循环增强荧光免疫技术与化学发光免疫法检测血浆BNP的比较研究

目的分析和评价循环增强荧光免疫技术(cyclic enhanced immunofluorescent assay,CEIFA)与化学发光免疫法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)在血浆B型脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP)检测中的应用价值。方法采用CEIFA和CLIA法分别检测50例心内科患者血浆BNP的水平,对检测结果的相关性、回收率、精密度、样本稳定性进行评估。结果与CLIA法比较,CEIFA法回归方程为Y=0.975X+2.910(r=0.987,P<0.01),回收率为94.49%~100.53%,批内和批间变异系数(CV)分别为2.85%~6.66%和6.21%~12.52%,高值和中值样本结果的稳定性更高。结论CEIFA法检测BNP具有较好的性能,较CLIA法有一定的优势,可满足临床试验室需求。

循环增强免疫荧光法检测肌钙蛋白的检验效能评估

目的评估Pylon3D循环增强免疫荧光法(CEIFA)肌钙蛋白T(cTnT)和肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)检测方法的检验性能。方法依据EP文件制定方案,验证Pylon3D cTnT和cTnⅠ检测试剂盒(CEIFA)的检出限(LoD)、精密度和线性范围,用临床标本分别评价Pylon3D系统与罗氏(Roche)cTnT、TOSOH cTnⅠ检测结果的关系。结果Pylon3D系统cTnT的LoD达到1 pg/mL。低浓度0.014 ng/mL时批内精密度为4.70%,批间精密度为4.124%,高浓度0.2 ng/mL时批内精密度为6.33%,批间精密度为6.55%,在3 pg/mL~10 ng/mL的范围内Pylon3D cTnT检测试剂盒有很好的线性关系。Pylon3D系统与Roche系统的结果显著相关(r^(2)=0.9874,P<0.001)。Pylon3D系统cTnⅠ的LoD达到0.5 pg/mL,低浓度0.018 ng/mL时批内精密度为4.57%,批间精密度为4.80%;高浓度0.5 ng/mL时批内精密度为6.461%,批间精密度为5.69%。在0.5 pg/mL~3 ng/mL范围内Pylon3D cTnⅠ检测试剂盒有很好的线性关系。Pylon3D系统与AIA-2000系统的结果显著相关(r^(2)=0.9024,P<0.001)。结论循环增强免疫荧光法肌钙蛋白灵敏度高、检测稳定,与化学发光法系统具有较好的相关性。

循环增强荧光免疫法与电化学发光夹心法检测白介素-6的比较研究

目的分析探讨循环增强荧光免疫法(Cyclic Enhanced Immunofluorescent Assay,CEIFA)和电化学发光夹心法(Electrochemical Luminescence Sandwich Method,ECLIA)在检测白介素-6(Interleukin-6,IL-6)结果的有效性。方法选择2020年7月—2022年7月在桂林市人民医院就诊的120人作为研究对象,包括重症监护病房患者45例及健康志愿者75名。选取的标本分别通过ECLIA和CEIFA进行IL-6水平的检测,通过比较两种方法的检测结果判断其相关性、回收率和精密度情况。结果ECLIA和CEIFA相比,回归方程为Y=0.9733X-0.2849(R2=0.997,P<0.01),回收率为94.38%~100.26%,批内精密度和批间精密度变异系数分别为2.81%~6.61%以及6.15%~12.45%,批内精密度最大允许误差≤10.00%,批间最大允许误差≤15.00%。结论ECLIA相对于CEIFA的性能、情况虽然各有优劣,但CEIFA在性能及稳定性方面展现出了更为明显的优势,能够更好地满足临床应用的需求,因此建议临床上采用CEIFA作为主要检测方法。

循环增强荧光免疫分析技术对β-HCG性能分析在临床的应用评估

目的对某公司的Pylon3D型循环增强荧光分析仪及配套的超宽线性范围的β-HCG试剂盒在临床的应用评估。方法取该所2017年11月16日至2018年2月1日206份来所治疗的患者标本,96份孕妇标本。采用Pylon3D型循环增强荧光分析仪对β-HCG试剂盒的精密度、线性范围、样本回收率、检测限、参考区间及与Abbott公司的试剂盒进行相关性和一致性评估。结果CEFIA法检测高中低样本的轮内和实验室内总不精密度为分别为4.57%~6.06%和4.97%~6.18%。线性范围1~200000IU/L内,线性方程为Y=1.0575X-433,r=0.999,相对偏差范围为1.36%~9.39%。样品回收率为95.46%~107.22%。检出限LoB值为0.28IU/L,LOD值为0.73IU/L。奉贤地区女性第99百分位参考值为4.47IU/L。与Abbott检测结果比对,回归曲线Y=1.037X-0.222,r=0.992,Bland-Altman符合率92.7%。结论利用CEFIA法检测β-HCG具有良好的分析性能,并且其检测线性范围非常广,避免β-HCG普遍需要的样本稀释后重复测试,节约检测成本,在临床应用上具有一定的推广应用价值。

循环增强荧光免疫发光法检测血清白介素6的性能分析

目的评价循环增强荧光免疫发光法检测血清白介素6(IL-6)的性能。方法用循环增强荧光免疫发光法和电化学发光法(ECLIA)平行检测554例血清样本IL-6的水平。(1)定性检验,设临界值为2pg/mL,以ECLIA法作为确认方法,计算循环增强荧光免疫发光法的灵敏度、特异性和符合率。用成组χ^(2)检验进行关联分析。用配对χ^(2)检验观察两种方法对定性结果的差异。(2)定量检验,对于结果范围在2~50000pg/mL的样本,用循环增强荧光免疫发光法和ECLIA进行配对资料的t检验,并以ECLIA法为比对方法(X),以循环增强荧光免疫发光法为实验方法(Y),结果进行线性回归和相关系数(r)的计算。结果(1)循环增强荧光免疫发光法检测IL-6的灵敏度为99.2%,特异性为92.6%,阳性预测值为99.6%,阴性预测值为86.2%,总符合率为98.9%。成组χ^(2)检验,χ^(2)值=436.646,P<0.001,配对McNemarχ^(2)检验,P=0.687。(2)配对资料的t检验,t值=0.532,P值=0.595。直线回归方程为Y=0.990 X-0.344,r=0.996。结论循环增强荧光免疫发光法检测血清白介素6,在低、中、高各种水平上和ECL IA法检测的结果相关性高,吻合度好,是一种准确、快速的方法,能满足临床诊断的需要,适用于各级医疗机构血清白介素6的检验。

间接免疫荧光技术对类天疱疮的循环抗基底膜抗体的研究

运用正常人皮肤及分离正常人皮肤为底物的两种间接免疫荧光方法，对２０例大疱性类天疱疮血中循环抗基底膜抗体进行研究。发现传统的ＩＩＦ法阳性率为６５％（１３／２０），分离皮肤ＩＩＦ法阳性率为１００％（２０／２０）。分离皮肤法不单敏感性明显高于传统方法，且能知道抗体在基底膜的结合部位，比传统方法更有助于类天疱疮和几种表皮下大疱病的鉴别诊断。

免疫磁珠负性富集结合免疫荧光抗体技术检测卵巢癌患者外周血CTCs的方法建立和应用

目的建立基于细胞学水平的循环肿瘤细胞负性富集技术来检测卵巢上皮性癌(卵巢癌)患者外周血循环肿瘤细胞。方法体外培养卵巢癌SKOV-3细胞,按一定比例掺入到2 ml健康人外周静脉血中,应用免疫磁珠为基础的负性富集结合免疫荧光抗体技术对循环肿瘤细胞进行定量检测。评价该方法富集靶细胞的回收率,并用上述方法检测32例卵巢癌患者和10例对照者外周血中的循环肿瘤细胞。结果①在健康志愿者2 ml外周血掺入不同数目SKOV-3细胞的条件下,肿瘤细胞的回收率在64%~80%之间,掺入细胞间回归方程为Y=0.782X-1.408,相关系数为0.998。②10例对照者外周血中未检测到CK8/18+,18例卵巢癌患者的外周血中检测到CK8/18+,阳性率为56.3%(18/32,X^2=7.681,P<0.01)。③CTCs阳性与远处转移密切相关(X^2=5.776,P<0.05)。结论免疫磁珠负性富集结合免疫荧光抗体技术检测卵巢癌患者外周血循环肿瘤细胞的方法可能具有一定的临床应用价值。

联合免疫磁化分选技术和实时荧光定量RT-PCR检测结直肠癌外周血肿瘤细胞及其临床意义

目的建立联合应用免疫磁化分选技术和实时荧光定量RT-PCR检测循环肿瘤细胞的方法,并探讨定量检测结直肠癌患者外周血肿瘤细胞的临床意义。方法体外培养结肠癌HCT-116细胞,与5 ml健康人外周静脉血混合,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。分离后的标本分为免疫磁珠富集组(A组)和非富集组(B组),比较实时荧光定量RT-PCR方法检测其中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达水平。抽取22例初治的结直肠癌患者和22例健康人外周静脉血,标本分为免疫磁珠富集组(C组)和非富集组(D组),健康者标本设为E组,比较三组hTERT-mRNA的表达水平,并探究与临床病理参数的关系。结果 A组hTERT-mRNA表达水平显著高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。22例结直肠癌患者中,C组hTERT-mRNA表达水平显著高于D组(P<0.05)。结直肠癌患者C组hTERT-mRNA表达水平显著高于健康对照E组(P<0.05)。结直肠癌患者hTERT-mRNA表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位和肿瘤浸润深度无显著相关(P>0.05),与患者淋巴结有无转移和TNM分期呈显著相关(P<0.05)。结论联合应用免疫磁化分选技术和RT-PCR的检测方法 ,通过测定hTERT-mRNA表达水平可定量检测外周血肿瘤细胞,检测灵敏度优于单纯RT-PCR检测方法。结直肠癌患者外周血hTERT-mRNA的表达水平与淋巴结转移和TNM分期显著相关。

基于磁分选技术和间接免疫荧光技术的肺癌A549细胞的分离检测

采用磁分选技术及间接免疫荧光技术分离检测肺癌循环肿瘤细胞(CTCs).将表皮生长因子受体(EGFR)抗体连接到四氧化三铁(Fe3O4)磁珠表面构建免疫磁珠(MNPs-Anti-EGFR),通过EGFR抗体和肺癌A549细胞的表面抗原的特异性结合,将免疫磁珠与肺癌细胞结合.通过磁场作用,使肺癌细胞在磁场的作用下从混合细胞中分离富集.分离出的细胞利用间接荧光技术在其细胞表面连接结合PE荧光团的特异性抗体,并用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对细胞核染色以定位细胞位置.通过倒置荧光显微镜的观察,从而实现对肿瘤细胞的定量计数检测.实验结果显示该方法对肺癌A549细胞具有较好的检测灵敏度和检测下限,检测下限可达3 cells/m L.

某全自动循环荧光免疫分析仪cTnⅠ项目的性能验证

目的对星童Pylon3D全自动循环增强荧光免疫分析仪肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)定量检测系统进行性能评估。方法参照美国临床和实验室标准化协会(CLSⅠ)相关文件,通过室内质控数据分析该仪器cTnⅠ项目的精密度、正确度、灵敏度、线性范围、生物参考区间,并与相应方法学进行比对试验,与厂商声明的性能或公认的质量目标进行比较。结果 cTnⅠ项目低、高水平标本的批内变异系数(CV)分别为6.13%和7.05%,均小于厂家最大允许误差(10%),且均小于1/4允许总误差(TEa);灵敏度验证合格;低、高水平质控品的检测结果与靶值的相对偏倚为13.50%和5.29%,<1/4TEa;检测的线性范围与厂家提供的范围相近;cTnⅠ的测量值在提供的参考区间内;星童免疫荧光法与西门子化学发光法检测的cTnⅠ结果有较好的相关性。结论该仪器检测cTnⅠ的主要分析性能既符合质量目标要求,又能满足临床需要,所采用的验证方案简便可行,具有实用价值。

时间分辨荧光免疫分析方法的光谱研究

时间分辨荧光免疫分析法是用三价稀土离子及其螯合剂作为示踪物 ,标记蛋白质、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞 ,待反应体系 (如 :抗原抗体免疫反应、生物素亲合反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等 )发生后 ,用时间分辨荧光技术测定反应体系中分析物的浓度 ,达到定量分析的目的。它之所以能够继放射性同位素标记、酶标记、化学发光、电化学发光后成为一种更新、更灵敏的检测方法 ,主要取决于它所用标记物三价稀土离子螯合物独一无二的物理及化学性质。主要报导了对使用的长寿命荧光团Eu3 + 螯合物的光谱研究结果 ,时间分辨技术及荧光增强技术的原理。实验表明 :选择 336～ 337nm的激发波长 ,有利于Eu3 + 的配位二酮体的激发及能量转移。

腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠成体肝干细胞中的表达

目的:研究腺病毒感染成体肝干细胞介导外源基因表达的可行性及建立稳定表达EGFP的成体肝干细胞.方法:采用细菌同源重组法构建CMV驱动的EGFP报告基因腺病毒载体pAd-CMV-EGFP,在293细胞中包装制备腺病毒,并用重组腺病毒感染体外培养的成体肝干细胞WB-F344,观察腺病毒携带的外源基因EGFP在WB-F344细胞中的表达,及分析病毒对肝干细胞的感染效率.进一步单克隆培养纯化建立稳定表达EGFP的细胞株(WB-EGFP),并采用流式细胞技术、免疫细胞化学技术、诱导分化实验以观察其生物学特性.结果:成功构建腺病毒载体,并包装制备高滴度的重组腺病毒Ad-EGFP.重组腺病毒有效的感染WB-F344细胞,感染率约40-70%.建立WB-EGFP细胞株,持续传代8-9代均较稳定表达EGFP及肝干细胞表面标记,仍保持干细胞样的增生、分化等基本生物学特性.结论:腺病毒可高水平的介导外源基因表达于成体肝干细胞,是有效的基因转移系统.稳定表达EGFP的肝干细胞株观察直观、可连续传代,并保持干细胞的生物学特性,可用于体内外肝细胞研究中的追踪、鉴定.

循环增强荧光免疫发光法与化学发光免疫法检测血清HCG的有效性对比分析

探讨并比较循环增强荧光免疫发光法与化学发光免疫法检测血清HCG的有效性。方法 选取2022年11月-2024年3月在江苏省淮安市中医院就诊的女性患者240例,作为本次的研究对象,根据超声诊断,分为未孕组(n=120)、早孕组(n=80)、异位妊娠组(n=40),三组分别均分为两组,采集两组血液样本,分别采用循环增强荧光免疫发光法与化学发光免疫法检测血清HCG,并对检测结果进行统计学分析。结果 所有患者检测的血清HCG结果均与其临床诊断相吻合,诊断符合率为100%;采用循环增强荧光免疫发光法与化学发光免疫法两种不同方法检测未孕组、早孕组、异位妊娠组血清HCG水平,对相应两组进行差异性比较,P均大于0.05,差异均无统计学意义。结论 循环增强荧光免疫发光法与化学发光免疫法两种方法均具有较高的有效性,所检测血清HCG数据均非常可靠,临床诊断价值均较高,值得临床推广使用。

循环肿瘤细胞检测在子宫平滑肌肉瘤诊断中的应用效果

目的探讨循环肿瘤细胞(CTC)在子宫平滑肌肉瘤中的阳性表达率及其对子宫平滑肌肉瘤诊断的价值。方法选取收治的初治子宫平滑肌肉瘤患者20例为恶性组,另选取同期入院的子宫平滑肌瘤患者20例为良性组,同期健康体检者20例为对照组,应用淋巴细胞分离和免疫磁珠富集技术检测3组受试者外周血阳性表达率,并分析CTC与子宫平滑肌肉瘤临床病理特征的关系。结果恶性组CTC阳性率显著高于良性组及对照组,且良性组CTC阳性率显著高于对照组(P<0.05);经CTC阳性率与子宫平滑肌肉瘤病理特征关系分析显示,淋巴结转移、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、组织学分级为Ⅲ级、核分裂数≥10/10HPF的患者CTC阳性率明显升高(P<0.05);恶性组间质型CTC所占比例显著高于良性组,上皮型CT所占比例低于对照组(P<0.05)。结论 CTC能评估与预测子宫平滑肌肉瘤患者病情严重程度,具有一定的诊断价值。

外周血循环肿瘤细胞与乳腺癌临床病理特征关系的研究

目的研究外周血循环肿瘤细胞(CTC)在乳腺癌患者中的表达及其临床意义。方法采用免疫磁珠富集阴性技术联合荧光原位杂交法检测129例乳腺癌和63例良性乳腺病患者(宜兴市肿瘤医院2017年1月至2019年12月收治)中外周血CTC的表达情况,分析两组患者外周血CTC的表达差异及CTC与乳腺癌临床病理特征的相关性。结果免疫磁珠富集阴性技术联合荧光原位杂交法检测外周血CTC的灵敏度及特异度分别为79.1%和93.7%,受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.881。乳腺癌患者中CTC检测阳性率为79.1%(102/129),明显高于良性乳腺病组的6.3%(4/63),P<0.05。CTC检测阳性率的高低在乳腺癌不同年龄、病理类型、临床分期及Her2表达状态中差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫磁珠富集阴性技术联合荧光原位杂交法检测外周血CTC具有较高的灵敏度及特异度;检测外周血CTC有助于评估乳腺癌患者的病情。

乳腺癌患者外周血中循环肿瘤细胞的检测及临床意义

目的探讨乳腺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的检测及临床意义。方法选取福建省漳州市医院乳腺外科2020年12月—2022年12月收治的200例乳腺癌患者纳入研究,并选择同期在福建省漳州市医院乳腺外科接受手术的40例良性乳腺病进行对照研究,采用纳米基底富集分离及免疫荧光原位杂交技术检测两组CTC检测阳性率,检测CTC人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her2)表达,分析CTC与临床病理特征的关系。结果200例乳腺癌组织中,CTC阳性130例,占比65.00%;40例乳腺良性组织未检测到CTC,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌患者阳性检测与血管侵犯有关(P<0.05);而与年龄、肿瘤大小、病理类型、雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)、淋巴结转移等均无相关(P>0.05);130例CTC阳性检查出95例Her2阳性。外周血检查出CTC存在Her2阳性有80例,两者比较一致性为84.21%(80/95)。结论外周血CTC与乳腺癌肿瘤发生远处转移存在一定关联,有助于评估乳腺癌患者的病情;CTC Her2检测可能有助于实时判断Her2的状态,对预后有重要意义。

临床静脉输血的护理现况

输血可以补充血容量，改善循环功能，增加携氧能力，提高血浆蛋门，增强免疫力和凝血功能，在战伤救治及现代医疗中是一项重要措施。需要多部门（血站、输血科、临床科）众多卫生技术人员（医生、护上、技师）共同完成。护上是输血治疗过程中最后一步的操作者，在其中起着非常重要的作用。本文就临床静脉输血的护理进展综述如下。

两种检测降钙素原方法的比较研究

目的采用循环增强荧光免疫法和电化学发光法定量检测降钙素原(PCT),对其检测结果的一致性进行比较分析。方法以电化学发光法为对比方法,循环增强荧光免疫法为实验方法,用两种方法分别检测219例住院患者的样本。循环增强荧光免疫法检测的血清组(Core血清组)结果、微量全血组(Core微量全血组)结果与电化学方法检测的血清组(Roche血清组)结果进行两两进行配对t检验和相关性分析,计算在医学决定水平(0.5ng/mL与2.0ng/mL)的相对灵敏度、相对特异性、约登指数并进行Kappa一致性检验。结果Core血清组、Core微量全血组与Roche血清组三者之间比较均无统计学差异(P>0.05)。Core血清组与Roche血清组呈正相关(r=0.993,P<0.01),一元直线回归方程为Y=-0.061+1.041 X(0.04≤X≤60)。Core微量全血组与Roche血清组成正相关(r=0.989,P<0.01),一元直线回归方程为Y=0.022+1.023 X(0.04≤X≤60)。Core血清组和Core微量全血组呈正相关(r=0.986,P<0.01),一元直线回归方程为Y=0.129+0.973 X(0.04≤X≤60)。三个对比组在医学决定水平(0.5ng/mL和2.0ng/mL)的相对灵敏度均大于92%,相对特异性均大于95%,约登指数与Kappa值均大于0.9,表明一致性较好。结论循环增强荧光免疫法与电化学发光法检测结果具有很好的一致性,符合临床检测要求。

老年食管胃交界腺癌患者循环肿瘤细胞检测的临床意义

目的通过检测老年食管胃交界腺癌(AEG)患者外周血中的循环肿瘤细胞(CTCs),探讨CTCs与老年AEG患者临床特征及预后的关系。方法回顾性分析聊城市人民医院2016年8月至2020年5月95例老年AEG患者的临床资料,治疗前的1周均采用阴性富集-免疫荧光原位杂交技术(NE-FISH)检测CTCs,分析CTCs计数阳性与患者临床特征的关系,通过随访获取老年AEG患者无进展生存期(PFS)及总生存期(OS),采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析CTCs计数与老年AEG患者预后指标(PFS、OS)的关系。结果95例老年AEG患者CTCs阳性(CTCs≥2)率为72.6%(69/95)。老年AEG患者CTCs阳性与患者脉管内瘤栓、TNM病理分期、T分期、淋巴结转移、是否手术均密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析示,与CTCs<2组比较,CTCs≥2组老年AEG患者中位PFS(12个月vs 50个月)及中位OS更短(20个月vs 50个月),差异有统计学意义(P<0.01)。结论运用NE-FISH技术对老年AEG患者行外周血CTCs检测是可行的,CTCs阳性与老年AEG患者肿瘤转移、病情进展密切相关,CTCs≥2可能是老年AEG患者预后不良的预测指标。

瞬时转染HBx基因到人正常胆管上皮细胞并观测其对hTERT mRNA的表达影响

目的通过研究HBx基因转染到人正常胆管上皮(HBECs)后对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的转录调节作用,以阐明HBV感染在胆管癌发生中的作用机制。方法瞬时转染HBx基因到体外培养的HBECs,同时转染含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的克隆载体以判定转染率;RT-PCR分析转染后HBECs内hTERT mRNA的表达变化;并通过细胞免疫组化技术了解转染细胞内HBx蛋白的表达。结果经EGFP判定的转染率约为15%;未经转染或转染空载体的HBECs不表达hTERT mRNA,而转染HBx基因的HBECs可表达明显的hTERT mRNA;只有在转染了HBx基因的HBECs可检测到HBx蛋白表达。结论HBx基因转染能激活hTERT mRNA的转录表达,这种顺式调节作用可能是胆管上皮增殖、分化并恶化的主要机制。