广东省中山市库蠓形态与分子鉴定

目的采用形态与分子的鉴定方法对在中山市不同生境采集的库蠓进行鉴定,明确中山市库蠓的种类。方法2018年4月至2019年3月在中山市采集库蠓样本,采用不损伤外部形态的方法提取基因组DNA,用线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COI)基因和线粒体DNA细胞色素b(Cytb)基因特异引物进行PCR扩增和序列测定,用DNAMAN V6和Mega 6.1软件进行构建N-J树。然后将库蠓虫体压片,在体视显微镜下进行形态学鉴定。结果共采集到的104只库蠓,鉴定结果为原野库蠓Culicoides homotomus、苏岛库蠓Culicoides sumatrae、异域库蠓Culicoides peregrinus、琉球库蠓Culicoides actoni、残肢库蠓Culicoides imicola、连斑库蠓Culicoides jacobsoni、抚须库蠓Culicoides palpifer、荒川库蠓Culicoides arakawai、环斑库蠓Culicoides circumscriptus、尖喙库蠓Culicoides oxystoma、霍飞库蠓Culicoides huffi、似同库蠓Culicoides similis等12种。在构建的COI和Cytb NJ树中,12个种均能各自聚为一支,且支持率均达99%,与形态学鉴定结果一致。结论雄性库蠓可根据其尾器进行有效鉴定,分子鉴定为形态鉴定的有效补充。联合形态和分子的鉴定方法可进行库蠓种类的准确鉴定。

热带臭虫及温带臭虫形态与分子鉴定

目的建立近似种热带臭虫与温带臭虫形态学和分子鉴定的方法。方法 2017年7月在深圳市某大学集体宿舍和山东省泰安某大学集体宿舍分别发现并采集到热带臭虫和温带臭虫。比较热带臭虫与温带臭虫外部形态特征及线粒体基因细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COI)基因、16S rDNA和核糖体基因28S rDNA、ITS2的序列,构建(Neighbor-Joining,NJ)进化树。结果虽然热带臭虫与温带臭虫成虫的外部形态相似,但仍可以从前胸背板、翅基、足和腹部的细微特征区别进行鉴定,COI、16S rDNA、28S rDNA、ITS2 4个基因的DNA序列种内差异均<2%,种间差异均>2%,在构建的4个基因NJ进化树中,2个种均能各自聚为一支,且支持率均达100%。结论热带臭虫和温带臭虫成虫可以利用外部形态鉴定,并能用常规的分子标记进行分子鉴定。形态和分子相结合的鉴定方法,为仅依赖形态特征难以区分的近似种的鉴定提供了一个高效的方法。

1种柑橘大实蝇寄生蜂鉴定及生物学研究

介绍在我国首次发现的柑橘大实蝇寄生蜂,对其进行形态、分子鉴定及相关生物学研究。该寄生蜂胸、腹部大部分黑色,前翅脉m-cu后端开叉,触角为63~67节,整个前足橙黄色,中足胫节和跗节橙黄色,后足黑色,中胸背板有明显的盾纵沟。进一步对COI基因和28sRNA基因构建NJ进化树分析,发现该寄生蜂与全裂茧蜂属中的长尾潜蝇茧蜂Diachasmimorpha longicaudata、Diachasmimorpha kraussii、Diachasmimorpha tryoni三者亲缘关系最近。在自然条件下寄生蜂的羽化历期要明显长于柑橘大实蝇,且羽化寄生蜂的雌性比例随着温度的升高而增加。结合其形态特征,命名为柑橘大实蝇茧蜂(Diachasmimorpha feijeni)。

横断山脉亚高山高山栎根系可培养真菌的多样性研究

[目的]了解横断山脉亚高山高山栎根系可培养真菌组成及多样性。[方法]以该地区3种高山栎根系为材料,利用根系浸泡染色方法观察根系内真菌共生状况,并对根内真菌进行分离和纯化,结合形态学与分子生物学的方法对其种类进行鉴定。[结果]根系染色可发现大量暗色有隔真菌和AMF丛枝结构,共鉴定出17科20属27种真菌,发现1种外生菌根真菌Ceratobasidiaceae(GSL1-7),4种暗色有隔真菌(DSE)Boeremia exigua var.exigua(GSL1-F)、Phoma herbarum(GSL20-A)、Phialophora mustea(GSL2-2,GSL2-9)、Paraboeremia putaminum(GSL4-F,GSL20-B),以及2种有促生作用的真菌Pseudogymnoascus roseus(GSL4-1-A,GSL4-2)和Trichoderma tomentosum(GSL80-D)。α多样性分析发现,3种高山栎根系内生真菌多样性丰富,但差异不显著。4种DSE和3种植物促生真菌在根系中占比可达31.3%。[结论]该类益生真菌对高山栎在横断山脉恶劣环境条件下的适应性生长发挥重要作用。本研究结果初步为阐明横断山脉地区高山栎的生态适应性机制提供了理论依据,同时为开发利用促生菌在高山栎育苗中的应用提供了活体菌种资源。