循环游离DNA在常见肿瘤中的临床应用进展

循环游离DNA (cell-free DNA, cfDNA)容易采集和无创的优点使其在肿瘤早期诊断、良恶性鉴别、疗效检测、预后评价等临床应用中受到广泛的关注。此外,cfDNA还可以反映肿瘤大小、肿瘤转移等。为此,本文综述了cfDNA的临床应用,以期为临床疾病的诊断、疗效分析提供帮助。

磁共振动态增强结合血循环肿瘤细胞、循环游离DNA对乳腺癌的临床诊断研究

目的探讨磁共振动态增强(DCE-MRI)结合血循环肿瘤细胞(CTCs)、循环游离DNA(cfDNA)对乳腺癌的诊断价值。方法选取沧州市人民医院2020年6月至2021年11月符合纳入标准的乳腺癌病人82例(乳腺癌组)。另选同期65例乳腺良性病变且未合并其他疾病者作为良性组。比较两组DCE-MRI定量参数、CTCs、cfDNA水平,对比MRI特征,分析DCE-MRI结合CTCs、cfDNA诊断乳腺癌的价值。结果乳腺癌组DCE-MRI定量参数速度常数(K^(trans))值、速率常数(K_(ep))值、Alu247/115水平及CTCs计数分别为(0.18±0.04)min、(1.32±0.27)min、(12.97±2.14)个/毫升、0.97±0.32,比良性组高(0.05±0.01)min、(0.51±0.11)min、(10.15±1.45)个/毫升、0.55±0.12(P<0.05)。良性组边缘多光滑,形状规则,内部强化以均匀为主,时间-信号强度曲线(TIC)以Ⅰ型多见,早期增强率<60%;乳腺癌组边缘毛刺征、形状不规则,内部不均匀强化为主,以TIC分型Ⅲ型多见,早期增强率<60%占比高。两组MRI形态表现比较差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移、Ⅲ~Ⅳ期者CTCs数量、Alu247/115水平明显高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期者(P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析结果显示,三者联合(DCE-MRI+CTCs+cfDNA)诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度分别为0.86、0.93、0.84,诊断效果优于单一检测CTCs、cfDNA检测(P<0.05)。结论乳腺癌病人CTCs、cfDNA存在异常表达,可能与病人临床分期、淋巴结转移有关,相对单一实验室检测,DCE-MRI结合CTCs、cfDNA检测能获取更多可靠信息。

血浆循环游离DNA水平及其完整性用于肺结节良恶性的诊断研究

目的 探讨血浆循环游离DNA(cfDNA)水平及其完整性对肺结节良恶性的诊断价值。方法 选取110例肺结节患者作为研究对象,根据病理诊断结果分为良性肺结节组60例与恶性肺结节组50例,另选取同期健康体检者30例设为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血浆癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血浆cfDNA水平和cfDNA完整性;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析并比较血浆cfDNA水平、cfDNA完整性、CEA、Cyfra21-1单独和联合应用对恶性肺结节的诊断效能。结果 恶性肺结节组血浆cfDNA、CEA、Cyfra21-1水平依次为1 154.83(452.85,1 642.31)、7.93(3.21,10.31)、5.75(2.85,8.12) ng/mL,分别高于良性肺结节组的385.43(176.45,704.55)、2.67(1.36,5.45)、2.74(1.43,3.96) ng/mL,差异有统计学意义(P<0.001);恶性肺结节组患者cfDNA完整性为0.68(0.47,0.91),高于良性肺结节组的0.37(0.26,0.59),差异有统计学意义(P<0.001)。血浆cfDNA水平和cfDNA完整性与恶性肺结节患者性别、年龄、是否吸烟、肿瘤直径、病理类型、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移均无相关性(P>0.05)。ROC曲线显示,血浆cfDNA水平、cfDNA完整性诊断恶性肺结节的曲线下面积、敏感度、特异度均大于或高于CEA、Cyfra21-1;血浆cfDNA、CEA、Cyfra21-1水平和cfDNA完整性联合诊断恶性肺结节的敏感度、特异度均高于四者单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 血浆cfDNA水平和cfDNA完整性对恶性肺结节具有一定的诊断价值,可作为肺结节良恶性辅助诊断的分子生物学指标。

血清循环游离DNA与类风湿关节炎患者临床指标的关系

目的:研究循环游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血中含量对RA早期诊断和疾病活动度的评估价值,探讨cfDNA含量与RA的免疫学诊断指标及疾病活动度评估的相关指标类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibodies,抗CCP抗体)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)和28个关节疾病活动指数评分(disease activity score of 28 joints,DAS28-ESR)间的关系。方法:收集80例初诊且未接受抗风湿类药物治疗的RA患者为观察组(RA组),40例健康人为对照组(HC组),收集两组血清,测定cfDNA含量并计算完整度,与收集的RA患者临床指标进行相关性分析。结果:RA组的cfDNA高于HC组(P<0.05),但与诊断性血清学指标不相关(P>0.05)。根据28个关节疾病活动指数评分(DAS28-ESR评分)对RA患者进行疾病活动度分层,发现cfDNA含量在DAS28-ESR评分高组高于评分低组(P<0.05),cfDNA与DAS28-ESR、CRP和ESR具有相关性(P<0.05)。结论:血清cfDNA在RA患者体内含量增加,与炎症反应有相关性,对RA有诊断价值,可能是RA致病的独立危险因素。

结直肠癌患者血浆循环游离DNA的RAS突变与临床特征的关系

目的探讨结直肠癌患者血浆循环游离DNA(cfDNA)与肿瘤组织DNA的RAS基因突变检测的一致性,以及与临床特征的关系。方法收集71例结直肠癌患者的血浆及肿瘤组织标本。采用多重荧光PCR法检测血浆标本cfDNA的RAS的基因突变状态,并与肿瘤组织标本的相应基因突变状态对比分析。分析血浆RAS基因突变状态与患者临床特征的关系。结果血浆cfDNA的RAS突变率为32.39%,组织DNA的RAS突变率为50.70%,两种标本的RAS突变检测的一致率为76.06%,血浆cfDNA与组织DNA的RAS突变检测结果一致(Kappa=0.523,P=0.000)。血浆cfDNA检测的敏感性为58.33%、特异性为94.29%、阳性预测值为91.30%、阴性预测值为68.75%。血浆cfDNA的RAS突变状态与结直肠癌患者年龄、性别、分期(Ⅳa与Ⅳb)、原发肿瘤部位、肺转移、CEA水平、CA199水平等无明显相关性,而血浆cfDNA的RAS突变与结直肠癌患者肝脏转移有相关性(P=0.045),肝转移患者较未发生肝转移的患者突变率升高。结论血浆cfDNA可以作为无法获得组织标本的结直肠癌患者的RAS基因检测的替代标本,具有临床应用价值,且结直肠癌患者肝脏转移cfDNA RAS突变率升高。

循环游离DNA完整性检测的临床应用研究进展

循环游离DNA(ccfDNA)是一种新的肿瘤标志物。现普遍认为细胞凋亡产生DNA短片段,长度为185～200 bp;而肿瘤细胞坏死产生的DNA片段,由于不完全消化而呈现长度多样化,以长链DNA片段为主。ccfDNA完整性检测广泛应用于多种肿瘤。DNA完整性一般以DNA长、短片段扩增产物的浓度比值来表示,其对肿瘤早期诊断、肿瘤分期、分级、放疗和化疗疗效监测等有重要意义。本文就ccfDNA完整性检的检测方法及其临床应用作一综述。

人体循环游离DNA应用的研究进展

循环游离DNA(circulating cell-free DNA,ccfDNA)系存在于人及动植物体液中、在细胞外部处于游离状态的DNA分子。目前对其的研究均集中于肿瘤及妇产科学方面。本文对ccfDNA的生物学性质及在肿瘤学和妇产科学中应用的研究进展进行综述。

循环游离DNA在乳腺癌中的临床应用

循环游离DNA以细胞外游离形式存在于血液中,可由正常细胞和癌细胞释放。乳腺癌患者血液中循环游离DNA水平高于正常人,且循环游离DNA可以反映癌组织的基因突变、甲基化状态、拷贝数改变、杂合子丢失等特征,是乳腺癌诊断、治疗、预后检测中具有巨大潜力的生物学指标。本综述简要介绍了循环游离DNA的生物学特性,并从定量及定性检测两方面对循环游离DNA近年来在乳腺癌中的临床应用进行较全面的阐述。

外周血液中循环肿瘤细胞和循环游离DNA检测在乳腺癌患者中的应用

目的探究外周血液中循环肿瘤细胞(CTCs)和循环游离DNA(cfDNA)检测在乳腺癌患者中的应用效果。方法收集本院2018-02—2019-02收治的94例乳腺癌患者、48例乳腺良性疾病患者及56例健康体检者外周血液标本,采用基于尺寸的高通量微流控芯片捕获CTCs、基于Alu序列的实时荧光定量PCR检测游离DNA长、短片段(247 bp、115 bp),并以长、短片段扩增产物比值作为DNA完整性指标。分析CTCs和cfDNA与乳腺癌临床参数的关系,并评估其在乳腺癌诊断中的作用。结果乳腺癌患者在CTCs、血浆cfDNA的基于Alu序列的Alu 247/115的比值上显著比健康体检者、乳腺良性疾病者高(P<0.05),乳腺癌患者外周血中CTCs的数量与血浆cfDNA的基于Alu序列的Alu 247/115的比值在年龄、病理分期、淋巴结转移、分子分型、远处转移、PR有一定的相关性(P<0.05),以病理学结果作为金标准,以约登指数最大点对应的临界值,以乳腺良性疾病患者和健康体检者作对照,当CTCs cut-off值为7.68个/ml,灵敏度为80.4%,特异度为96.4%,ROC曲线下面积为0.885(95%CI 0.805~0.965);Alu 247/115的cut-off值为0.431时,特异度为71.4%,ROC曲线下面积为0.727(95%CI 0.608~0.847),灵敏度为71.7%。结论 CTCs与cfDNA可能是乳腺癌辅助诊断的潜在生物学指标,CTCs检测的是肿瘤细胞,cfDNA检测的是肿瘤的DNA片段,可作为判断乳腺癌患者的病情变化和诊断的良好辅助指标,此方法值得应用与推广。

循环游离DNA检测在结直肠癌诊治中应用的研究进展

循环游离DNA(ccf-DNA)是指存在于血液、游离于细胞之外的DNA片段。ccf-DNA检测正逐渐成为肿瘤筛查、早期诊断、预后评估以及抗癌治疗有效性监测的重要方法。通过相对无创方法获得的ccf-DNA可代替通过有创手段获得的结直肠癌(CRC)活检标本。ccf-DNA作为一种无创潜在肿瘤标志物在CRC早期诊断、疾病进展、疗效监测中有较高的应用价值。

循环游离DNA在多发性肌炎和皮肌炎中的作用

目的:研究循环游离DNA(cfDNA)在多发性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)中的作用。方法:使用PicoGreen试剂盒检测61例PM/DM患者、34例系统性红斑狼疮(SLE)患者和48例健康对照的血浆cfDNA浓度,并与患者的血清学指标做相关性分析。结果:cfDNA浓度在PM/DM组是247.1±61.09ng/ml,显著高于健康对照组(197.1±31.36ng/ml,P<0.01),显著低于SLE组(281.9±82.21ng/ml,P<0.01)。cfDNA与血沉和血清球蛋白呈显著正相关(P<0.01,P<0.05),与C3呈显著负相关(P<0.01)。结论:cfDNA可能与PM/DM疾病活动度相关。

循环游离DNA的定量检测及面临的问题

循环游离DNA(circulating cell free DNA,cfDNA)与人类疾病之间存在着密切联系。近年来,cfDNA做为一种无创检测生物标志物,展现出临床应用前景。人们针对其含量较低的特点,进行了大量研究,开发出了各种较为可靠的定量检测方法。但目前cfDNA的定量检测仍然面临问题及争议,缺乏规范和标准化的流程。本文对cfDNA的来源组成、定量检测及存在的问题进行了归纳整理及分析,希望能对提高cfDNA的定量检测的可靠性提供有益的参考。

循环游离DNA在结直肠癌中的临床应用进展

结直肠癌是胃肠道最常见的恶性肿瘤之一。近年来随着高危人群筛查的开展及内镜技术的发展,结直肠癌早期诊断率有所提高,但多数患者出现明显症状时已处于中晚期,预后较差。循环游离DNA(cf DNA)作为一种新型潜在肿瘤标记物近年来得到广泛关注,其在结直肠癌早期诊断、化疗方案的选择、疗效评估及预后判断等方面中具有重要的临床应用前景。本文就cf DNA在结直肠癌中的临床应用进展作一综述。

不同治疗对肺癌患者血液循环游离DNA检测EGFR基因突变的影响及预后分析

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与肺腺癌患者TKI靶向治疗疗效和预后密切相关,常规组织分析其突变状态有诸多局限。本研究旨在探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血液循环游离DNA(cell-free DNA,cfDNA)检测EGFR基因突变在治疗前、传统化疗以及靶向治疗后的表达差异。分析血液cfDNA是否能准确检测EGFR基因突变并监测耐药基因T790M的变化,以及TKI在靶向治疗患者中的预后价值。方法应用ARMS(amplification refractory mutation system)法检测107例(50例治疗前、29例传统化疗和28例靶向治疗)肺癌患者配对血液和肿瘤组织样本的EGFR基因突变并比较其表达差异;计算检测的一致性、敏感性和特异性;分析血检对靶向治疗患者的预后价值。结果血浆cfDNA检测EGFR总突变率在107例肺癌患者中为56%(60例),而配对肿瘤组织样本检出率为77.6%(83例)。一一配对比较发现两者总体一致率为68.2%。血检的敏感性是72.3%,特异性为100%。依据治疗状态分组后发现治疗前组患者血液和肿瘤组织样本的检测一致率最高(74%,37/50),而靶向组一致率最低(57.1%,16/28),提示靶向治疗改变血浆cfDNA中EGFR基因状态。具体分析靶向组不一致病例发现50%新检出含T790M的双突变,提示靶向治疗后耐药基因出现。生存分析证实血检含T790M双突变组的无进展生存期(progression-free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS)均显著低于无T790M突变组。结论应用ARMS法检测血液循环游离DNA(circulating cell-free DNA,cfDNA)的EGFR基因突变是一种特异性高、敏感性好的检测方法。适用于治疗前晚期肺癌患者的EGFR基因突变状态检测。同时,适用于靶向治疗后监测T790M耐药突变状态及预测患者预后。

血浆循环游离DNA浓度及完整性对肺癌和肺结核鉴别诊断的价值

目的用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肺癌、肺结核患者及健康人血浆循环游离DNA(cf-DNA)浓度及完整性,探讨其对肺癌和肺结核鉴别诊断的价值。方法收集49例肺结核患者、46例肺癌患者和47例健康对照者静脉血标本。用RT-PCR技术定量检测各组血浆cf-DNA中ALU115和ALU247浓度及完整性(ALU115/ALU247),化学发光微粒子免疫分析技术检测血浆糖链抗原(CA125)浓度;用Kruskal-Wallis H非参数检验比较总体差异,用Mann-Whitney U检验进行两两比较;绘制ROC曲线评价各项指标的诊断效能。结果肺结核组、肺癌组和健康人对照组间血浆cf-DNA中ALU115浓度(K-Wχ2=96.716,P=0.000)、ALU247浓度(K-Wχ2=25.228,P=0.000)、血浆cf-DNA完整性(K-Wχ2=75.283,P=0.000)差异均有统计学意义;肺结核患者较健康对照者血浆cf-DNA ALU115浓度(Z=-6.754,P=0.000)、ALU247浓度(Z=-4.570,P=0.000)和cf-DNA完整性(Z=-2.950,P=0.000)均升高;肺癌患者较健康对照者血浆cf-DNA ALU115浓度(Z=-8.245,P=0.000),ALU247浓度(Z=-4.088,P=0.000)和cf-DNA完整性(Z=-7.753,P=0.000)亦有明显升高;肺癌组较肺结核组血浆cf-DNA ALU115浓度(Z=-6.192,P=0.000)和cf-DNA完整性(Z=-7.753,P=0.000)均明显升高。肺癌组血浆cf-DNA ALU115浓度和cf-DNA完整性(ALU115/ALU247)的ROC曲线下面积(AUCROC)、敏感性、特异性分别0.931和0.934、100%和87%、72.9%和90.6%,均高于CA125(0.739,60.9%,86.5%),而ALU247(0.610,43.5%,79.2%)均低于CA125。结论RT-PCR检测血浆cf-DNA中ALU115和ALU247浓度及完整性可作为肺癌和肺结核辅助诊断的分子生物学指标。

循环游离DNA在头颈鳞状细胞癌中的研究进展

近年来,循环游离DNA(cell free DNA,cfDNA)的液体活检已成为诊断癌症的辅助手段。由于该手段具有无创、快速等优点,它在头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)诊断、治疗后监测及耐药性检测等方面的作用日益突出。本文对cfDNA的生物特性、提取与检测、在HNSCC中的临床应用,以及在HNSCC中发生、发展的作用进行综述,以期为相关科学研究和临床治疗提供思路。

血液循环游离DNA联合甲胎蛋白对肝细胞癌诊断价值的荟萃分析

目的通过荟萃(meta)分析评价循环游离DNA结合甲胎蛋白对于肝细胞癌的诊断价值。方法通过检索pubmed、web of science、Cochrane library、中国知网、中国生物医学文献数据库、维普数据库等多个数据库,检索建库至2018年5月间使用循环游离DNA结合甲胎蛋白作为诊断肝癌的文献,采用Stata 14.0软件进行分析。结果文章纳入10篇文献,包括838例HCC患者、702例非HCC患者;循环游离DNA结合AFP检测肝细胞癌的合并敏感性、特异性分别为0.80(95%CI:0.70~0.87)和0.95(95%CI:0.90~0.98),阳性似然比和阴性似然比分别为15.9(95%CI:7.6~36.6)和0.21(95%CI:0.13~0.32),诊断比值比为76(95%CI:28~228);ROC曲线下面积(AUCROC)为0.95(95%CI:0.93~0.97)。结论循环游离DNA联合甲胎蛋白对诊断肝癌具有更高的准确性,可以作为早期肝癌筛查的指标,并且定量分析比定性分析诊断准确性更高。

循环游离DNA在肝癌和肝相关性寄生虫病中的应用进展

液体活检是一种新型非侵入性检测方法,也是指导精准医疗应用的主要分子检测方法。液体活检主要包括:循环游离DNA(cf-DNA)、循环肿瘤细胞(CTC)、外泌体(exosomes)等,尤其是cf-DNA正在成为一种有价值的分子检测工具,特别是在肝癌的早期检测、诊断方面,以及最近在寄生虫感染累及肝脏疾病中的临床应用。综述了cf-DNA在肝癌和肝相关性寄生虫病中的临床应用。

扩增子测序技术应用于乳腺癌循环游离DNA无创性检测的研究

目的:应用扩增子测序方法检测乳腺癌循环游离DNA肿瘤相关突变。方法:军事医学科学院附属医院的10例HER2阳性晚期乳腺癌患者血样入组,应用扩增子测序技术检测血细胞和血浆中的循环游离DNA(cfDNA),筛选出肿瘤相关基因突变,即循环肿瘤DNA(ctDNA)。结果:检测10例晚期乳腺癌患者外周循环血50个基因,共检出11个突变基因,其中PIK3CA、ERBB4的阳性检出率均达到100%,AKT、TP53的阳性检出率为90%。结论:检测覆盖度及深度均良好,结果提示11个基因的热点突变区域出现单核苷酸的多态性基因突变,突变基因与PI3K-AKT-m TOR通路、Ras-Raf-MEK-ERK通路明显相关。扩增子测序技术和筛选方法可以用于乳腺癌ctDNA的无创性检测。

早期肝癌无创诊断之匙——循环游离DNA联合型液体活检

循环游离DNA(cfDNA)被认为是诊断早期肝癌极具研究前景的液体活检切入点。但不少研究证实单独使用cfDNA作为检测指标其诊断效能缺乏稳定性,尤其是单纯定量分析并不能很好地反映肿瘤情况。而更多研究表示cfDNA适宜多指标联合检测或与其他肝癌诊断标志物进行联合检测。本文回顾了截至2021年7月以cfDNA为出发点的联合型液体活检相关文献,归纳了现有研究中的各联合检测方式,首次就其联合诊断方法的诞生及研究进展进行简要综述,进一步明确cfDNA联合液体活检在诊断早期肝癌中的重要意义与潜力,以期为更好地利用肝癌诊断标志物提供探索思路。