菟丝子及混伪品的DNA条形码鉴定

目的调研市售菟丝子Cuscutae Semen混杂情况,为菟丝子药材质量的提升和安全应用提供依据。方法收集市售菟丝子25份,对样品进行ITS2基因扩增并双向测序,利用HMMer注释方法获得ITS2序列,使用MEGA6.0进行遗传距离计算并构建邻接法(neighbor-joining,NJ)系统发育树;运用DNAsp5.0进行功能域检测和单倍型分析;比较菟丝子及杂质的二级结构差异;用R语言将所得序列转换成彩色条形码图片及二维码。结果通过序列分析、遗传距离分析、构建系统发育树、二级结构分析、功能域分析及单倍型分析可将菟丝子药材中不同科属及同一属的杂质准确区分;成功检测出25份菟丝子中分别含有藜种子、绿穗苋种子、虫实种子、铁苋菜种子、稗子、酸模叶蓼种子、大豆碎粒等1种或多种杂质。结论首次调研了市售菟丝子的混杂情况,表明其混杂种类多,且部分混杂种子有毒,为菟丝子相关标准制定提供了依据。此外,ITS2序列可准确鉴定菟丝子及其混伪品,为微小种子类药材鉴别提供了理论依据;与二维码技术结合可实现菟丝子监管的标准化和信息化。