循环肿瘤细胞定量检测在非小细胞肺癌患者中的应用价值研究

目的探讨循环肿瘤细胞(CTCs)定量检测在非小细胞肺癌(NSCLC)中的应用价值。方法选取2013年10月—2015年11月收治的32例NSCLC患者设为研究组,另选取同期收治的肺良性疾病患者及体检健康者32例设为对照组。以免疫磁珠富集联合免疫荧光染色法比较两组外周血CTCs阳性表达情况,研究组给予对应化疗措施,统计比较研究组不同疗效及预后效果患者外周血CTCs阳性表达情况,并统计分析NSCLC患者临床特征与CTCs阳性关系。结果研究组外周血CTCs阳性率为62.50%(20/32),对照组未检出CTCs,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CTCs阳性率与NSCLC患者性别、年龄、组织学类型、吸烟、家族史无明显相关性(P>0.05),与疾病分期、远处转移存在明显相关性(P<0.05)。NSCLC患者疗效良好组CTCs阳性率10.00%(2/20)低于疗效较差组66.67%(8/12),差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC患者预后良好组CTCs阳性率3.70%(1/27)低于预后较差组60.00%(3/5),差异有统计学意义(P<0.05)。结论循环肿瘤细胞在非小细胞肺癌患者外周血中阳性表达率较高,其阳性率可能与患者疾病分期、远处转移具有一定相关性,且通过循环肿瘤细胞定量检测可对NSCLC患者化疗疗效及预后效果进行评估。

确定性侧向位移芯片在儿童横纹肌肉瘤循环肿瘤细胞检测方法的可靠性研究

目的采用一种高效的循环肿瘤细胞(CTCs)捕获鉴定方式扩展CTCs的液体活检的临床应用。探究CTCs与横纹肌肉瘤(RMS)患儿临床特征的关系。方法将横纹肌肉瘤TE761细胞系混悬到外周血中,使用确定性侧向位移芯片(DLD-ΔChip),依据细胞尺寸快速无损分离富集肿瘤细胞,之后采用免疫荧光标记(DAPI+/CD45-/MyoD1+),在显微镜下鉴定TE761系细胞。检测该项技术对于肿瘤细胞的分离富集效率,以及检测RMS患儿外周血中CTCs数目并发掘与患者临床状况的相关性。结果DLD-ΔChip对于TE761系细胞的捕获率为94.0%,白细胞去除率为99.99%,红细胞去除率为100%。经DLD-ΔChip分离后的TE761系细胞活性为94.0%,与分离前的细胞增殖无统计学差异(t=2.21,P>0.05)。使用DLD-ΔChip测量RMS患儿外周血CTCs,RMS中危组和高危组外周血中的CTCs存在相关关系(U=289.00,P<0.05)。结论DLD-ΔChip分离富集CTCs效率高,分离后的CTCs活性高。RMS患儿中的CTCs在患者临床危险度分级、判断预后方面有良好的应用前景。

基于微流控芯片的循环肿瘤细胞检测系统研究

目的实现人体外周血液中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的高通量、高检出率的分选富集与检测,为癌症患者提供高效、精准的早期筛查。方法设计一款分选富集与检测集成化的微流控芯片,采用荧光检测系统进行单细胞水平的CTCs检测,得到样本中的CTCs数量。结果使用裂解红细胞后的外周血液样本进行6次实验,在进样速度达到0.2 mL/h时,CTCs能够达到78.6%的最佳检测率,组内相关系数达到0.8以上。结论CTCs检测系统能够实现较高的检出率并具有良好的可靠性,可以为相关领域的临床研究提供可靠的参考。

循环肿瘤细胞与基因联合检测诊断结直肠癌的价值探讨

目的:探究循环肿瘤细胞(CTC)与基因联合检测诊断结直肠癌(CRC)的价值。方法:选取于2021年3月—2022年8月在柳州市人民医院接受治疗的44例CRC患者作为研究组,选取同期44例结直肠良性病变患者作为对照组。患者均接受CTC与基因联合检测。比较两组CTC计数及RAS、BRAF、PIK3CA基因突变情况,以临床诊断结果为“金标准”,分析CTC与基因联合检测对CRC的诊断效能。结果:研究组CTC计数高于对照组(P<0.05);研究组RAS、BRAF、PIK3CA基因突变率均高于对照组(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,CTC检测联合基因联合检测诊断CRC的效能最高(ROC曲线下面积=0.916,P<0.001)。结论:CTC计数及RAS、BRAF、PIK3CA等基因突变均与CRC的发生存在密切联系,且这两种方法联合应用对CRC的诊断效能更佳。

用于循环肿瘤细胞定量分析的CK19数字PCR检测方法的建立及性能验证

本研究拟建立检测CK19基因表达的数字PCR(digital PCR,dPCR)方法并测试其性能,以期利用该方法的超高敏感性和绝对定量优势进行循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的定量分析。首先,根据CK19基因的mRNA序列进行引物探针设计,以看家基因ABL1作为内参,采用人乳腺癌MCF7细胞和健康人白细胞从13套引物探针之中筛选出了最佳的引物探针,测序结果证实扩增序列无误。其次,针对选定的引物探针进行反应条件的优化,以不同浓度的健康人白细胞cDNA为模板进行空白检测限(limit of blank,LOB)的分析,证实当ABL1基因拷贝数为20,000、15,000、10,000、5000、2500时,CK19的LOB分别为9.24、8.93、3.12、3.17和2.53拷贝。再次,采用MCF7细胞和健康人白细胞的cDNA模板进行不同浓度预混的检测限(limit of detection,LOD)分析,证实50%、10%、5%、1%、0.5%和0.1%的浓度配比下均可以有效检出CK19基因,线性R2值为0.9998。最终,临床样本的数字PCR检测结果发现晚期乳腺癌患者的CK19拷贝数高于健康人对照。上述结果说明本研究所建立的检测CK19基因的数字PCR方法具有敏感、特异和定量准确等优势,未来经过进一步验证之后有望用于乳腺癌的CTC定量分析,具有良好的应用前景。

快速微生物检测方法在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)产品中的应用

目的:采用呼吸信号法和定量聚合酶链反应(QPCR)技术对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)产品的无菌检测进行评估,旨在研究高效、可靠的实验方法,以快速完成免疫细胞产品微生物检测。方法:提取患者外周血或者肿瘤组织中免疫细胞,按照直接接种法、呼吸信号法以及QPCR法,对2020版《中华人民共和国药典》1101中规定的6种菌进行方法适用性验证。结果:结果显示,在<100 CFU·mL^(-1)条件下,TIL6种菌株在呼吸信号法适用性试验中,0.40~1.53 d检测出阳性信号,在QPCR方法检测适用性试验中,4 h内检出阳性信号。TIL中不存在干扰细菌和真菌检出的成分,两种方法专属性、耐用性良好。呼吸信号法检测限最优,QPCR法检测时间最短。结论:呼吸信号法的灵敏度和培养时间优于传统的检测方法,QPCR法将检测时间从传统无菌检测14 d缩短至4 h,两种方法都具有良好的特异性。因此在新鲜或者冻存等不同细胞使用条件下均可以作为快速检测方法的选择,在细胞治疗产品微生物检验中具有良好的应用前景。

循环肿瘤细胞检测在胃肠道肿瘤诊疗中的应用中国专家共识(2023版)

循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)作为新型肿瘤标志物,具有无创、动态监测和准确度高等特点,可以提供精确的肿瘤分子特征,帮助了解肿瘤发展过程中的变化。因此,CTC在肿瘤进展的动态监测中具有重要临床价值。为了规范和指导CTC检测在胃肠道肿瘤诊疗中的应用,中华医学会肿瘤学分会胃癌学组、中国医师协会结直肠肿瘤专业委员会、中国抗癌协会大肠癌专业委员会、中国抗癌协会胃癌专业委员会和中国抗癌协会消化道息肉及癌前病变专业委员会联合并召集国内部分专家,讨论制定了《循环肿瘤细胞检测在胃肠道肿瘤诊疗中的应用中国专家共识(2023版)》。本共识围绕CTC检测在胃肠道肿瘤诊疗中的检测技术和临床应用(包括预后判断、复发转移监测、疗效监测和辅助诊断)提供共识意见,以期为临床应用提供指导。

循环肿瘤细胞在肝细胞癌诊疗中的应用及展望

肝细胞癌(HCC)是一种高度恶性肿瘤,是癌症相关死亡的第三大原因。血清甲胎蛋白和影像学检查是HCC早期诊治和疗效动态监测最常用的手段。然而这些手段的准确性有限,不能明确反映肿瘤的潜在生物学特性。因此,开发能够更准确、全面地反映HCC生物学特性的新型肿瘤标志物具有潜在的临床应用价值。循环肿瘤细胞(CTC)是来源于原发肿瘤或转移灶并存在于血液循环中的癌细胞,其提供了关于肿瘤进展和转移的重要信息,是早期诊断和复发、转移、预后评估的良好候选指标,甚至是HCC潜在的治疗靶点。本文讨论了CTC在HCC患者临床全疗程管理中的应用及其局限性和未来研究方向。

循环肿瘤细胞簇在乳腺癌转移中作用的研究进展

循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)是乳腺癌患者出现复发和转移的最直接的原因之一。由两个或两个以上CTC组成的细胞簇,即循环肿瘤细胞簇(circulating tumor cell cluster, CTC cluster)。其引起肿瘤转移的潜力远大于单个CTC,与患者不良预后的关系也更为密切。本文对乳腺癌CTC cluster在转移中的作用及分子机制进行了综述,并归纳了CTC cluster应用于乳腺癌诊断、预后判断和治疗的研究进展。

基于循环肿瘤DNA的分子残留病灶检测及其在非小细胞肺癌术后中的应用价值

肺癌仍是我国乃至全世界发病率、病死率较高的恶性肿瘤之一,其中主要以非小细胞肺癌(NSCLC)为主。目前以手术为主的综合治疗仍是早中期及局部晚期的NSCLC的标准治疗方法,但仍有很多ⅠA~ⅢA期病人在根治性治疗后复发。因此临床上对精准的根治性手术治疗后的监测手段和辅助治疗的评估方法有强烈的需求,以达到根除分子残留病灶(MRD)。随着检测技术的进步,循环肿瘤DNA(ctDNA)作为提示MRD的分子指标逐步走向临床。最新共识提出在将围手术期NSCLC病人外周血中可稳定检测出的ctDNA作为MRD的检测指标。MRD的应用使得对NSCLC根治术后进行疾病监测、以判断预后和更早地发现肿瘤复发成为可能。在早中期及局部晚期的NSCLC病人术后辅助治疗研究中,不同的研究结果表明术后辅助治疗的疗效及判断是否需要行术后辅助治疗的标准存在争议。MRD可以作为一个更精准的预测指标,有望对术后辅助治疗进行指导,并为精准的个体化辅助治疗方案的制定提供依据,从而使病人能在疾病治疗中获益。

胃癌患者循环肿瘤细胞HER2的动态检测及其临床意义

目的:探讨胃癌循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)HER2的表达及动态情况,为胃癌Herceptin治疗提供临床依据。方法:通过循环肿瘤细胞检测方法(微流控芯片分离技术)及免疫组织化学方法(EnVision法),检测86例胃癌血液中术前一周、手术后及化疗后三次CTC-HER2表达情况,分析与原组织学HER2表达状况的关系。结果:86例胃癌术前、手术后及化疗后CTC-HER2阳性检出率分别为46.51%(40/86)、15.12%(13/86)、11.63%(10/86),术前与术后及化疗后比较,差异有统计学意义(P<0.05);三次总检测阳性率为61.63%(53/86);组织学HER2阴性CTC-HER2阳性检出率29.17%(14/48),与组织学比较,差异有统计学意义(P<0.05);术前基线检测CTC-HER2与组织学一致性高92.11%(35/38)。结论:术前基线检测CTC-HER2尤为重要,多次动态检测CTC-HER2可以增加HER2阳性概率,可为胃癌组织学HER2阴性的患者提供靶向治疗机会。

血液肿瘤患者血浆EB病毒和巨细胞病毒定量检测的临床价值

探究血液肿瘤患者血浆EB病毒和巨细胞病毒定量检测的临床价值。方法 127例血液肿瘤患者临床资料取自2021年10月至2023年3月,设为观察组,选择同期接受体检的健康人群127例作为对照组,抽取两组受试者5mL静脉血液用EDTA抗凝处理后送检,对样本进行荧光PCR定量检测。结果 127例患者中,EBV阳性率为13.39%,CMV阳性率为17.32%,二者均为阳性占6.30%。观察组阳性率(17.32)显著高于对照组(0.79%),P<0.05。结论 血浆EB病毒和巨细胞病毒定量检测准确率高,时间短,临床实践效果良好,应纳入血液肿瘤患者的常规检测项目中。

面向循环肿瘤细胞精准检测的YOLO微全分析系统

目前,医学检测可用的技术大多依赖于针对细胞生物学特性的分离,存在灵敏度低、技术程序复杂、成本效益低、不适合连续监测等问题。因此,该文提出一种基于深度学习的微流控新技术,用于模拟血流环境中进行循环肿瘤细胞的精准检测。为辅助检测框定位,该文使用有限元分析软件模拟微流体液滴在不同流量水相(分散相)与油相(连续相)中的产生过程,并据此选择最稳定流量(分散相:1μL/min,连续相:16μL/min)。为验证模拟结果的准确性,该文在不同流量的视频中进行定位测试,通过检测框的像素和尺度优化将相对误差控制在<1%。在此基础上,通过加入注意力机制和多尺度特征融合算法模块对YOLOv5算法结构进行升级,进而实现液滴的精确定位和尺寸预测。实验中,该文分别将肺癌和乳腺癌细胞载入水相,以此构建数据集(15 min,20 F/s)进行算法模型训练。最终,改进后的YOLO微全分析系统可以准确地测量液滴的位置(平均精度均值:98.92%)和大小(相对误差:0.49%),并精准识别视频流中的小目标循环肿瘤细胞(准确率:72.49%)。该文不仅为微流体液滴中成分的智能检测提供了新技术,而且有望实现真实血液环境中循环肿瘤细胞的实时监测。

循环肿瘤细胞检测在消化系统恶性肿瘤中应用的研究进展

近年来,随着液体活检技术不断发展,循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)检测技术取得巨大的进展,CTCs检测在消化系统肿瘤的早期诊断、预后检测,治疗效果评估等应用上的研究不断深入,因其微创、便捷的优点有望成为新的肿瘤检测技术。本文回顾了CTCs检测技术在消化系统如:口腔、胃、肝脏、胰腺、结直肠等部位肿瘤的相关研究,总结了不同部位肿瘤上应用CTCs检测的特点和临床应用效果。

胃癌患者外周血循环肿瘤细胞上皮间质转化的研究进展

胃癌转移是导致胃癌相关死亡的首要原因,循环肿瘤细胞的形成是实现肿瘤血行转移的最初阶段,为最终形成肿瘤转移病灶提供了可能,循环肿瘤细胞检测对于癌症的早期诊断,疗效与预后的评估,个体化治疗的选择等方面具有重要的临床意义,上皮间质转化促进了肿瘤细胞转移的发生,通过综述胃癌患者外周血循环肿瘤细胞富集检测技术,分析胃癌患者原发灶、循环肿瘤细胞及转移灶发生上皮间质转化及间质上皮转化的上皮间质标志物的表达情况,探究胃癌转移可能的发生途径和模式。

术前外周血循环肿瘤细胞检测对原发性肝细胞肝癌微血管侵犯的预测价值

目的探讨术前外周血循环肿瘤细胞(CTCs)检测对肝细胞肝癌(HCC)微血管侵犯(MVI)的预测价值。方法收集首次手术切除治疗的HCC患者108例,术前未行抗肿瘤治疗;术前取外周静脉血检测CTCs,术中取病理HE染色判断是否发生MVI;收集患者临床资料,进行发生MVI的单因素及多因素分析,以受试者工作曲线(ROC)判断各独立因素术前预测肝癌MVI的价值。结果 108例肝癌患者术前外周血检出CTC 51例,术后病理证实发生MVI 44例,且发生MVI者外周血检CTC阳性检出率高于未发生MVI者(P<0.05)。多因素分析显示,CTC阳性(OR=5.218,95%CI 1.700~16.011,P=0.004)、AFP>400μg/L(OR=4.803,95%CI 1.714~13.568,P=0.003)、DCP>40 m AU/mL(OR=3.046,95%CI 1.055~8.797,P=0.040)和肿瘤直径(OR=4.332,95%CI 1.544~12.1521,P=0.005)是MVI发生的独立危险因素。ROC分析显示,CTC阳性的曲线下面积及灵敏性、特异性均高于其他3种危险因素。结论 HCC患者术前外周血CTC检测能较好地预测MVI的发生,可为后续个体化治疗提供参考。

循环肿瘤细胞分离与检测

肿瘤播散是造成肿瘤相关死亡的主要原因,而肿瘤细胞自发循环导致肿瘤远处转移。因此,特异、敏感地检测循环肿瘤细胞非常重要,不仅能够更加准确地评估肿瘤患者的预后,还有利于制定个性化治疗方案。本文就循环肿瘤细胞的富集、分离、检测和分析方法作一综述。

外周血循环肿瘤细胞联合CA153检测在乳腺癌筛查及分期预测中的应用价值

目的探讨外周血循环肿瘤细胞(CTC)、糖类抗原153(CA153)及联合检测在乳腺癌筛查及分期预测中的应用价值。方法随机选取185例健康体检者(对照组)、163例乳腺良性病变患者(良性组)、139例乳腺癌患者(恶性组)作为受试者,检测其术前CTC和CA153水平。比较CTC、CA153及联合检测在3组受试者中的阳性率、检测值的差异,并进一步分析3种检测在恶性组临床分期中阳性率、检测值的差异,综合评估3种检测对乳腺癌的诊断效能及分期预测的差异。结果①CEP8/17探针检测的乳腺癌患者扩增型CTC表现为:CEP8、CEP17单染色体扩增型CTC和CEP8/17双染色体扩增型CTC。②恶性组的CTC、CA153及联合检测阳性率均为最高,与对照组、良性组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。③恶性组的CTC数量、CA153数值均为最高,与对照组、良性组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。④恶性组Ⅳ期CTC的阳性率最高,Ⅰ与Ⅲ期、Ⅰ与Ⅳ期之间CTC阳性率差异具有统计学意义(均P<0.01);恶性组Ⅳ期CA153的阳性率最高,Ⅰ与Ⅲ期、Ⅰ与Ⅳ期、Ⅱ与Ⅳ期之间CA153阳性率差异具有统计学意义(均P<0.01);恶性组Ⅳ期联合检测的阳性率最高,Ⅰ与Ⅱ期、Ⅰ与Ⅲ期、Ⅰ与Ⅳ期患者之间联合检测阳性率差异具有统计学意义(均P<0.01)。⑤恶性组Ⅳ期的CTC数值最高,各期之间的CTC数量差异均具有统计学意义(均P<0.01);恶性组Ⅳ期的CA153数值最高,Ⅰ与Ⅱ期、Ⅰ与Ⅲ期、Ⅰ与Ⅳ期患者间CA153数值差异有统计学意义(均P<0.01)。⑥联合检测的灵敏度、符合率、阴性预测值均较CTC、CA153检测高,整体上提高了乳腺癌的诊断效能。⑦CTC、CA153及联合检测诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.754、0.719、0.838,联合检测的AUC明显大于CTC与CA153检测,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论CTC、CA153均为乳腺癌发生的独立危险因素,在乳腺癌的筛查及分期中均具有一定价值,但临床价值尚不足。而二者联合检测更有助于提高乳腺癌的诊断效能与分期预测,是临床价值较高的乳腺癌筛查组合。

循环肿瘤细胞的富集与检测研究进展

肿瘤的复发和转移是导致死亡的主要原因。循环肿瘤细胞(CTCs)与肿瘤的转移密切相关。CTCs因其表面分子的多样性可为临床诊断、预后和个性化治疗提供丰富的信息。CTCs富集方法极为重要,其表面分子的检测以及临床应用都受到富集方法的制约。目前,CTCs富集检测方法日新月异,本文针对CTCs富集检测方法作一综述。

非小细胞肺癌循环肿瘤细胞检测进展

肺癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤,约有18%的癌症相关死亡与肺癌有关。循环肿瘤细胞(CTCs)的出现可看做是肿瘤细胞播散入血的直接体现,而这正是导致非小细胞肺癌患者预后较差的最重要因素之一。检测外周血中循环肿瘤细胞有望成为诊断肺癌的辅助方法,使肺癌患者得到最佳的个体化治疗。研究者们已尝试多种不同的方法从外周血中分离CTCs。虽然有关CTCs检测的研究众多,但不同检测方法的敏感度、特异性及重复性限制了其临床意义,本文就现有的各项技术进行综述。