新托品对豚鼠形觉剥夺性近视的抑制作用及机制

目的 探究毒蕈碱受体拮抗剂新托品对豚鼠形觉剥夺性近视(FDM)的抑制作用及机制。方法 随机将三色豚鼠分为正常对照组、FDM模型组、FDM+生理盐水组、FDM+阿托品组和FDM+新托品组,每组8只。除正常对照组外,其余各组均对豚鼠右眼连续遮盖14 d建立豚鼠FDM模型,给药组每2 d分别于玻璃体腔内注射10μL生理盐水、1%阿托品或1%新托品1次。测量干预前和干预14 d后双眼屈光度和眼轴长度,而后取豚鼠右眼眼球,采用HE染色评价巩膜组织病理结构,天狼星红染色检测巩膜胶原蛋白含量,RT-qPCR法检测豚鼠巩膜转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP-2)mRNA表达水平,Western印迹法检测豚鼠巩膜Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和TGF-β_(1)蛋白表达水平,免疫组化法检测豚鼠巩膜MMP-2,TIMP-2和Ki-67蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,FDM模型组豚鼠眼球屈光度显著降低(P<0.01),眼轴显著伸长(P<0.01),巩膜纤维束分布散乱,胶原细胞稀疏,巩膜厚度减少(P<0.01),胶原蛋白含量显著降低(P<0.01),巩膜组织TIMP-2和TGF-β_(1)mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01),MMP-2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),Col-Ⅰ蛋白表达水平降低(P<0.05),Ki-67蛋白表达水平升高(P<0.01)。与FDM模型组相比,FDM+生理盐水组各指标均无显著变化;FDM+新托品组和FDM+阿托品组豚鼠右眼屈光度均显著升高(P<0.05),眼轴长度显著缩短(P<0.05),胶原纤维排列较紧密,纤维束分布较有序,胶原细胞分布较均匀,巩膜厚度明显增加(P<0.01),胶原蛋白含量显著升高(P<0.05,P<0.01),巩膜组织TIMP-2和TGF-β_(1)mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),MMP-2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),Col-Ⅰ蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Ki-67蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论 毒蕈碱受体拮抗剂新托品可通过逆转FDM模型豚鼠巩膜组织TGF-β_(1)下调和MMP-2上调,抑制巩膜细胞外基质重塑,从而抑制FDM模型豚鼠近视的发生发展。

驻景丸加减方对形觉剥夺性近视小鼠线粒体动力学相关蛋白的影响

目的:探讨驻景丸加减方对形觉剥夺性近视小鼠视网膜色素上皮细胞线粒体结构及动力学相关蛋白的影响。方法:3周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、中药组,各组均10只。模型组和中药组小鼠右眼采用形觉剥夺方法构建小鼠近视模型,形觉剥夺4wk后,中药组给予驻景丸加减方混悬液0.546g/(kg·d)(0.2mL/d)灌胃,共4wk,对照组、模型组给予等体积生理盐水灌胃。分别于实验开始时和实验结束时,应用A超检测小鼠右眼眼轴长度,带状光检影镜检测小鼠右眼屈光度。实验结束时,透射电镜观察视网膜色素上皮细胞线粒体超微结构,Western blot检测各组小鼠视网膜的线粒体融合蛋白1(MFN1)、视神经萎缩蛋白1(OPA1)、动力相关蛋白1(DRP1)表达,q-PCR检测MFN1、OPA1、DRP1基因表达。结果:实验前,对照组、模型组和中药组小鼠右眼屈光度和眼轴长度均无差异(P>0.05)。实验结束时,与对照组相比,模型组和中药组小鼠屈光度降低、伴眼轴持续延长(均P<0.05),而中药组小鼠眼轴长度明显低于模型组,而屈光度高于模型组(均P<0.05)。Western blot和q-PCR结果示,与对照组相比,模型组和中药组MFN1、OPA1相对表达量均减少、DRP1相对表达量增加(均P<0.05);与模型组相比,中药组MFN1、OPA1相对表达量增加(均P<0.05)。电镜结果示,中药组可见小鼠右眼视网膜线粒体仅轻度肿胀,而模型组可见线粒体明显肿胀、嵴紊乱变空。结论:驻景丸加减方可能通过调控线粒体动力学关键蛋白MFN1、OPA1、DRP1发挥保护视网膜线粒体的作用,对轴性近视小鼠视网膜起保护作用。

形觉剥夺性弱视儿童脑灰质的变化:基于体素的形态测量研究

目的 探讨形觉剥夺性弱视儿童全脑灰质体积(GMV)的变化。方法 收集2020年8月至2022年1月于本院眼科中心就诊的形觉剥夺性弱视儿童25例35眼,其中单眼形觉剥夺性弱视组15例15眼、双眼形觉剥夺性弱视组10例20眼。同期门诊招募年龄、性别匹配的正常对照组受检者11名22眼。单眼形觉剥夺性弱视组、双眼形觉剥夺性弱视组和正常对照组受检者进行3.0T磁共振成像(MRI)扫描以获得结构像MRI图。应用基于体素的形态测量学(VBM)方法及脑成像数据处理和分析软件进行结构像MRI数据处理和统计分析,采用单因素方差分析对三组受检者之间的GMV进行比较。结果 三组受检者之间总颅内容积的差异无统计学意义(P=0.379)。三组受检者之间GMV的差异有统计学意义(P=0.009);其中单眼形觉剥夺性弱视组、双眼形觉剥夺性弱视组与正常对照组受检者之间GMV的差异均有统计学意义(P=0.004、0.019),而单眼形觉剥夺性弱视组、双眼形觉剥夺性弱视组患者之间GMV的差异无统计学意义(P=0.673)。与正常对照组相比,单眼形觉剥夺性弱视组患者在左侧颞中回、左侧楔叶和左侧额中回的GMV均减少(均为P<0.05),在左侧额上回、左侧额下回岛盖部、左侧顶上小叶、右侧颞下回和右侧小脑前叶的GMV均增加(均为P<0.05)。与正常对照组相比,双眼形觉剥夺性弱视组患者在右侧额叶、双侧小脑后叶、双侧小脑前叶和双侧海马旁回的GMV减少(均为P<0.05),在左侧颞上回和右侧顶上小叶的GMV增加(均为P<0.05)。与双眼形觉剥夺性弱视组相比,单眼形觉剥夺性弱视组患者在右侧楔前叶、右侧颞中回、右侧辅助运动区、左侧额中回、左侧前扣带回、左侧中央前回、双侧中扣带回、双侧岛叶和双侧中央后回的GMV增加(均为P<0.05),未见GMV显著减少的脑区(P>0.05)。结论 形觉剥夺性弱视儿童脑灰质的改变不仅局限于初、高级视皮层,也涉及其他皮层及联络通路,且单、双眼弱视变化具有差异性。

养血补肾方对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜重塑及TGF-β2的作用研究

目的观察养血补肾方对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠巩膜胶原及转化生长因子-β2(TGF-β2)表达的影响。方法40只三色豚鼠右眼以半透明塑料眼罩行遮盖作为模型眼,左眼作为对照眼,建立FDM模型,分别于干预前1 d和干预60 d后检测双眼屈光度、眼轴变化。将造模成功的豚鼠随机分为模型组(MG)和养血补肾方组(YXBS),各20只,YXBS组灌胃养血补肾方,MG组灌胃等体积0.9%氯化钠注射液。连续给药15 d后,苏木精—伊红染色(HE)法观察豚鼠巩膜形态,免疫组织化学染色检测巩膜TGF-β2表达。结果(1)屈光度与眼轴:造模后MG组豚鼠模型眼屈光度较造模前降低(t=15.960,P=0.000),且低于造模后的对照眼(t=14.962,P=0.000),差异有统计学意义。造模后MG组豚鼠双眼眼轴均较造模前延长(t模型眼=21.274,t对照眼=15.844,均P=0.000),且模型眼眼轴长于对照眼(t=5.998,P=0.000),差异均有统计学意义。(2)巩膜形态:MG组豚鼠模型眼巩膜厚度明显缩小,巩膜胶原稀疏,纤维间隙扩大;YXBS组豚鼠模型眼巩膜胶原排列较紧密,纤维间隙较小。(3)巩膜TGF-β2:2组对照眼的TGF-β2表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照眼比较,2组模型眼巩膜TGF-β2表达水平均降低(tYXBS=4.538,tMG=6.981,均P=0.000),且YXBS组模型眼TGF-β2表达水平高于MG组模型眼(t=2.154,P=0.049),差异均有统计学意义。结论养血补肾方能上调FDM豚鼠巩膜组织中TGF-β2的表达,调节巩膜重塑,延缓巩膜变薄,这可能是其调控近视进展的机制之一。

形觉剥夺性近视的视网膜调控机制研究进展

形觉剥夺性近视(FDM)是由于视网膜接收不到清晰的物像,从而导致眼轴异常伸长,进而诱导近视发生。由于上睑下垂、先天性白内障、角膜混浊和玻璃体积血等原因导致的形觉剥夺引发的近视,其机制可能与在动物模型上观察到的FDM的机制类似。动物模型的研究已经证明了眼部生长和屈光发育的视觉引导以及视网膜调控的存在。视网膜是首先感知异常视觉信号的组织,探讨FDM发生发展机制的关键在于阐明异常的视觉信号输入如何被视网膜所感知并产生相应的生理病理改变。目前的研究已经确定了如多巴胺、视黄酸、血管活性肠肽、黑视蛋白等视网膜神经递质以及视网膜离子外排机制的重要作用。基因组学、蛋白质组学、代谢组学等技术发展使得从宏观层面了解形觉剥夺时视网膜发生的整体改变成为可能,为进一步探究FDM的视网膜调控机制提供了重要的数据支持。

血管内皮生长因子-A_(165)对形觉剥夺性近视豚鼠视网膜中多巴胺水平的影响

目的研究玻璃体内注射血管内皮生长因子-A_(165)(VEGF-A_(165))对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠视网膜中多巴胺(DA)水平的影响。方法选取健康3周龄三色豚鼠90只,随机分为6组,分别为空白组、FDM组、PBS组、10 ng组、5 ng组、1 ng组,每组15只。空白组豚鼠双眼不做任何处理,其他组豚鼠用半透明乳胶气球套头连续遮盖右眼14 d建立FDM模型,左眼不做处理。PBS组、10 ng组、5 ng组、1 ng组豚鼠于遮盖前右眼玻璃体内分别注射PBS缓冲液和10 ng、5 ng、1 ng VEGF-A_(165)。在造模前1 d和造模后14 d测量豚鼠右眼屈光度和眼轴长度。造模后14 d,采用免疫荧光法检测各组豚鼠视网膜中酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数,高效液相色谱法测定DA、DOPAC的含量及DA代谢率,HE染色观察视网膜中血管内皮细胞核数。结果造模前,6组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度差异均无统计学意义(均为P>0.05)。造模后14 d,与空白组相比,FDM组豚鼠近视度数升高,眼轴长度增加,TH阳性细胞数降低,DA、DOPAC含量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与FDM组相比,10 ng组、5 ng组、1 ng组豚鼠右眼近视度数均降低,眼轴长度均变短,TH阳性细胞数均增加,DA、DOPAC含量均增多,血管内皮细胞核数均增加,其中5 ng组豚鼠近视度数及眼轴长度均低于10 ng组,TH阳性细胞数及DA、DOPAC含量均高于10 ng组,1 ng组豚鼠近视度数及眼轴长度均低于5 ng组,TH阳性细胞数及DA、DOPAC含量均高于5 ng组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);10 ng组豚鼠视网膜血管内皮细胞核数最多,5 ng组次之,1 ng组较少,但与空白组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);6组豚鼠间视网膜DA代谢率差异无统计学意义(P=0.574)。结论玻璃体内注射VEGF-A_(165)可以使FDM豚鼠视网膜中DA含量升高,从而抑制豚鼠近视的发展。

血管内皮生长因子-A_(165)对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜重塑的影响

目的:探讨玻璃体腔内注射血管内皮生长因子-A_(165)(VEGF-A_(165))对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠巩膜重塑的影响。方法:健康3周龄三色豚鼠120只随机分为6组,每组20只,其中空白组不做任何干预,FDM组仅建立FDM模型,PBS组建立FDM模型前玻璃体腔内注射PBS缓冲液2.5μL,1ng组、5ng组、10ng组建立FDM模型前玻璃体腔内分别注射VEGF-A_(165)1、5、10ng。用半透明气球遮盖豚鼠右眼14d建立FDM模型,造模前后测量豚鼠右眼屈光度和眼轴长度,造模14d后采用高效液相色谱法检测视网膜中多巴胺(DA)含量,用RT-PCR、Western blot法检测巩膜中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)、转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达情况。结果:造模前,各组豚鼠右眼屈光度和眼轴长度均无显著差异(P>0.05)。造模14d后,与空白组相比,FDM组豚鼠右眼近视度数升高,眼轴增长,视网膜中DA含量减少,巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均增加,TIMP-2、TGF-β1表达量均减少(P<0.01);与FDM组相比,1ng组、5ng组、10ng组豚鼠右眼近视度数均降低,眼轴增长趋势均减缓,视网膜中DA含量均增加,巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均减少,TIMP-2、TGF-β1表达量均增加(P<0.01),且随着玻璃体腔注射VEGF-A_(165)浓度的升高,豚鼠右眼近视度数逐渐升高,眼轴逐渐延长,视网膜中DA含量逐渐减少,巩膜中MMP-2、TGF-β2、α-SMA表达量均逐渐增加,TIMP-2、TGF-β1表达量均逐渐减少。结论:玻璃体腔内注射VEGF-A_(165)可以增加FDM豚鼠视网膜中DA含量,影响巩膜中MMP-2、TIMP-2、TGF-β1、TGF-β2、α-SMA的表达,抑制巩膜重塑,其中1ng VEGF-A_(165)效果最明显。

树鼩形觉剥夺性弱视模型的视网膜形态变化

目的 建立形觉剥夺性树鼩弱视模型,从形态学方面观察弱视形成及恢复过程中视网膜的变化,为进一步探究弱视形成及恢复机制提供理论依据。方法 30只出生18 d的树鼩幼崽随机被分为6组(每组5只):弱视模型N1组(左眼缝合2个月);弱视模型N2组(左眼缝合1个月);弱视恢复模型N3组(左眼缝合1个月后打开1个月);弱视恢复模型N4组(左眼缝合1个月后打开换缝合右眼1个月);C1对照组(双眼正常视物2个月);C2对照组(双眼正常视物1个月)。模型建立成功后取视网膜行HE染色和透射电镜检查,观察在不同干预条件下树鼩视网膜各层组织学和超微结构变化。结果 HE染色结果显示,与C2对照组相比,弱视模型N2组树鼩视网膜神经节细胞、双极细胞、视锥视杆细胞数量均明显减少(均为P<0.05),神经纤维层及各层细胞形态均有不同程度损伤。透射电镜结果显示,弱视模型N2组树鼩视网膜各细胞出现细胞核体积缩小、核不规则、异染色质增多、线粒体肿胀、嵴溶解消失、内质网池形成等现象。在形觉剥夺时间更长的弱视模型N1组树鼩中,视网膜细胞数量较弱视模型N2组明显下降(P<0.05),形态损伤更加严重。去除剥夺后,弱视恢复模型N3组树鼩视网膜各层细胞数量均明显增多(均为P<0.05),细胞形态与超微结构出现一定程度的恢复,但与C1、C2对照组相比仍有差距。结论 形觉剥夺性弱视可引起弱视眼视网膜细胞出现病理性变化。形觉剥夺性弱视所引起的视网膜损伤具有可塑性。

针刺对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜形态及组织中HIF-1α、SOD、MDA水平的影响

目的 探究针刺对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠巩膜组织形态特点及巩膜组织中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法 选取普通级3周龄健康三色豚鼠72只,随机分为空白组、模型组和针刺组(各24只)。用半透明气球作为眼罩分别固定于模型组和针刺组豚鼠右眼及头面部建立FDM模型,左眼充分暴露作自身对照;针刺组在豚鼠模型建立当天起,于每日相同时间对豚鼠进行针刺和电针干预治疗,空白组豚鼠不做任何干预。记录每组豚鼠造模前、造模后2周及4周的眼轴长度和屈光度。造模后4周处死豚鼠,光学显微镜下观察巩膜形态变化,Western blot检测各组豚鼠巩膜中HIF-1α蛋白表达,比色法测定各组豚鼠巩膜中SOD活力和MDA含量。结果 造模后2周和4周,与空白组比较,模型组及针刺组豚鼠遮盖眼近视屈光度及眼轴长度均明显增加(均为P<0.05);与模型组比较,针刺组豚鼠遮盖眼近视屈光度减小,眼轴增长明显减缓(均为P<0.05)。造模后4周,与空白组比较,模型组豚鼠巩膜厚度明显变薄,胶原纤维分布稀疏,有明显纤维空隙且排列不规则;与模型组相比,针刺组豚鼠巩膜层增厚,与胶原纤维分离程度较小且排列更加规则。造模后4周,与空白组相比,模型组豚鼠巩膜中HIF-1α蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,针刺组豚鼠巩膜中HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.01)。造模后4周,与空白组相比,模型组豚鼠巩膜中SOD活性显著降低,MDA含量显著提高(均为P<0.01);与模型组相比,针刺组豚鼠巩膜中SOD活性显著升高,MDA含量显著降低(均为P<0.05)。结论 针刺治疗可通过调节FDM豚鼠巩膜中HIF-1α、SOD及MDA的表达,改善巩膜缺氧及抗氧化应激状态,延缓近视的发生发展。

阿托品对形觉剥夺性近视模型大鼠的改善作用及作用机制

目的:探讨阿托品(ATR)调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对形觉剥夺性近视模型大鼠的改善作用及相关机制研究。方法:将60只SD大鼠随机分为对照(NC)组、形觉剥夺性近视模型(Model)组、ATR组(3mg/kg)、TAK-715组(10mg/kg Wnt/β-catenin通路激活剂TAK-715)、ATR+TAK-715组(3mg/kg ATR+10mg/kg TAK-715),NC组、Model组右眼结膜下注射等量生理盐水,每组12只。4周后,记录各组大鼠右眼眼轴长度和屈光度;HE染色法行巩膜形态观察;ELISA试剂盒检测血清白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;RT-qPCR检测巩膜组织转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)mRNA表达;Western blot检测巩膜组织Wnt/β-catenin通路蛋白表达。结果:NC组大鼠巩膜正常;Model组巩膜变薄,胶原纤维排列稀疏紊乱;ATR组大鼠巩膜厚度增加,胶原纤维直径增加;ATR+TAK-715组大鼠巩膜厚度减小,纤维排列紊乱。与NC组巩膜正常相比,Model组眼轴长度、屈光度、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、MMP-2 mRNA水平及Wnt、MMP-2蛋白水平显著增加(P<0.05),TGF-β1、TIMP-2 mRNA水平以及TGF-β1、TIMP-2、p-β-catenin/β-catenin蛋白水平显著降低(P<0.05);与Model组比较,ATR组眼轴长度、屈光度、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、MMP-2 mRNA水平及Wnt、MMP-2蛋白水平显著降低(P<0.05),TGF-β1、TIMP-2 mRNA水平及TGF-β1、TIMP-2、p-β-catenin/β-catenin蛋白水平显著升高(P<0.05),而TAK-715组对应指标呈现出相反的趋势(P<0.05);与ATR组相比,ATR+TAK-715组眼轴长度、屈光度、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、MMP-2 mRNA水平及Wnt、MMP-2蛋白水平显著增加(P<0.05),TGF-β1、TIMP-2 mRNA水平及TGF-β1、TIMP-2、p-β-catenin/β-catenin蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:ATR可能通过调控Wnt/β-catenin通路减轻炎症反应,抑制胞外基质重塑,进而改善大鼠形觉剥夺性近视。

“益阳坚阴”复方中药对形觉剥夺性近视豚鼠眼眼轴轴、MMP-2及COL-I表达的时效研究

目的 观察“益阳坚阴”复方中药对形觉剥夺性近视(FDM)豚鼠的眼轴、MMP-2及COL-I表达的时效研究。方法 选取3周龄雄性花豚鼠72只,随机分为空白对照组(A组)、模型组(B组)、中药干预组(C组);B组及C组豚鼠均缝合右眼;A组和B组每日予0.9%氯化钠注射液10 mL/kg灌胃,C组每日予10 mL/kg的“益阳坚阴”复方中药灌胃。连续干预2周及4周后取材,所有豚鼠干预前后行A超测量眼轴,干预后取材行Western-blot法检测豚鼠视网膜组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及巩膜组织中巩膜I型胶原(COL-I)的含量,对数据进行统计分析。结果 (1)眼轴:①干预2周后,3组干预前后比较,眼轴均有增长(Z_(A)=-5.504,Z_(B)=-7.491,Z_(C)=-7.382,均P=0.000)。3组间眼轴比较,差异有统计学意义(H=20.439,P=0.000)。与A组比较,B组豚鼠眼轴明显增长(Z=-3.941,P=0.000);而C组眼轴无明显增长(P>0.05)。与B组比较,C组眼轴较短(Z=-3.392,P=0.001)。②干预4周后,3组干预前后比较,眼轴均增长(Z_(A)=-6.819,Z_(B)=-8.466,Z_(C)=-8.853,均P=0.000)。3组间眼轴比较,差异有统计学意义(H=17.997,P=0.000)。与A组比较,B组及C组豚鼠干预后眼轴均有增长(Z_(B)=-3.449,P=0.001;Z_(C)=-3.881,P=0.000);与B组比较,C组眼轴差异无统计学意义(P>0.05)。(2)MMP-2、COL-I表达水平:①干预2周后,3组间MMP-2、COL-I蛋白表达水平比较,差异具有统计学意义(F_(MMP-2)=69.529,P=0.000;F_(COL-I)=23.753,P=0.001)。与A组比较,B、C组的MMP-2蛋白表达水平升高(t_(B)=-10.353,P=0.000;t_(c)=-3.733,P=0.020),B组的COL-I蛋白表达水平降低(t=8.155,P=0.001),而C组的COL-I蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);与B组比较,C组的MMP-2蛋白表达水平降低(t=7.860,P=0.001)、COL-I蛋白表达水平升高(t=-4.670,P=0.010),差异均有统计学意义。②干预4周后,3组间MMP-2、COL-I蛋白表达水平比较,差异具有统计学意义(F_(MMP-2)=143.191,P=0.000;F_(COL-I)=19.765,P=0.002)。与A组比较,B组及C组的MMP-2蛋白表达水平均升高(t_(B)=-19.549,P=0.000;t_(C)=-7.315,P=0.002),COL-I蛋白表达水平均降低(t_(B)=4.837,P=0.008;t_(C)=5.234,P=0.006);与B组比较,C组的MMP-2蛋白表达水平降低(t_(C)=8.483,P=0.001),差异有统计学意义;而COL-I蛋白表达水平,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 “益阳坚阴”复方中药在干预2周后可以抑制FDM豚鼠眼轴的发展,推测可能与下调MMP-2的表达,减少COL-I胶原降解有关。

Caspase-3在形觉剥夺性近视眼视网膜中的表达意义

目的:研究鸡形觉剥夺性近视眼发展过程中视网膜caspase 3蛋白的变化及视网膜细胞的凋亡情况。方法:眼睑缝合法建立鸡的近视眼模型。按预定时间检影验光,游标卡尺测眼球外径,免疫组化检测视网膜中caspase 3蛋白的表达,色敏比色法定量分析caspase 3活性变化,末端脱氧核苷酸连接酶介导生物素化脱氧尿苷酸末端标记(TdT‐mediatedbiot in‐dUTP nick‐end labeling,TUNEL)技术及流式细胞术检测视网膜的凋亡细胞。结果:眼睑缝合12wk后,缝合眼屈光度加深、眼球外径增大,视网膜感光细胞内节及外丛状层caspase-3蛋白表达上调,色敏比色法测量的视网膜caspase-3活性明显高于对照眼。缝合眼视网膜内、外核层发现凋亡细胞,凋亡率明显高于对照眼。结论:鸡形觉剥夺性近视眼发展过程中,视网膜细胞出现明显凋亡,caspase-3参与凋亡的发生。

Smad3信号通路及结缔组织生长因子在哌仑西平抑制形觉剥夺性近视中的作用机制

目的:观察哌仑西平眼液对豚鼠形觉剥夺性近视的抑制效果,并探讨Smad3信号通路及结缔组织生长因子(CTGF)在哌仑西平抑制近视中可能的作用机制。方法:1周龄豚鼠40只,随机分为4组,每组10只。Ⅰ组(正常对照组):不遮盖不点药;Ⅱ组(单纯遮盖组):单纯遮盖右眼不点药;Ⅲ组(哌仑西平组):遮盖右眼,每天早晚2次点3%哌仑西平滴眼液;Ⅳ组(氮酮组):遮盖右眼,每天早晚2次点0.1%氮酮液。各组均以右眼为处理眼,左眼为对照眼。6周后检测4组豚鼠的双眼屈光度、眼轴长度,行免疫组织化学法及Western印迹法分别检测巩膜上Smad3及CTGF的蛋白表达。结果:Ⅲ组与Ⅰ组实验眼间相对性屈光度数及眼轴长度变化的差异无统计学意义(P>0.05);Ⅱ,Ⅳ组与Ⅰ组相比差异有统计学意义(P<0.05);巩膜Smad3和CTGF阳性吸光度值Ⅲ组与Ⅰ组相比差异无统计学意义(P>0.05),Ⅱ,Ⅳ组与Ⅰ组相比差异有统计学意义(P<0.05);Western印迹显示Smad3蛋白及CTGF蛋白表达Ⅱ,Ⅳ组均较Ⅰ组明显降低(P<0.05),而III组较Ⅰ组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哌仑西平眼液能抑制豚鼠形觉剥夺性近视的发展,推测哌仑西平可能通过影响巩膜Smad3信号通路从而抑制形觉剥夺性近视的发展。

儿童单眼先天性白内障术后形觉剥夺性弱视眼视盘周围RNFL和黄斑厚度检测

目的:检测儿童单眼先天性白内障术后形觉剥夺性弱视眼视盘周围视神经纤维层(RNFL)和黄斑厚度。方法:观察组为先天性白内障术后形觉剥夺性弱视眼19眼,自身对照和正常对照分别为形觉剥夺性弱视患者的对侧非弱视眼19眼及正常同龄人眼19眼,应用OCT测量上述各组视盘周围RNFL和黄斑厚度。结果:观察组视盘鼻侧RNFL厚度为(71.63±10.55)μm,高于自身对照[(65.00±12.54)μm]和正常对照[(65.21±8.29)μm](t=2.396和2.240,P<0.05)。观察组黄斑厚度[(196.68±15.13)μm]较自身对照组[(184.74±13.84)μm]和正常对照组[(185.16±15.05)μm]增加(t=2.135和2.131,P<0.05)。结论:儿童单眼先天性白内障术后形觉剥夺性弱视眼视盘鼻侧RNFL和黄斑中心区厚度比对侧非弱视眼及正常同龄人眼增厚,其视网膜结构可能存在异常。

鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA的表达

目的:观察鸡形觉剥夺性近视眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA表达水平的变化,探讨IGF-1R/IGF-2R在实验性近视眼发生机制中的信号转导作用。方法:孵化1d的白色来亨鸡36只,右眼为遮盖眼,左眼为自身对照眼;测量实验前、单眼遮盖1,2,3wk时遮盖眼和对照眼的屈光度和眼轴长度,并检测不同遮盖时间鸡眼后极部巩膜IGF-1R/IGF-2RmRNA的表达水平。结果:鸡眼后极部巩膜可检测到IGF-1R/IGF-2Rm-RNA的表达,随着眼球的生长发育其表达水平明显升高;随着遮盖时间的延长,IGF-1R/IGF-2RmR-NA在遮盖眼后极部巩膜的表达水平显著升高;遮盖眼后极部巩膜IGF-1RmRNA的表达水平自遮盖1wk起明显高于对照眼;IGF-2RmRNA表达水平则在对照眼与遮盖眼无显著差异。结论:形觉剥夺可能通过上调鸡眼后极部巩膜IGF-1RmRNA表达水平,IGF-1R通过结合IGF并启动下游信息转导途径,从而调控巩膜细胞的增殖和分化,导致近视的发生。

血管活性肠肽受体拮抗剂VIPhybrid对鸡形觉剥夺性近视眼发展的影响

目的:探讨非选择性血管活性肠肽受体(vasoactive intestinal peptide receptors,VIPR)拮抗剂VIPhybrid对雏鸡眼球后壁组织VIP蛋白质和mRNA表达的调控及对雏鸡形觉剥夺性近视眼(form depri-vation myopia,FDM)发生发展的影响。方法:随机选择出生1天龄健康黄色来亨雏鸡共72只,分为6组,每组12只:Ⅰ组单眼遮盖作为空白对照组;Ⅱ组玻璃体腔内注射生理盐水20μL加遮盖作为阴性对照组;Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组分别向玻璃体腔内注射低浓度(3×10-12mol/L)、中浓度(3×10-10mol/L)和高浓度(3×10-8mol/L)VIPhybrid,并加遮盖作为实验组;以上各组均取右眼注射并持续遮盖1周;Ⅵ组双眼均未遮盖、未注射药物作为正常对照组。各组均采用视网膜检影验光检测屈光度,眼科A超测定活体眼轴长度,眼球后壁组织行SP法免疫组织化学染色(每组取7只眼)和RT-PCR的方法(每组取5只眼)分别检测VIP蛋白质和mRNA的表达。结果:遮盖1周后,Ⅰ组、Ⅱ组眼轴延长,形成高度近视眼,组间无统计学差异(P>0.05);Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组近视性屈光度数、眼轴长度明显低于Ⅰ,Ⅱ组(P<0.01),仍高于Ⅵ组(P<0.01);Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组近视性屈光度数、眼轴长度与VIPhybrid浓度呈负相关。VIP在正常视网膜中广泛表达,其中在光感受器外节有强阳性表达;VIP蛋白质和mRNA表达,Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组与Ⅰ组、Ⅱ组比较明显下调(P<0.01),仍高于Ⅵ组(P<0.01);Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组VIP蛋白质和mR-NA表达随VIPhybrid浓度的升高而下降。结论:FDM中视网膜VIP蛋白质和mRNA表达明显上调;VIPhybrid可有效减缓鸡FDM的发展,下调鸡FDM中视网膜VIP蛋白质和mRNA的表达,可能为人类近视眼的药物治疗提供一条新思路。

豚鼠形觉剥夺性近视视网膜形态学研究

目的:建立豚鼠形觉剥夺性近视动物模型,研究在豚鼠形觉剥夺性近视眼中视网膜组织病理学改变,探讨其发病机制。方法:出生3wk的三色豚鼠随机分为3组:未遮盖组、单眼遮盖2wk组、单眼遮盖3wk组。对各组进行视网膜检影和A超测眼轴,眼底视网膜光镜及电镜检查以及视网膜各层厚度分析。结果:豚鼠形觉剥夺后近视形成,眼轴延长;视网膜各层变薄,光镜及电镜下均有病理性改变。结论:对豚鼠进行无创性眼罩遮盖可建立有效的形觉剥夺性近视模型。视网膜内层在近视发病机制中起重要作用。

驻景丸加减方对形觉剥夺性近视小鼠视网膜厚度及细胞凋亡的影响

目的:探讨驻景丸加减方对形觉剥夺性近视小鼠视网膜厚度及细胞凋亡的影响。方法:将72只3周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组1、模型组1、干预组1、对照组2、模型组2及干预组2,每组12只小鼠,前三组实验进行3wk,后三组实验进行6wk,除对照组1和对照组2外,所有小鼠均用半透明眼罩遮盖右眼诱导形觉剥夺性近视动物模型,干预组1在造模同时而干预组2则在实验3wk后灌胃驻景丸加减方混悬液0.546g/(kg·d)(0.1mL/d),其余组小鼠灌胃等量生理盐水0.1mL/d,实验前后均测眼轴,实验结束时取小鼠视网膜行HE染色用于观察视网膜各层厚度改变,免疫组织化学(IHC)和western blotting(WB)用于检测Bcl-2和Caspase3蛋白的表达。结果:在实验结束时模型组1的眼轴比对照组1显著增加(P<0.01),干预组1的眼轴显著低于模型组1(P<0.01),模型组2的眼轴比对照组2显著增加(P<0.01),干预组2的眼轴明显低于模型组2(P<0.01);模型组1的NFL和ONL的厚度比对照组1显著变薄(P<0.01),模型组1的INL厚度比对照组1显著变薄(P<0.05),干预组1的NFL、INL和ONL厚度较模型组1显著增加(P<0.05);模型组2的NFL、INL和ONL的厚度比对照组1显著变薄(P<0.01);IHC检测显示Bcl-2蛋白平均光密度模型组1显著低于对照组1(P<0.05),干预组1显著高于模型组1(P<0.01),模型组2显著低于对照组2(P<0.01),干预组2显著高于模型组2(P<0.01);Caspase3蛋白平均光密度模型组1显著高于对照组1(P<0.01),干预组1显著低于模型组1(P<0.01),模型组2显著高于对照组2(P<0.05),干预组2显著低于模型组2(P<0.01);WB检测证明,Bcl-2的蛋白相对表达水平模型组1显著低于对照组1(P<0.01),干预组1显著高于模型组1(P<0.01),模型组2显著低于对照组2(P<0.01),干预组2显著高于模型组2(P<0.01);Caspase3的蛋白相对表达水平模型组1显著高于对照组1(P<0.01),干预组1显著低于模型组1(P<0.01),干预组2显著低于模型组2(P<0.05)。结论:驻景丸加减方可通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase3的表达,减轻近视形成过程中及已形成近视小鼠视网膜细胞凋亡,从而起到干预形觉剥夺近视小鼠视网膜厚度变薄的作用。

小鸡形觉剥夺性近视眼巩膜TIMP-2 mRNA表达的时间动态变化

目的 探讨小鸡形觉剥夺性近视眼(FDM)后极部巩膜基质金属蛋白酶2组织抑制剂(TIMP-2)mRNA表达水平的动态变化。方法 取1d龄来亨雏鸡以半透明眼罩分别遮盖右眼4、7、14、21、30d制备FDM动物模型,未遮盖眼为自身对照眼,并随机选取同数目同龄小鸡作为正常对照眼。实验前及预定实验时间进行视网膜检影验光和眼轴长度测量,摘除眼球,提取后极部巩膜总RNA,采用一步法逆转录-多聚酶链反应检测每组小鸡后极部巩膜TIMP-2 mRNA表达水平。结果 与正常组、自身对照组相比,FDM后极部巩膜TIMP-2 mRNA表达明显降低,组间差异非常显著(P<0.01)。随遮盖时间延长其表达降低,7～21d降低最明显,FDM组间差异显著(P<0.01)。自身对照组TIMP-2 mRNA表达水平较同龄正常对照组存在下调趋势,但组间无统计学差异(P>0.05)。结论 后极部巩膜TIMP-2表达抑制极可能作为导致巩膜ECM主动重塑的始发因素之一而参与FDM形成。

左旋多巴对形觉剥夺性弱视猫视皮层17区神经生长因子的影响

目的观察左旋多巴对猫形觉剥夺性弱视的治疗作用及其对视皮层17区神经生长因子(NGF)表达的影响。方法18只4周龄幼猫分为正常组、单眼剥夺组、左旋多巴组,每组6只。通过单眼眼睑缝合制备形觉剥夺弱视模型,观察不同干预条件下各组视觉诱发电位(P-VEP)的P1隐含值及波幅,应用免疫组织化学法测定各组视皮层17区NGF的差异。结果单眼剥夺组剥夺眼P100波隐含值延长,波幅降低,与正常组及对侧眼比较,差异均有统计学意义(P<0.01),左旋多巴组双眼P-VEP各指标与正常组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。剥夺组视皮层NGF免疫阳性细胞密度为80.23±9.54,正常组为111.83±7.49,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);左旋多巴组为118.06±12.37,与正常组比较差异无统计学意义(P=0.94)。结论敏感期内剥夺性弱视幼猫视皮层17区NGF的表达减弱。左旋多巴干预治疗后,NGF表达明显增加,弱视眼P-VEP明显改善,左旋多巴能促进实验猫弱视眼的视功能改善。