循环游离DNA在食管癌早期诊断中的价值分析

目的探究循环游离DNA(cfDNA)在食管癌早期诊断中的应用价值。方法选择2019年8月至2022年8月武汉科技大学附属天佑医院收治的49例食管癌患者作为研究对象(设为食管癌组),另选择同期在该院进行健康体检的40名志愿者设为对照组。采用ELISA法测定血清CA19-9、细胞角蛋白片段19抗原21-1(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)和cfDNA水平,并分析血清cfDNA与食管癌患者临床病理特征的关系。采用Pearson相关性分析探究血清cfDNA水平与CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag水平的相关性。采用ROC曲线分析血清cfDNA、CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag水平对食管癌的诊断价值。结果食管癌组血清cfDNA、CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag水平均高于对照组(P均<0.05)。食管癌患者血清cfDNA与CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag水平均呈显著正相关(P均<0.05)。肿瘤最大径>3 cm、低分化和有淋巴结转移的食管癌患者血清cfDNA水平分别高于肿瘤最大径≤3 cm、中/高分化和无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P均<0.05)。血清cfDNA、CA19-9、CYFRA21-1和SCC-Ag联合检测诊断食管癌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、AUC均分别高于任一项指标单独检测,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论食管癌患者血清cfDNA高表达,且其与肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移均密切相关。血清cfDNA、CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag联合检测有助于提高食管癌的早期诊断率,具有临床推广价值。

循环游离DNA在肾脏疾病中的研究进展

肾脏疾病是一类严重威胁人类健康的疾病,其发病率及死亡率高,寻求高灵敏度的生物学指标有助于早期诊断和改善预后。循环游离DNA是一类存在于血浆、尿液及其他体液中游离于细胞外的双链DNA片段。循环游离DNA参与机体内在的炎症反应和凝血过程,在肾脏疾病中显著升高,可作为肾脏疾病的潜在生物标志物,对疾病的诊断和预后有重大意义。本文对循环游离DNA的生物学特性、在肾脏疾病中的作用及应用进展进行综述,以期为肾脏疾病的早期诊断及预后提供参考。

基于甲基化特异性PCR的外周血循环游离DNA甲基化检测对乳腺癌诊断价值的荟萃分析

目的通过Meta分析系统评估基于甲基化特异性PCR(MSP)的外周血循环游离DNA(cfDNA)甲基化检测对乳腺癌的诊断价值。方法检索PubMed、Embase、Cochrane数据库,检索时间为2011年1月至2021年12月,以“Breast neoplasms”“Breast cancer”“Methylation”“Cell-free DNA”等为检索词,检索有关血液循环cfDNA甲基化用于乳腺癌诊断的文献,根据纳入及排除标准筛选文献。使用QUADAS-2对纳入文献进行质量评价,提取研究数据并使用Stata 16.0对各效应量进行合并,分析异质性及来源,以Deek’s法检验发表偏倚。结果共检索318篇文献,最终纳入12篇文献的27项研究进行Meta分析,患者2195例,纳入研究存在高度异质性(I^(2)>50.00%)。采用随机效应模型合并灵敏度为0.43[95%CI(0.31~0.56)],合并特异度为0.97[95%CI(0.94~0.99)],合并阳性似然比(LR+)为16.30[95%CI(7.00~37.80)],合并阴性似然比(LR-)为0.59[95%CI(0.47~0.73)],合并诊断比值比(DOR)为28.00[95%CI(11.00~70.00)],合并AUC为0.85[95%CI(0.82~0.88)]。结论基于MSP的外周血cfDNA甲基化检测对乳腺癌有较高的辅助诊断价值。

循环游离DNA在常见肿瘤中的临床应用进展

循环游离DNA (cell-free DNA, cfDNA)容易采集和无创的优点使其在肿瘤早期诊断、良恶性鉴别、疗效检测、预后评价等临床应用中受到广泛的关注。此外,cfDNA还可以反映肿瘤大小、肿瘤转移等。为此,本文综述了cfDNA的临床应用,以期为临床疾病的诊断、疗效分析提供帮助。

多发性骨髓瘤血浆循环游离DNA定量检测和完整性分析

目的:研究血浆循环游离DNA(cf-DNA)在初诊多发性骨髓瘤(MM)患者筛查诊断中的作用,并探讨经化疗后患者的cf-DNA含量和完整性的变化在疾病评估中的作用。方法:收集35例初诊MM患者和18例健康志愿者的外周血标本,另选取MM患者中完成规范诱导化疗3个疗程的13例患者作为随访组。以ALU247片段及ALU115片段为目的基因,用荧光定量PCR检测患者及健康志愿者血浆中的cf-DNA含量,并以ALU247/ALU115比值计算cf-DNA的完整性。结果:MM患者ALU247、ALU115片段浓度和cf-DNA完整性均显著高于健康志愿者(均P<0.05)。经3个疗程诱导化疗的患者治疗后的ALU247和ALU115片段浓度以及cf-DNA的完整性均较治疗前显著降低(均P<0.05),且治疗前后cf-DNA完整性与血清M蛋白含量及骨髓异常浆细胞比例之间均存在较强正相关关系(r_(M蛋白)=0.703,r_(骨髓浆细胞)=0.705)。结论:cf-DNA对于MM的筛查诊断具有一定的积极意义。cf-DNA或许可以协同或者替代血清M蛋白含量及骨髓异常浆细胞比例评估患者的病情、疗效及预后。

磁共振动态增强结合血循环肿瘤细胞、循环游离DNA对乳腺癌的临床诊断研究

目的探讨磁共振动态增强(DCE-MRI)结合血循环肿瘤细胞(CTCs)、循环游离DNA(cfDNA)对乳腺癌的诊断价值。方法选取沧州市人民医院2020年6月至2021年11月符合纳入标准的乳腺癌病人82例(乳腺癌组)。另选同期65例乳腺良性病变且未合并其他疾病者作为良性组。比较两组DCE-MRI定量参数、CTCs、cfDNA水平,对比MRI特征,分析DCE-MRI结合CTCs、cfDNA诊断乳腺癌的价值。结果乳腺癌组DCE-MRI定量参数速度常数(K^(trans))值、速率常数(K_(ep))值、Alu247/115水平及CTCs计数分别为(0.18±0.04)min、(1.32±0.27)min、(12.97±2.14)个/毫升、0.97±0.32,比良性组高(0.05±0.01)min、(0.51±0.11)min、(10.15±1.45)个/毫升、0.55±0.12(P<0.05)。良性组边缘多光滑,形状规则,内部强化以均匀为主,时间-信号强度曲线(TIC)以Ⅰ型多见,早期增强率<60%;乳腺癌组边缘毛刺征、形状不规则,内部不均匀强化为主,以TIC分型Ⅲ型多见,早期增强率<60%占比高。两组MRI形态表现比较差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期者CTCs数量、Alu247/115水平明显高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期者(P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析结果显示,三者联合(DCE-MRI+CTCs+cfDNA)诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度分别为0.86、0.93、0.84,诊断效果优于单一检测CTCs、cfDNA检测(P<0.05)。结论乳腺癌病人CTCs、cfDNA存在异常表达,可能与病人临床分期、淋巴结转移有关,相对单一实验室检测,DCE-MRI结合CTCs、cfDNA检测能获取更多可靠信息。

循环游离DNA在早期肝细胞癌筛查中的研究进展

肝细胞癌(HCC)是全球最常见恶性肿瘤之一,是肝硬化患者死亡的最常见原因。我国是一个乙型肝炎病毒(HBV)感染高发国家,每年全球新发肝癌病例中大约50%来自我国,尽管目前HCC治疗手段层出不穷,由于缺乏有效的早期筛查方法,70%~80%的患者就诊时已经处于晚期,失去了手术切除及肝移植等根治性治疗机会,患者5年总生存率仅为14.1%[1]。因此,如何实现HCC早期诊断是当前研究的热点和难点问题。目前多项实验表明,循环游离DNA(cfDNA)含有特异性的肿瘤相关基因特征,检测cfDNA可提高早期HCC诊断的敏感性和特异性。本文就cfDNA在HCC早期诊断中的临床应用及前景作一综述。

血浆循环游离DNA水平及其完整性用于肺结节良恶性的诊断研究

目的 探讨血浆循环游离DNA(cfDNA)水平及其完整性对肺结节良恶性的诊断价值。方法 选取110例肺结节患者作为研究对象,根据病理诊断结果分为良性肺结节组60例与恶性肺结节组50例,另选取同期健康体检者30例设为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血浆癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血浆cfDNA水平和cfDNA完整性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析并比较血浆cfDNA水平、cfDNA完整性、CEA、Cyfra21-1单独和联合应用对恶性肺结节的诊断效能。结果 恶性肺结节组血浆cfDNA、CEA、Cyfra21-1水平依次为1 154.83(452.85,1 642.31)、7.93(3.21,10.31)、5.75(2.85,8.12) ng/mL,分别高于良性肺结节组的385.43(176.45,704.55)、2.67(1.36,5.45)、2.74(1.43,3.96) ng/mL,差异有统计学意义(P<0.001);恶性肺结节组患者cfDNA完整性为0.68(0.47,0.91),高于良性肺结节组的0.37(0.26,0.59),差异有统计学意义(P<0.001)。血浆cfDNA水平和cfDNA完整性与恶性肺结节患者性别、年龄、是否吸烟、肿瘤直径、病理类型、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。ROC曲线显示,血浆cfDNA水平、cfDNA完整性诊断恶性肺结节的曲线下面积、敏感度、特异度均大于或高于CEA、Cyfra21-1;血浆cfDNA、CEA、Cyfra21-1水平和cfDNA完整性联合诊断恶性肺结节的敏感度、特异度均高于四者单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 血浆cfDNA水平和cfDNA完整性对恶性肺结节具有一定的诊断价值,可作为肺结节良恶性辅助诊断的分子生物学指标。

血清循环游离DNA与类风湿关节炎患者临床指标的关系

目的:研究循环游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血中含量对RA早期诊断和疾病活动度的评估价值,探讨cfDNA含量与RA的免疫学诊断指标及疾病活动度评估的相关指标类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibodies,抗CCP抗体)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和28个关节疾病活动指数评分(disease activity score of 28 joints,DAS28-ESR)间的关系。方法:收集80例初诊且未接受抗风湿类药物治疗的RA患者为观察组(RA组),40例健康人为对照组(HC组),收集两组血清,测定cfDNA含量并计算完整度,与收集的RA患者临床指标进行相关性分析。结果:RA组的cfDNA高于HC组(P<0.05),但与诊断性血清学指标不相关(P>0.05)。根据28个关节疾病活动指数评分(DAS28-ESR评分)对RA患者进行疾病活动度分层,发现cfDNA含量在DAS28-ESR评分高组高于评分低组(P<0.05),cfDNA与DAS28-ESR、CRP和ESR具有相关性(P<0.05)。结论:血清cfDNA在RA患者体内含量增加,与炎症反应有相关性,对RA有诊断价值,可能是RA致病的独立危险因素。

结直肠癌患者血浆循环游离DNA的RAS突变与临床特征的关系

目的探讨结直肠癌患者血浆循环游离DNA(cfDNA)与肿瘤组织DNA的RAS基因突变检测的一致性,以及与临床特征的关系。方法收集71例结直肠癌患者的血浆及肿瘤组织标本。采用多重荧光PCR法检测血浆标本cfDNA的RAS的基因突变状态,并与肿瘤组织标本的相应基因突变状态对比分析。分析血浆RAS基因突变状态与患者临床特征的关系。结果血浆cfDNA的RAS突变率为32.39%,组织DNA的RAS突变率为50.70%,两种标本的RAS突变检测的一致率为76.06%,血浆cfDNA与组织DNA的RAS突变检测结果一致(Kappa=0.523,P=0.000)。血浆cfDNA检测的敏感性为58.33%、特异性为94.29%、阳性预测值为91.30%、阴性预测值为68.75%。血浆cfDNA的RAS突变状态与结直肠癌患者年龄、性别、分期(Ⅳa与Ⅳb)、原发肿瘤部位、肺转移、CEA水平、CA199水平等无明显相关性,而血浆cfDNA的RAS突变与结直肠癌患者肝脏转移有相关性(P=0.045),肝转移患者较未发生肝转移的患者突变率升高。结论血浆cfDNA可以作为无法获得组织标本的结直肠癌患者的RAS基因检测的替代标本,具有临床应用价值,且结直肠癌患者肝脏转移cfDNA RAS突变率升高。

循环游离DNA完整性检测的临床应用研究进展

循环游离DNA(ccfDNA)是一种新的肿瘤标志物。现普遍认为细胞凋亡产生DNA短片段,长度为185～200 bp;而肿瘤细胞坏死产生的DNA片段,由于不完全消化而呈现长度多样化,以长链DNA片段为主。ccfDNA完整性检测广泛应用于多种肿瘤。DNA完整性一般以DNA长、短片段扩增产物的浓度比值来表示,其对肿瘤早期诊断、肿瘤分期、分级、放疗和化疗疗效监测等有重要意义。本文就ccfDNA完整性检的检测方法及其临床应用作一综述。

人体循环游离DNA应用的研究进展

循环游离DNA(circulating cell-free DNA,ccfDNA)系存在于人及动植物体液中、在细胞外部处于游离状态的DNA分子。目前对其的研究均集中于肿瘤及妇产科学方面。本文对ccfDNA的生物学性质及在肿瘤学和妇产科学中应用的研究进展进行综述。

循环游离DNA在乳腺癌中的临床应用

循环游离DNA以细胞外游离形式存在于血液中,可由正常细胞和癌细胞释放。乳腺癌患者血液中循环游离DNA水平高于正常人,且循环游离DNA可以反映癌组织的基因突变、甲基化状态、拷贝数改变、杂合子丢失等特征,是乳腺癌诊断、治疗、预后检测中具有巨大潜力的生物学指标。本综述简要介绍了循环游离DNA的生物学特性,并从定量及定性检测两方面对循环游离DNA近年来在乳腺癌中的临床应用进行较全面的阐述。

外周血液中循环肿瘤细胞和循环游离DNA检测在乳腺癌患者中的应用

目的探究外周血液中循环肿瘤细胞(CTCs)和循环游离DNA(cfDNA)检测在乳腺癌患者中的应用效果。方法收集本院2018-02—2019-02收治的94例乳腺癌患者、48例乳腺良性疾病患者及56例健康体检者外周血液标本,采用基于尺寸的高通量微流控芯片捕获CTCs、基于Alu序列的实时荧光定量PCR检测游离DNA长、短片段(247 bp、115 bp),并以长、短片段扩增产物比值作为DNA完整性指标。分析CTCs和cfDNA与乳腺癌临床参数的关系,并评估其在乳腺癌诊断中的作用。结果乳腺癌患者在CTCs、血浆cfDNA的基于Alu序列的Alu 247/115的比值上显著比健康体检者、乳腺良性疾病者高(P<0.05),乳腺癌患者外周血中CTCs的数量与血浆cfDNA的基于Alu序列的Alu 247/115的比值在年龄、病理分期、淋巴结转移、分子分型、远处转移、PR有一定的相关性(P<0.05),以病理学结果作为金标准,以约登指数最大点对应的临界值,以乳腺良性疾病患者和健康体检者作对照,当CTCs cut-off值为7.68个/ml,灵敏度为80.4%,特异度为96.4%,ROC曲线下面积为0.885(95%CI 0.805~0.965);Alu 247/115的cut-off值为0.431时,特异度为71.4%,ROC曲线下面积为0.727(95%CI 0.608~0.847),灵敏度为71.7%。结论 CTCs与cfDNA可能是乳腺癌辅助诊断的潜在生物学指标,CTCs检测的是肿瘤细胞,cfDNA检测的是肿瘤的DNA片段,可作为判断乳腺癌患者的病情变化和诊断的良好辅助指标,此方法值得应用与推广。

循环游离DNA甲基化模式分析在心肌梗死中的研究进展

循环游离DNA(cfDNA)是循环体液中游离状态的DNA,其在体内的释放被认为与细胞的坏死、凋亡等相关。近年来cfDNA甲基化检测作为一种"液体活组织检查"技术已成为疾病诊疗中的研究热点。心肌梗死后外周血循环中cfDNA的含量升高,并发现cfDNA升高与心肌梗死后并发症的发生有相关性。近年来通过甲基化模式分析寻找到心肌细胞特异性的cfDNA,使cfDNA检测能够为心肌梗死提供更多客观的评估证据。该文综述近几年国内外cfDNA甲基化模式分析在心肌梗死中的研究进展。

循环游离DNA检测在结直肠癌诊治中应用的研究进展

循环游离DNA(ccf-DNA)是指存在于血液、游离于细胞之外的DNA片段。ccf-DNA检测正逐渐成为肿瘤筛查、早期诊断、预后评估以及抗癌治疗有效性监测的重要方法。通过相对无创方法获得的ccf-DNA可代替通过有创手段获得的结直肠癌(CRC)活检标本。ccf-DNA作为一种无创潜在肿瘤标志物在CRC早期诊断、疾病进展、疗效监测中有较高的应用价值。

原发性肝癌患者血浆循环游离线粒体DNA定量分析及其诊断意义

目的分析血浆循环游离线粒体DNA（CCF mt DNA）水平与原发性肝癌（HCC）的相关性,探讨其作为HCC标志物的可行性。方法收集HCC患者及体检健康者的血浆标本各60例,提取全基因组DNA;实时荧光定量PCR分析线粒体CoⅡ一段保守且与核基因组无同源的序列;构建含该靶序列的已知浓度的质粒作为标准品,系列稀释后定量检测CCF mt DNA的含量;独立样本t检验分析HCC患者与体检健康者CCF mt DNA水平的差异;ROC曲线分析CCF mt DNA诊断HCC的效能。结果HCC患者CCF mt DNA水平[（0.591±0.014）×106拷贝/m L]显著高于健康对照组[（0.364±0.012）×106拷贝/m L],差异有统计学意义（t=12.27,P〈0.05）;ROC曲线结果显示,以0.470×106拷贝/m L为cut off值,CCF mt DNA诊断HCC的敏感性为83.3%,特异性为88.3%;ROC曲线下面积（AUCROC）=0.916,95%CI：0.864-0.968,P〈0.05。结论 HCC患者CCF mt DNA水平升高,且诊断HCC的敏感性、特异性较高,可能作为肿瘤标志物用于HCC诊断。

循环游离DNA在多发性肌炎和皮肌炎中的作用

目的:研究循环游离DNA(cfDNA)在多发性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)中的作用。方法:使用PicoGreen试剂盒检测61例PM/DM患者、34例系统性红斑狼疮(SLE)患者和48例健康对照的血浆cfDNA浓度,并与患者的血清学指标做相关性分析。结果:cfDNA浓度在PM/DM组是247.1±61.09ng/ml,显著高于健康对照组(197.1±31.36ng/ml,P<0.01),显著低于SLE组(281.9±82.21ng/ml,P<0.01)。cfDNA与血沉和血清球蛋白呈显著正相关(P<0.01,P<0.05),与C3呈显著负相关(P<0.01)。结论:cfDNA可能与PM/DM疾病活动度相关。

循环游离DNA的定量检测及面临的问题

循环游离DNA(circulating cell free DNA,cfDNA)与人类疾病之间存在着密切联系。近年来,cfDNA做为一种无创检测生物标志物,展现出临床应用前景。人们针对其含量较低的特点,进行了大量研究,开发出了各种较为可靠的定量检测方法。但目前cfDNA的定量检测仍然面临问题及争议,缺乏规范和标准化的流程。本文对cfDNA的来源组成、定量检测及存在的问题进行了归纳整理及分析,希望能对提高cfDNA的定量检测的可靠性提供有益的参考。

肿瘤相关循环游离核酸的研究进展

循环游离核酸是指存在于人体血液循环中,游离于细胞外的微量内源性或外源性核酸片段。肿瘤患者的血液中游离核酸的含量明显高于健康人群,并具有与肿瘤的发生、发展相关的特征性改变,如基因突变、甲基化、杂合性丢失、片段完整性改变、microRNA的异常表达等。对血液中游离核酸的定性与定量检测,在肿瘤的筛查、诊断、个体化治疗方案的制定、病情的监测以及预后评价中均有潜在的价值。