原发性肝癌患者血浆循环游离线粒体DNA定量分析及其诊断意义

目的分析血浆循环游离线粒体DNA（CCF mt DNA）水平与原发性肝癌（HCC）的相关性,探讨其作为HCC标志物的可行性。方法收集HCC患者及体检健康者的血浆标本各60例,提取全基因组DNA;实时荧光定量PCR分析线粒体CoⅡ一段保守且与核基因组无同源的序列;构建含该靶序列的已知浓度的质粒作为标准品,系列稀释后定量检测CCF mt DNA的含量;独立样本t检验分析HCC患者与体检健康者CCF mt DNA水平的差异;ROC曲线分析CCF mt DNA诊断HCC的效能。结果HCC患者CCF mt DNA水平[（0.591±0.014）×106拷贝/m L]显著高于健康对照组[（0.364±0.012）×106拷贝/m L],差异有统计学意义（t=12.27,P〈0.05）;ROC曲线结果显示,以0.470×106拷贝/m L为cut off值,CCF mt DNA诊断HCC的敏感性为83.3%,特异性为88.3%;ROC曲线下面积（AUCROC）=0.916,95%CI：0.864-0.968,P〈0.05。结论 HCC患者CCF mt DNA水平升高,且诊断HCC的敏感性、特异性较高,可能作为肿瘤标志物用于HCC诊断。

肉碱缺乏症性心肌病患儿血浆循环游离线粒体DNA定量分析及其临床意义

目的检测肉碱缺乏症性心肌病患儿血浆循环游离线粒体DNA(ccf-mtDNA)水平并探讨其临床意义。方法前瞻性病例对照研究。收集2017年7月至2022年6月吉林大学第一医院小儿心血管科病房收治的7例以心肌病为主要临床表现的原发性肉碱缺乏症(PCD)患儿(PCD组)、同期就诊的16例扩张型心肌病(DCM)患儿(DCM组)及50例健康体检儿童(健康对照组)血液样本,采用实时荧光定量PCR方法检测各组血浆ccf-mtDNA水平并比较其差异,分析PCD组中血浆ccf-mtDNA水平与血游离肉碱水平、心功能的相关性,并监测PCD组应用左旋肉碱治疗后ccf-mtDNA的水平变化。3组间比较采用Kruskal-Wallis检验,PCD组与健康对照组比较采用Mann-Whitney检验,PCD组内治疗前后比较采用配对Wilcoxon秩和检验,变量间相关分析采用Logistic回归分析。结果PCD组、DCM组患儿血浆ccf-mtDNA水平分别为3.69×10^(6)(1.09×10^(6)~7.26×10^(6))拷贝/L、0.99×10^(6)(0.25×10^(6)~4.10×10^(6))拷贝/L,明显高于健康对照组[0.09×10^(6)(0.01×10^(6)~0.35×10^(6))拷贝/L](H=33.34、24.69,均P<0.001),且PCD组较DCM组更高(H=6.31,P<0.05)。PCD组应用左旋肉碱治疗前:血浆ccf-mtDNA水平与血游离肉碱水平、左心室射血分数呈负相关(r=-0.85、-0.82,均P<0.05),与改良Ross评分、N-末端B型利钠肽原水平呈正相关(r=0.81、0.83,均P<0.05)。PCD组应用左旋肉碱治疗后:血浆ccf-mtDNA水平逐渐下降,血游离肉碱水平、心脏功能逐渐恢复。血浆ccf-mtDNA水平自治疗第3个月[0.96×10^(6)(0.50×10^(6)~2.27×10^(6))拷贝/L]开始,较治疗前明显下降(Z=2.24,P<0.05),在第6、9及12个月分别为0.27×10^(6)(0.18×10^(6)~0.76×10^(6))拷贝/L、0.29×10^(6)(0.19×10^(6)~0.78×10^(6))拷贝/L及0.16×10^(6)(0.10×10^(6)~1.06×10^(6))拷贝/L,与健康对照组[0.09×10^(6)(0.01×10^(6)~0.35×10^(6))拷贝/L]比较差异均无统计学意义(Z=1.23、1.09、2.12,均P>0.05)。结论血浆ccf-mtDNA可能是肉碱缺乏症性心肌病的致病因素之一,其水平对此疾病的心脏病情评估具有一定的临床价值。

循环游离线粒体DNA对慢性心力衰竭病情判断及预后的价值

目的探讨循环游离线粒体DNA(ccf mtDNA)对慢性心力衰竭(CHF)病情判断及预后的价值。方法选取2017年7月-2018年12月于上海健康医学院附属嘉定区中心医院心内科住院治疗的50例CHFⅣ级患者为研究对象(CHF组);同期选取健康体检者50例作为对照(对照组);根据出院90 d内是否发生心血管事件将CHF患者分为心血管事件组和非事件组。两组一般资料分析;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清ccf mtDNA水平;分析CHF患者近期不同预后组血清ccf mtDNA水平及心力衰竭指标;分析CHF患者血清ccf mtDNA水平与心力衰竭指标相关性;分析影响CHF患者近期预后的因素。结果两组性别、年龄、BMI、吸烟比例、患高血压比例、高血脂比例、肌酐比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。CHF组ccf mtDNA、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、氨基N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末内径(LVESD)显著高于对照组,左心室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CHF患者发生心血管事件组ccf mtDNA、hs-CRP、NT-proBNP、LVEDD、LVESD显著高于非事件组,LVEF、LVFS显著低于非事件组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CHF患者血清中ccf mtDNA水平与hs-CRP、NT-proBNP、LVEDD、LVESD均呈正相关(P<0.05),与LVEF、LVFS呈负相关(P<0.05)。ccf mtDNA、hs-CRP、NT-proBNP是影响CHF患者发生心血管事件不良预后的危险因素,LVEF、LVFS是影响CHF患者发生心血管事件不良预后的保护因素。结论血清ccf mtDNA水平对CHF病情诊断及预后评定均具有重要意义。

循环游离DNA在食管癌早期诊断中的价值分析

目的探究循环游离DNA(cfDNA)在食管癌早期诊断中的应用价值。方法选择2019年8月至2022年8月武汉科技大学附属天佑医院收治的49例食管癌患者作为研究对象(设为食管癌组),另选择同期在该院进行健康体检的40名志愿者设为对照组。采用ELISA法测定血清CA19-9、细胞角蛋白片段19抗原21-1(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)和cfDNA水平,并分析血清cfDNA与食管癌患者临床病理特征的关系。采用Pearson相关性分析探究血清cfDNA水平与CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag水平的相关性。采用ROC曲线分析血清cfDNA、CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag水平对食管癌的诊断价值。结果食管癌组血清cfDNA、CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag水平均高于对照组(P均<0.05)。食管癌患者血清cfDNA与CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag水平均呈显著正相关(P均<0.05)。肿瘤最大径>3 cm、低分化和有淋巴结转移的食管癌患者血清cfDNA水平分别高于肿瘤最大径≤3 cm、中/高分化和无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P均<0.05)。血清cfDNA、CA19-9、CYFRA21-1和SCC-Ag联合检测诊断食管癌的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、AUC均分别高于任一项指标单独检测,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论食管癌患者血清cfDNA高表达,且其与肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移均密切相关。血清cfDNA、CA19-9、CYFRA21-1、SCC-Ag联合检测有助于提高食管癌的早期诊断率,具有临床推广价值。

循环游离DNA在肾脏疾病中的研究进展

肾脏疾病是一类严重威胁人类健康的疾病,其发病率及死亡率高,寻求高灵敏度的生物学指标有助于早期诊断和改善预后。循环游离DNA是一类存在于血浆、尿液及其他体液中游离于细胞外的双链DNA片段。循环游离DNA参与机体内在的炎症反应和凝血过程,在肾脏疾病中显著升高,可作为肾脏疾病的潜在生物标志物,对疾病的诊断和预后有重大意义。本文对循环游离DNA的生物学特性、在肾脏疾病中的作用及应用进展进行综述,以期为肾脏疾病的早期诊断及预后提供参考。

基于甲基化特异性PCR的外周血循环游离DNA甲基化检测对乳腺癌诊断价值的荟萃分析

目的通过Meta分析系统评估基于甲基化特异性PCR(MSP)的外周血循环游离DNA(cfDNA)甲基化检测对乳腺癌的诊断价值。方法检索PubMed、Embase、Cochrane数据库,检索时间为2011年1月至2021年12月,以“Breast neoplasms”“Breast cancer”“Methylation”“Cell-free DNA”等为检索词,检索有关血液循环cfDNA甲基化用于乳腺癌诊断的文献,根据纳入及排除标准筛选文献。使用QUADAS-2对纳入文献进行质量评价,提取研究数据并使用Stata 16.0对各效应量进行合并,分析异质性及来源,以Deek’s法检验发表偏倚。结果共检索318篇文献,最终纳入12篇文献的27项研究进行Meta分析,患者2195例,纳入研究存在高度异质性(I^(2)>50.00%)。采用随机效应模型合并灵敏度为0.43[95%CI(0.31~0.56)],合并特异度为0.97[95%CI(0.94~0.99)],合并阳性似然比(LR+)为16.30[95%CI(7.00~37.80)],合并阴性似然比(LR-)为0.59[95%CI(0.47~0.73)],合并诊断比值比(DOR)为28.00[95%CI(11.00~70.00)],合并AUC为0.85[95%CI(0.82~0.88)]。结论基于MSP的外周血cfDNA甲基化检测对乳腺癌有较高的辅助诊断价值。

循环游离线粒体DNA作为新型肿瘤液体活检标志物的研究进展

恶性肿瘤是导致人类死亡的主要原因之一,早期诊断和精准治疗能够显著改善肿瘤患者预后。随着液体活检技术的迅速发展,循环肿瘤细胞、外泌体、循环肿瘤DNA等新型肿瘤标志物被发现并展现出巨大的临床应用潜力,为肿瘤的诊治提供了更为精准的检测手段,逐渐成为研究热点。和循环游离核DNA相比,循环游离线粒体DNA(cf-mt DNA)具有基因组小、拷贝数多、突变频率高的特点,在肿瘤诊断和治疗检测中具有独特的优势,显示出良好的应用前景。综述系统介绍了循环cf-mt DNA的特点、检测技术、分析指标,以及cf-mt DNA在肿瘤早期诊断、治疗监测、预后评估中的应用价值。

循环游离DNA在常见肿瘤中的临床应用进展

循环游离DNA (cell-free DNA, cfDNA)容易采集和无创的优点使其在肿瘤早期诊断、良恶性鉴别、疗效检测、预后评价等临床应用中受到广泛的关注。此外,cfDNA还可以反映肿瘤大小、肿瘤转移等。为此,本文综述了cfDNA的临床应用,以期为临床疾病的诊断、疗效分析提供帮助。

多发性骨髓瘤血浆循环游离DNA定量检测和完整性分析

目的:研究血浆循环游离DNA(cf-DNA)在初诊多发性骨髓瘤(MM)患者筛查诊断中的作用,并探讨经化疗后患者的cf-DNA含量和完整性的变化在疾病评估中的作用。方法:收集35例初诊MM患者和18例健康志愿者的外周血标本,另选取MM患者中完成规范诱导化疗3个疗程的13例患者作为随访组。以ALU247片段及ALU115片段为目的基因,用荧光定量PCR检测患者及健康志愿者血浆中的cf-DNA含量,并以ALU247/ALU115比值计算cf-DNA的完整性。结果:MM患者ALU247、ALU115片段浓度和cf-DNA完整性均显著高于健康志愿者(均P<0.05)。经3个疗程诱导化疗的患者治疗后的ALU247和ALU115片段浓度以及cf-DNA的完整性均较治疗前显著降低(均P<0.05),且治疗前后cf-DNA完整性与血清M蛋白含量及骨髓异常浆细胞比例之间均存在较强正相关关系(r_(M蛋白)=0.703,r_(骨髓浆细胞)=0.705)。结论:cf-DNA对于MM的筛查诊断具有一定的积极意义。cf-DNA或许可以协同或者替代血清M蛋白含量及骨髓异常浆细胞比例评估患者的病情、疗效及预后。

磁共振动态增强结合血循环肿瘤细胞、循环游离DNA对乳腺癌的临床诊断研究

目的探讨磁共振动态增强(DCE-MRI)结合血循环肿瘤细胞(CTCs)、循环游离DNA(cfDNA)对乳腺癌的诊断价值。方法选取沧州市人民医院2020年6月至2021年11月符合纳入标准的乳腺癌病人82例(乳腺癌组)。另选同期65例乳腺良性病变且未合并其他疾病者作为良性组。比较两组DCE-MRI定量参数、CTCs、cfDNA水平,对比MRI特征,分析DCE-MRI结合CTCs、cfDNA诊断乳腺癌的价值。结果乳腺癌组DCE-MRI定量参数速度常数(K^(trans))值、速率常数(K_(ep))值、Alu247/115水平及CTCs计数分别为(0.18±0.04)min、(1.32±0.27)min、(12.97±2.14)个/毫升、0.97±0.32,比良性组高(0.05±0.01)min、(0.51±0.11)min、(10.15±1.45)个/毫升、0.55±0.12(P<0.05)。良性组边缘多光滑,形状规则,内部强化以均匀为主,时间-信号强度曲线(TIC)以Ⅰ型多见,早期增强率<60%;乳腺癌组边缘毛刺征、形状不规则,内部不均匀强化为主,以TIC分型Ⅲ型多见,早期增强率<60%占比高。两组MRI形态表现比较差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期者CTCs数量、Alu247/115水平明显高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期者(P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析结果显示,三者联合(DCE-MRI+CTCs+cfDNA)诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度分别为0.86、0.93、0.84,诊断效果优于单一检测CTCs、cfDNA检测(P<0.05)。结论乳腺癌病人CTCs、cfDNA存在异常表达,可能与病人临床分期、淋巴结转移有关,相对单一实验室检测,DCE-MRI结合CTCs、cfDNA检测能获取更多可靠信息。

循环游离DNA在早期肝细胞癌筛查中的研究进展

肝细胞癌(HCC)是全球最常见恶性肿瘤之一,是肝硬化患者死亡的最常见原因。我国是一个乙型肝炎病毒(HBV)感染高发国家,每年全球新发肝癌病例中大约50%来自我国,尽管目前HCC治疗手段层出不穷,由于缺乏有效的早期筛查方法,70%~80%的患者就诊时已经处于晚期,失去了手术切除及肝移植等根治性治疗机会,患者5年总生存率仅为14.1%[1]。因此,如何实现HCC早期诊断是当前研究的热点和难点问题。目前多项实验表明,循环游离DNA(cfDNA)含有特异性的肿瘤相关基因特征,检测cfDNA可提高早期HCC诊断的敏感性和特异性。本文就cfDNA在HCC早期诊断中的临床应用及前景作一综述。

结直肠癌患者血浆循环游离DNA的RAS突变与临床特征的关系

目的探讨结直肠癌患者血浆循环游离DNA(cfDNA)与肿瘤组织DNA的RAS基因突变检测的一致性,以及与临床特征的关系。方法收集71例结直肠癌患者的血浆及肿瘤组织标本。采用多重荧光PCR法检测血浆标本cfDNA的RAS的基因突变状态,并与肿瘤组织标本的相应基因突变状态对比分析。分析血浆RAS基因突变状态与患者临床特征的关系。结果血浆cfDNA的RAS突变率为32.39%,组织DNA的RAS突变率为50.70%,两种标本的RAS突变检测的一致率为76.06%,血浆cfDNA与组织DNA的RAS突变检测结果一致(Kappa=0.523,P=0.000)。血浆cfDNA检测的敏感性为58.33%、特异性为94.29%、阳性预测值为91.30%、阴性预测值为68.75%。血浆cfDNA的RAS突变状态与结直肠癌患者年龄、性别、分期(Ⅳa与Ⅳb)、原发肿瘤部位、肺转移、CEA水平、CA199水平等无明显相关性,而血浆cfDNA的RAS突变与结直肠癌患者肝脏转移有相关性(P=0.045),肝转移患者较未发生肝转移的患者突变率升高。结论血浆cfDNA可以作为无法获得组织标本的结直肠癌患者的RAS基因检测的替代标本,具有临床应用价值,且结直肠癌患者肝脏转移cfDNA RAS突变率升高。

循环肿瘤细胞及游离DNA甲基化在胃癌中的研究进展

胃癌目前仍是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一,5年生存率仅10%左右,因此肿瘤早期诊断是临床亟待解决的问题.近十年来,血液循环肿瘤细胞(circulating tumour cell,CTCs)和循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA,ctDNA)因其具有无创、实时检测和早于影像学检查结果等优点,得到了肿瘤学界的广泛关注,被称为"液体活检".大量的文献报道CTCs和ctDNA甲基化在肿瘤诊断、疗效监测和预后评估方面具有价值.本综述系统介绍CTCs和ctDNA的生物学特性以及在胃癌临床中意义、临床转化前景和挑战.

人体游离循环DNA的研究进展

游离循环DNA是一种细胞外游离状态的DNA,在动植物及人的体液中都检测到了它的存在。对游离循环DNA的检测已经应用在疾病的监控、胎儿的产前诊断及肿瘤的研究中。文章介绍了循环DNA的生物学特征,并对近年来游离循环DNA的研究和应用进展做了简单的回顾。

循环游离DNA完整性检测的临床应用研究进展

循环游离DNA(ccfDNA)是一种新的肿瘤标志物。现普遍认为细胞凋亡产生DNA短片段,长度为185～200 bp;而肿瘤细胞坏死产生的DNA片段,由于不完全消化而呈现长度多样化,以长链DNA片段为主。ccfDNA完整性检测广泛应用于多种肿瘤。DNA完整性一般以DNA长、短片段扩增产物的浓度比值来表示,其对肿瘤早期诊断、肿瘤分期、分级、放疗和化疗疗效监测等有重要意义。本文就ccfDNA完整性检的检测方法及其临床应用作一综述。

循环游离DNA在乳腺癌中的临床应用

循环游离DNA以细胞外游离形式存在于血液中,可由正常细胞和癌细胞释放。乳腺癌患者血液中循环游离DNA水平高于正常人,且循环游离DNA可以反映癌组织的基因突变、甲基化状态、拷贝数改变、杂合子丢失等特征,是乳腺癌诊断、治疗、预后检测中具有巨大潜力的生物学指标。本综述简要介绍了循环游离DNA的生物学特性,并从定量及定性检测两方面对循环游离DNA近年来在乳腺癌中的临床应用进行较全面的阐述。

人体循环游离DNA应用的研究进展

循环游离DNA(circulating cell-free DNA,ccfDNA)系存在于人及动植物体液中、在细胞外部处于游离状态的DNA分子。目前对其的研究均集中于肿瘤及妇产科学方面。本文对ccfDNA的生物学性质及在肿瘤学和妇产科学中应用的研究进展进行综述。

外周血液中循环肿瘤细胞和循环游离DNA检测在乳腺癌患者中的应用

目的探究外周血液中循环肿瘤细胞(CTCs)和循环游离DNA(cfDNA)检测在乳腺癌患者中的应用效果。方法收集本院2018-02—2019-02收治的94例乳腺癌患者、48例乳腺良性疾病患者及56例健康体检者外周血液标本,采用基于尺寸的高通量微流控芯片捕获CTCs、基于Alu序列的实时荧光定量PCR检测游离DNA长、短片段(247 bp、115 bp),并以长、短片段扩增产物比值作为DNA完整性指标。分析CTCs和cfDNA与乳腺癌临床参数的关系,并评估其在乳腺癌诊断中的作用。结果乳腺癌患者在CTCs、血浆cfDNA的基于Alu序列的Alu 247/115的比值上显著比健康体检者、乳腺良性疾病者高(P<0.05),乳腺癌患者外周血中CTCs的数量与血浆cfDNA的基于Alu序列的Alu 247/115的比值在年龄、病理分期、淋巴结转移、分子分型、远处转移、PR有一定的相关性(P<0.05),以病理学结果作为金标准,以约登指数最大点对应的临界值,以乳腺良性疾病患者和健康体检者作对照,当CTCs cut-off值为7.68个/ml,灵敏度为80.4%,特异度为96.4%,ROC曲线下面积为0.885(95%CI 0.805~0.965);Alu 247/115的cut-off值为0.431时,特异度为71.4%,ROC曲线下面积为0.727(95%CI 0.608~0.847),灵敏度为71.7%。结论 CTCs与cfDNA可能是乳腺癌辅助诊断的潜在生物学指标,CTCs检测的是肿瘤细胞,cfDNA检测的是肿瘤的DNA片段,可作为判断乳腺癌患者的病情变化和诊断的良好辅助指标,此方法值得应用与推广。

线粒体电压依赖阴离子通道对携带线粒体DNA A4263G突变的细胞株线粒体钙循环的影响

目的研究线粒体外膜电压依赖阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)在携带线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)A4263G突变的细胞株线粒体钙循环中的作用。方法对该家系的4个母系成员(3个血压异常和1个血压正常者)和3名遗传背景相同的对照者建立了传代淋巴细胞系,利用共聚焦显微镜评价VDAC在携带mtDNA A4263G突变的高血压患者细胞线粒体钙循环中的作用。结果与正常对照者淋巴细胞比较,突变细胞株线粒体内钙荧光强度及线粒体膜电势(Δψm)降低,加入苍术苷(线粒体通道蛋白开放剂)后正常者线粒体内钙荧光强度增加,而突变携带者没有明显改变,但两者Δψm均降低,加入环孢素A(CsA)后可以抑制苍术苷作用。结论线粒体VDAC功能异常导致mtDNA A4263G突变携带者细胞线粒体对钙通透性增加,Δψ降低,加入苍术苷进一步导致Δψ降低,加入CsA后可以抑制苍术苷作用。

循环游离DNA检测在结直肠癌诊治中应用的研究进展

循环游离DNA(ccf-DNA)是指存在于血液、游离于细胞之外的DNA片段。ccf-DNA检测正逐渐成为肿瘤筛查、早期诊断、预后评估以及抗癌治疗有效性监测的重要方法。通过相对无创方法获得的ccf-DNA可代替通过有创手段获得的结直肠癌(CRC)活检标本。ccf-DNA作为一种无创潜在肿瘤标志物在CRC早期诊断、疾病进展、疗效监测中有较高的应用价值。