集病区人群末梢微量血样及相应的水样及尿样,观察人群DNA损伤程度与总砷摄入量及尿砷之间的相关关系以及不同人群DNA损伤程度之间的差别。结果没有发现总砷摄入量及尿砷与DNA损伤程度之间的相关关系,但砷中毒病人的DNA损伤程度明显高于非病人及可疑病人。结论将微量血样保存方法及微量全血彗星实验用于地方性砷中毒病区的人群监测可行。

彗星试验检测区域水源有机污染致突变量

采用彗星试验检测了区域水源有机污染对人血淋巴细胞的致突变性,探讨了水源风险的评价方法.结果表明:Cr(VI)对人外周血淋巴细胞有强的致突变作用,并具有明显的剂量-效应关系;Cr(VI)剂量的对数与人外周血淋巴细胞DNA损伤的程度呈线性相关.可以用Cr(VI)作为阳性参照物量化表征水中有机污染混合物对人血淋巴细胞的致突变性.现行《地表水环境质量标准》、《污水综合排放标准》中Cr(VI)的限值可以用于评价水体中有机污染对人体健康的风险.

彗星试验中全血法与分离淋巴细胞法的比较

背景与目的 :比较在彗星试验中全血法和分离淋巴细胞法的结果差异 ,为简化彗星试验方法提供实验依据。材料与方法 :重铬酸钾和乙醇腹腔注射给药 ,取全血或分离淋巴细胞 ,应用彗星实验法比较小鼠外周血液淋巴细胞的DNA损伤情况。结果 :在全血和分离淋巴细胞条件下均能检测到两种损伤剂所导致的细胞DNA损伤 ,且作用趋势相同。 结论 :采用全血进行彗星试验更为简便 。

利用彗星试验研究菲对蚕豆DNA的损伤

以蚕豆（Viciafaba）为对象、以菲为多环芳烃（PAHs）代表物开展彗星试验，用KometVersion6．0软件进行彗星图像分析，并选择评价参数研究PAHs污染的DNA损伤效应。以Olive尾动量（OTM）作为DNA损伤的评价参数，细胞彗星试验中蚕豆根尖DNA的损伤程度随菲质量浓度（0～0．6mg·L^-1）升高而显著增大。最高浓度组（0．6mg·L^-1）OTM值比阴性对照增加132．63％，存在剂量依赖性，表明菲能诱导蚕豆根尖DNA损伤。在培养液中菲质量浓度为0．1mg·L^-1条件下培养蚕豆，0—12h时DNA损伤程度随时间延长而增大，12h时OTM值为38．82＋4．48；12～24h时DNA损伤程度则随时间延长而趋小。为确定菲污染导致DNA损伤的途径，进行非细胞彗星试验，结果表明，0．05mg·L^-1菲即可造成显著DNA损伤（OTM值为22．27±0．42），且DNA损伤程度随菲浓度提高而增大。菲对蚕豆根尖细胞可能存在直接的DNA损伤效应。

应用彗星试验研究产毒微囊藻喂食暴露对铜锈环棱螺肝细胞DNA的损伤

把铜锈环棱螺(Bellamya aeruginosa)暴露于3组不同成分的微藻悬浮液中[蓝藻组:只投喂产毒铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa);混合藻组:50%四尾柵藻(Scenedesmus quadricanda)+50%产毒铜绿微囊藻;对照组:只投喂四尾柵藻],用酶联免疫检测法(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测藻液和螺肝组织中的藻毒素浓度。结果表明,藻液中包括藻相和水相的总微囊藻毒素(MCs)浓度分别为:蓝藻组(36.34±4.12)μg·L-1;混合藻组(18.69±2.12)μg·L-1;对照组未检出。在喂食暴露的前6h内,混合藻组和蓝藻组螺肝组织中微囊藻毒素含量持续增长,而后出现下降趋势;第12h更换藻液并将微藻浓度调整至初始值后,肝组织中MCs含量又迅速回升。同期螺肝细胞DNA损伤指标彗星尾长(TL)、彗星尾距(TM)和彗星尾部DNA百分含量(Tail DNA%)也随螺肝组织中MCs含量发生相应变化,各项DNA损伤指标均在产毒微囊藻喂食暴露6h时达到最大值,之后,各项指标值有所回落,但第12h更换藻液后,DNA损伤再次加剧。整个实验期间(24h),混合藻组和蓝藻组的DNA损伤指标均显著高于对照组,混合藻组均显著高于蓝藻组。说明铜锈环棱螺经产毒微囊藻喂食暴露后,其肝组织细胞的DNA受到损伤,且螺肝组织MCs积累越多,DNA损伤越严重。

人外周血淋巴细胞彗星试验检测饮用水水质毒性研究

应用人外周血淋巴细胞彗星试验对无锡充山水厂、中桥水厂 ,常州西石桥水厂进出水及金坛市拟用水源地长荡湖湖心水样的生物毒性进行了研究 .结果表明 ,各水样的有机浓集物均可对人外周血淋巴细胞DNA产生不同程度的损伤 ,存在一定的遗传毒性 .试验结果与各水样水质污染状况基本一致 .同时 ,季节变化以及常规水处理过程对水样的生物毒性也有影响 .研究表明 。

用彗星试验检测土壤污染对蚯蚓活体基因损伤

彗星试验,又称单细胞凝胶电泳,因其能够在单细胞水平上灵敏地检验DNA链断裂,成为研究遗传毒性效应的新技术,近年来得到重要应用。比较而言,如何利用该技术来检验土壤无脊椎动物活体基因损伤的报道则很少。本研究以丝裂霉素C(MitomycinC)为遗传毒性阳性物质,研究了用彗星试验检验赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)活体基因损伤的实验方法,对尾长、“彗尾”DNA含量和尾矩三个指标定量表达实验结果的敏感性进行讨论,并以污水灌溉土壤样品为例研究了污染土壤导致的蚯蚓体内DNA单链断裂。结果表明,采用彗星试验检测蚯蚓体内DNA单链断裂的基因损伤效应可以作为生物效应标志终点,尾矩和尾长作为敏感指标可以更好地表达遗传毒性物质基因损伤的剂量-效应关系。

蚯蚓体腔细胞彗星试验检测阿散酸在泥浆体系中降解前后的遗传毒性变化

配制不同浓度的阿散酸标准液,与某养猪场附近的表层土壤混合形成泥浆系统,放在摇床上连续培养30d.在第0、1、2、3、4周取出适量降解液,分别用分光光度法测定阿散酸的降解率;用彗星试验检测降解液对赤子爱胜蚓体腔细胞DNA的损伤.结果表明,阿散酸低浓度时在泥浆体系中能被较快降解,500mg/L的降解率达到了25%;蚯蚓体腔细胞彗星试验表明,所有降解液均具有遗传毒性,可导致蚯蚓体腔细胞DNA明显损伤,与对照相比具有显著性差异(P<0.05).

彗星试验检测武汉市氯化饮水有机提取物对HepG2 DNA的损伤

目的 研究武汉市主要水源 C江、D湖、H水的氯化饮水有机提取物对 Hep G2 DNA的损伤。方法 氯化饮水有机提取物染毒 Hep G2后 ,用单细胞凝胶电泳 (亦称彗星试验 )检测 DNA损伤。结果 氯化饮水有机提取物诱导DNA损伤的最低浓度 ,C江、D湖、H水丰水期 (8月份 )均为 1.6 7m l/ ml培养液 ,平水期 (3月份 )分别为 16 7、 16 .7、1.6 7m l/ ml培养液 ;最高浓度 (16 7m l/ ml培养液 )氯化饮水有机提取物诱导的 Hep G2 DNA迁移度 ,C江、D湖的丰水期均明显高于平水期 (均 P<0 .0 5 ) ;最高浓度氯化饮水有机提取物诱导 Hep G2 DNA损伤的强度 ,H水 >D湖和 C江 (均 P<0 .0 1)。结论 武汉市主要水源 C江、D湖、H水的氯化饮水有机提取物对 Hep G2 DNA有损伤作用 ,损伤作用的严重程度 H水 >D湖 >C江 ,丰水期 >

彗星试验检测DNA交联的研究

为了寻求一种简便、快速的DNA交联检测方法 ,本文以过氧化氢 (H2 O2 )为标准断裂剂 ,用彗星试验检测了甲醛 (formaldehyde,FA)诱导的TK6细胞的DNA交联作用 ,并对两种实验方案进行了比较。结果显示 :随着甲醛浓度的增加 ,由过氧化氢造成的DNA迁移距离减小 ;当甲醛浓度为 10 0 0 μmol L时 ,无一个细胞拖尾 ,提示甲醛完全抑制了过氧化氢诱导的DNA迁移。此外 ,两种实验方案均可检出甲醛的DNA交联作用 ,但以先加交联剂、后加断裂剂的方案优于先加断裂剂、后加交联剂的方案 ,因为前一方案操作更简便 ,不受DNA修复的影响 ,所测DNA交联的剂量—反应关系更好。因此 ,彗星试验确为一种灵敏、简便和快速的DNA交联检测方法。