高效液相色谱串联质谱法同时测定人血清8种叶酸循环代谢物

目的建立同时测定人血清8种叶酸循环代谢物的高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法。方法人血清样本沉淀蛋白后挥发干,有机试剂复溶,采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱、有机试剂梯度洗脱法进行分离,电喷雾正负离子模式下以多反应检测方式检测,内标法定量。结果8种叶酸循环代谢物标准曲线的线性相关系数为0.994~0.999,精密度RSD值为3.9%~12.3%,回收率RSD值为85.4%~113.1%,最低检出限为0.128μg/L。结论LC-MS/MS法具有重现性好、灵敏度高、通量高的特点,可同时测定多种人体叶酸循环代谢物。

基于三羧酸循环相关代谢物的靶向代谢组学探究HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药生物标志物

目的探究三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA)相关代谢物在人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药和敏感细胞中的水平变化,并筛选出与曲妥珠单抗耐药性相关的潜在生物标志物。方法本研究采用基于超高效液相色谱串联质谱(ultra-high-performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS/MS)的靶向代谢组学方法检测曲妥珠单抗耐药细胞和敏感细胞中TCA相关代谢物(枸橼酸、顺式-乌头酸、异枸橼酸、α-酮戊二酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸和草酰乙酸)含量水平,并对该检测方法的线性、准确度和精密度进行考察。使用正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least-squares discrimination analysis,OPLS-DA)法比较耐药和敏感细胞中TCA相关代谢物的表达差异,以P<0.05和差异倍数(fold change,FC)>1.5或<0.67为标准筛选出差异代谢物,并基于支持向量机(support vector machine,SVM)算法建立多变量耐药分类模型,利用受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)对差异代谢物和SVM模型的分类精度进行评估。结果三羧酸循环相关代谢物的标准曲线相关系数r均大于0.994,所建立的方法准确度为94%~105%,精密度变异系数(coefficient of variation,CV)均小于15%。OPLS-DA模型中,敏感组和耐药组细胞分离趋势明显。在曲妥珠单抗耐药细胞中,苹果酸、琥珀酸、富马酸的含量较曲妥珠单抗敏感细胞显著升高(P<0.05)。ROC分析显示琥珀酸、富马酸和苹果酸的曲线下面积(area under curve,AUC)均大于0.9,联合3种差异代谢物建立SVM耐药诊断模型的AUC为1.000。结论TCA相关代谢物在曲妥珠单抗耐药和敏感细胞中呈现不同的表达水平,琥珀酸、富马酸和苹果酸可作为生物标志物对HER2阳性乳腺癌曲妥珠单抗耐药的诊断具有潜在价值。