神经微丝蛋白免疫荧光染色法观察运动终板

目的:了解应用神经微丝蛋白免疫荧光染色法观察运动终板的效果。方法:取SPF级大鼠6只,麻醉状态下取材双侧比目鱼肌神经入肌点组织,以多聚甲醛固定,冰冻切片,行神经微丝蛋白免疫荧光染色,荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察运动终板形态,并用激光共聚焦显微镜软件对运动终板形态进行三维重建。结果:染色切片在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下均可观察到运动终板爪形结构形态,激光共聚焦显微镜采集图像进行三维重建后,可以得到运动终板立体结构。结论:神经微丝蛋白免疫荧光染色法是一种较好的运动终板的观察方法。

抗神经丝重链抗体相关脑炎一例并文献复习

目的 报告国内首例抗神经丝重链抗体相关脑炎病例,并复习相关文献,总结抗神经丝重链抗体相关脑炎的临床特征。方法与结果 1例63岁女性抗神经丝重链抗体相关脑炎患者临床表现为认知功能障碍、反复癫痫发作、失语;头部MRI显示双侧额顶叶多发异常信号,部分脑回略肿胀,幕上脑室系统扩张,脑萎缩以双侧颞叶、海马为甚;18F-DPA714 PET/MRI显示额颞顶枕叶多脑区局灶性摄取异常增高,提示神经炎症;脑电图呈频繁痫样放电;脑脊液白细胞计数和葡萄糖升高,血清和脑脊液自身免疫性脑炎相关抗体阴性,血清TBA法显示小脑神经丝样荧光包绕浦肯野细胞,进一步检测抗神经丝蛋白抗体,血清抗神经丝重链抗体强阳性(1∶1000)。临床诊断为抗神经丝重链抗体相关脑炎,予静脉注射免疫球蛋白和甲泼尼龙治疗,预后改善。结论 抗神经丝重链抗体相关脑炎临床罕见,临床表现多样,早期诊断与鉴别诊断困难,早期予以免疫治疗对预后至关重要。

细丝蛋白A在浸润性乳腺癌中的表达及意义

目的:探讨细丝蛋白A(filamin A,FLNa)在浸润性乳腺癌组织中的表达及其与临床特征之间的关系。方法:采用免疫组织化学和FCM法检测46例浸润性乳腺癌标本中FLNa的表达情况,并统计分析FLNa表达与患者临床病理学特征的相互关系。结果:FLNa在浸润性乳腺癌组织中的表达水平随分化程度的降低而增高,中、高分化组与低分化组之间的差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移组的FLNa表达水平较无淋巴结转移组高(P<0.05)。结论:FLNa表达水平与浸润性乳腺癌的侵袭和转移有关,可作为浸润性乳腺癌预后判断的辅助指标,也有望成为临床治疗的新靶点。

大鼠脊髓损伤后神经丝蛋白及胶质纤维酸性蛋白表达的变化及意义

[目的]研究脊髓损伤后神经元中神经丝蛋白(NF200)及星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化及其关系,探讨不同细胞在再生修复中的作用。[方法]SD大鼠30只,分为正常、伤后1 d,3 d,7 d,14 d,21 d6组,每组5只,用免疫组化染色及图象分析方法观察神经元NF200及星形胶质细胞GFAP的表达,并对二者进行相关性分析。[结果]脊髓损伤后NF200及GFAP的表达均呈进行性增高,二者有显著的相关性;GFAP表达的增高早于NF200的增高,而前角神经元NF200的表达早于后角神经元。[结论]脊髓损伤后,星形胶质细胞可能是刺激神经元功能活跃,促进神经纤维再生的一个重要因素,不同类型神经元对损伤的反应存在着差异。

尿阿尔茨海默病相关神经丝蛋白与外周血CD45RA+T细胞亚群联合检测早期诊断阿尔茨海默病

目的探讨尿阿尔茨海默病相关神经丝蛋白(Alzheimer disease related neural thread protein,AD7cNTP)与外周血淋巴细胞CD45RA+T亚型联合检测在阿尔茨海默病(AD)早期诊断中的价值。方法根据Peterson制订的轻度认知功能障碍(MCI)诊断标准和美国精神障碍诊断与统计手册第4版(DSM-Ⅳ)有关AD的诊断标准,选取AD患者32例(AD组),MCI患者30例(MCI组),另选60例健康者作为对照组。对比各组尿AD7c-NTP与CD45RA+T细胞亚群变化及诊断价值。结果 1CD45RA+T蛋白表达水平在AD组和MCI组显著低于对照组(P<0.01);2CD45RA+T在AD组和MCI组中的相对表达水平较对照组显著降低(P<0.01),AD组与MCI组间差异无统计学意义(P>0.05);3尿AD7c-NTP在AD组和MCI组中的含量较对照组显著升高(P<0.01),AD组与MCI组间差异无统计学意义(P>0.05);4CD45RA+T与AD7c-NTP联合诊断具有较好的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结论 AD7c-NTP与CD45RA+T联合检测是诊断AD早期病变的较好指标,提升二者单独应用时的预测价值,为AD早期诊断及疗效监测提供参考。

神经丝蛋白在猪胸腰段脊髓火器贯通伤后的早期表达

目的:建立家猪胸腰段脊髓火器贯通伤模型和改良Allen’s打击伤后全瘫模型,观察伤后神经丝蛋白的早期表达。方法:实验于2005-05/08在解放军第一七五医院实验室完成。取健康雄性家猪20只,单纯随机分为3组:①火器伤组(n=9):在全麻状态下制作胸腰段(L1～L2)脊髓火器伤模型,分为伤后1,3,6h3个时间处死(n=3)。②打击伤组(n=9):L1节段脊髓行改良Allen’s打击,致伤力为500g·cm,处死时间同前。③空白对照组(n=2):只麻醉,不造模,伤后6h处死。各组在伤后相应时间点取脊髓标本(火器伤组取近伤段,打击伤组取伤点),进行神经丝蛋白的免疫组化染色,观察其阳性表达的吸光度(A)值;在伤后6h火器伤组和打击伤组分别在脊髓伤点、近伤段(距伤点1～3cm脊髓)、中伤段(距伤点3～7cm脊髓)及远伤段(距伤点近头侧10～12cm处的胸髓)取材,观察神经丝蛋白的A值。结果:经补充20只猪进入结果分析。①空白对照组神经丝蛋白的A值为91.1±3.01,打击伤组脊髓损伤后1,3,6h神经丝蛋白的A值均高于火器伤组(45.7±2.59,39.5±2.48,34.6±4.06;31.8±2.66,27.4±1.99,20.8±1.69),且两组神经丝蛋白的表达随着时间延长而下调(P<0.001)。②伤后6h打击伤组仅在伤点和近伤段神经丝蛋白的A值低于空白对照组(P<0.05),而火器伤组各部位神经丝蛋白的A值低于空白对照组(P<0.05)。结论:和脊髓打击伤相似,脊髓火器伤后神经细胞的破坏与修复并存,有一定的时空性,且与损伤程度有关。受伤后1h即可发现神经元细胞的破坏、崩解,但脊髓火器伤的波及范围较打击伤更为广泛。

氯丙烯对大鼠神经组织神经丝亚单位蛋白含量的影响

目的 为了进一步探讨氯丙烯引起的周围神经病的发病机理。方法 用Western印迹方法测定了亚慢性中毒大鼠大脑、脊髓、坐骨神经组织低分子量神经丝 (NF L)、中分子量神经丝 (NF M)和高分子量神经丝 (NF H) 3个亚单位相对含量的变化。结果 氯丙烯使脑组织沉淀和上清液中神经丝 3个亚单位的相对含量明显降低 ;在脊髓组织沉淀和上清液中 ,NF M均降低。NF H在沉淀增加 ,在上清液中降低。NF L在沉淀增加 ;在坐骨神经组织沉淀和上清液中 ,氯丙烯使NF M含量降低 ,而使NF H含量增加。NF L在沉淀中降低、在上清液中明显增加。结论 氯丙烯引起的中毒性周围神经病与神经丝亚单位紊乱有关。

不同环境设置对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围神经丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察不同环境对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围神经丝蛋白(neurofilament,NF)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达的影响。方法 SD大鼠140只。将实验动物随机分为假手术对照组(10只)和大脑中动脉阻断(MCAO)手术组(130只),再将MCAO手术组随机分为独居组(30只)、社会交往组(40只)、探索学习组(30只)和丰富环境组(30只)。假手术对照组和各MCAO手术组分别于术后7、28天随机选取5只大鼠处死,采用免疫组织化学染色,观察大鼠梗死灶周围皮质NF、GFAP阳性表达。结果社会交往组、探索学习组和丰富环境组术后7、28天NF、GFAP阳性表达均明显优于独居组和假手术对照组(P<0.05或<0.01)。结论社会交往、探索学习和丰富环境均能促进梗死灶周围NF、GFAP的阳性表达。

神经丝蛋白与帕金森病的相关性研究

目的研究神经丝蛋白(NFs)作为帕金森病(PD)外周生物标记物的可能性及临床意义。方法用酶联免疫吸附方法检测23例PD患者、30例急性脑梗死患者和29名健康对照者血清NFs水平并进行比较。分析PD患者病程和血清NFs水平的相关性。结果 PD患者和急性脑梗死患者血清NFs水平均明显高于健康对照(P<0.05),而PD患者和急性脑梗死患者之间血清NFs水平差异无统计学意义(P>0.05)。PD患者血清NFs水平和病程具有相关性(r=0.739,P<0.05)。结论 PD患者疾病过程中存在轴索损伤,且轴索损伤严重程度可能随病程延长持续加重;PD患者血清NFs水平改变无疾病特异性,不能作为理想的PD外周生物标记物。

尿液神经丝蛋白检测对老年阿尔茨海默病患者的临床意义

目的探讨老年阿尔茨海默病(AD)患者尿液中神经丝蛋白含量检测的临床意义。方法 AD组:门诊以及住院诊断为AD患者66例(AD组),其中男性60例,女性6例;年龄范围75～96岁,年龄(87. 27±4. 95)岁;对照组:智能正常老人85名,其中男性72名,女性13名;年龄范围74～98岁,年龄(86. 93±5. 21)岁,所有受试者进行认知功能测评,包括简易智能状态检查量表(MMSE)、临床痴呆评定量表(CDR),Hachinski缺血指数量表(HIS)。根据量表评分将AD组分为轻、中、重组。采集尿液标本进行尿液中神经丝蛋白(AD7c-NTP)含量检测。结果 (1) AD组尿AD7c-NTP阳性明显高于对照组,两组阳性率比较,差异有统计学意义(P <0. 001);(2)两组受试者年龄、性别、教育背景与AD7c-NTP含量的相关性分析(Pearson相关分析)显示,两组尿AD7c-NTP含量与以上诸因素均无明显相关性; MMSE分数与AD7c-NTP含量呈负相关,CDR分数与AD7c-NTP含量呈正相关。(3)轻度AD组与中、重度AD组尿AD7c-NTP含量比较差异有统计学意义(F=88. 756,P <0. 001),提示尿中的AD7c-NTP含量随疾病严重程度增加而上升。结论通过对老年AD患者尿液中AD7c-NTP含量检测,可以对AD的诊断提供帮助,并可能与病情严重程度有一定的关系。

神经丝轻链与脑卒中关系的研究进展

脑卒中是全世界致死、致残的主要原因,我国40岁及以上人群的脑卒中人口标化患病率由2012年的1.89%上升至2019年的2.58%,至2019年我国40岁及以上人群现患和曾患脑卒中人数为1704万,现患人数高居世界首位[1]。一半的脑卒中患者发病后第1年发生脑卒中后认知障碍,生活质量及生存时间受到严重影响,是目前脑卒中疾病负担的重要原因[2]。

神经丝轻链蛋白在周围神经病中的应用价值探究

神经丝轻链蛋白(NfL)已被确定为许多中枢神经系统疾病中轴突损伤的生物标志物,近年来关于NfL在周围神经病中的应用价值也逐渐引起关注。本研究回顾了血清NfL(sNfL)与各种免疫介导的周围神经病〔吉兰巴雷综合征(GBS)、慢性炎性脱髓鞘性神经根神经病(CIDP)等〕、遗传性周围神经病、药物相关性周围神经病、糖尿病周围神经病等轴突损伤的动态变化之间的关系,综合分析的结论为:sNfL定量可作为一个非常有潜力的生物标志物,监测疾病活动,评估疾病短期预后、长期预后,还可作为未来的临床试验和监测治疗反应的指标。

胃癌组织P27、MMP-9和PEDF蛋白表达及意义

目的:探讨P27、MMP-9和PEDF蛋白表达在胃癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学法检测82例人体胃癌组织标本中胃癌细胞内P27、MMP-9和PEDF的表达;统计学分析上述各分子标记物与胃癌临床病理因素间的关系。结果:(1)82例正常胃黏膜均有P27、PEDF表达,在胃癌组织中的表达率分别为48%和43%。MMP-9在胃癌中表达率为70%,正常胃黏膜呈阴性表达。(2)P27低表达与胃癌组织学分级和远处转移有关(P<0.05);MMP-9高表达与浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05);PEDF低表达与组织学分级、浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关(P<0.05)。结论:胃黏膜上皮细胞在癌变过程中P27和PEDF表达降低,而MMP-9表达升高;MMP-9在胃癌侵袭转移中起促进作用,P27和PEDF可抑制胃癌的进展。

p27和p57蛋白在血小板源生长因子BB刺激下血管平滑肌细胞增殖过程中的表达

目的:观察不同剂量的血小板源生长因子BB刺激对血管平滑肌细胞生长率的影响及血管平滑肌细胞不同增殖程度下p27和p57蛋白表达量的变化。方法:实验于1998-09/2000-05在南方医科大学附属南方医院心内科实验室完成。①选用七八周雄性SD大鼠80只,体外分离SD大鼠主动脉中层平滑肌,贴壁法培养平滑肌细胞,选用2～4代培养的细胞。②胰酶消化的血管平滑肌细胞,浓度为1×108L-1,分别接种于6孔板上,无血清的培养基静止48h,分别加入血小板源生长因子BB10和20μg/L,无血清的培养基为对照组,分别在刺激1,3,5d后,计算不同剂量的血小板源生长因子BB刺激下的血管平滑肌细胞数量,每组重复4次,取平均值。③在用血小板源生长因子BB10和20μg/L刺激6,12,24h后收集细胞,用免疫印迹分析法检测细胞中p27和p57蛋白表达量。结果:①血管平滑肌细胞数量:血小板源生长因子BB刺激1和3及5d后血小板源生长因子BB10和20μg/L组明显高于对照组(t=4.06～21.76,P<0.05～0.01)。②血管平滑肌细胞中p27蛋白表达量(A值):血小板源生长因子BB刺激12和24h后血小板源生长因子BB10和20μg/L组明显低于对照组(P<0.05,0.01),血小板源生长因子BB20μg/L组明显低于血小板源生长因子BB10μg/L组(P<0.01)。p57蛋白表达量(A值):血小板源生长因子BB刺激24h后血小板源生长因子BB10和20μg/L组明显高于对照组(P<0.01),血小板源生长因子BB20μg/L组明显高于血小板源生长因子BB10μg/L组(P<0.01)。结论:①在血小板源生长因子BB刺激的血管平滑肌细胞增殖过程中,p27和p57蛋白表达量变化不同。②在增殖的血管平滑肌细胞中随刺激因子作用时间的延长,表达量逐渐下降,而p57蛋白表达水平随血管平滑肌细胞的增殖而增加,p27蛋白表达量的变化可能是决定血管平滑肌细胞增殖的关键因素。

血浆载脂蛋白M与阿尔茨海默病的相关性研究

目的 探讨载脂蛋白M(apoM)与阿尔茨海默病(AD)的相关性及其对AD的诊断价值。方法 选取2021年3~6月于四川省人民医院、西部战区总医院和成都市第八人民医院收治的AD患者50例作为病例组,另选取同期认知功能正常者50例作为对照组。采用ELISA法测血浆apoM和神经丝轻链蛋白(NfL)水平,采用Spearman秩相关分析,采用二元logistic回归分析,采用ROC曲线分析。结果 病例组血浆apoM及NfL水平显著高于对照组(P<0.01);血浆apoM与NfL呈正相关(r=0.471,P<0.01),与简易智能状态检查量表评分(r=-0.374,P<0.01)、蒙特利尔认知评估量表评分(r=-0.417,P<0.01)呈负相关,与日常生活活动能力量表评分(r=0.399,P<0.01)呈正相关;二元logistic回归分析校正性别、年龄等因素后,血浆apoM仍与AD的发生显著相关(OR=1.058,95%CI:1.026~1.091,P=0.000);ROC曲线分析显示,血浆apoM诊断AD的曲线下面积为0.724,诊断最佳临界值为61.78 mg/L,敏感性为62%,特异性为76%,具有诊断AD的潜力。结论 血浆apoM与AD的发生显著相关,可能为AD临床诊断和病情评估提供参考。

神经微丝蛋白在先天性巨结肠和巨结肠同源病的表达变化

目的了解神经微丝蛋白(neurofilament protein,NFP)在先天性巨结肠(Hirschs- prung’s disease,HD)和巨结肠同源病(allied Hirschsprung’s disorder,HAD)肠组织的表达,观察NFP与先天性巨结肠及其同源病的相互关系,进一步探讨两种疾病的发病机制。方法采用鼠抗人NFP单克隆抗体通过免疫组化法对15例先天性巨结肠,11例巨结肠同源病肠组织NFP的表达进行研究,10例正常结肠组织作对照。结果对照组正常肠段肌间神经丛中有大量NFP阳性纤维和NFP阳性神经细胞,阳性细胞突起少而粗短;HD狭窄段肠管肌间神经丛中未见NFP阳性细胞,但可见大量着色深的NFP阳性纤维;HAD狭窄段肌间神经丛中可见形态各异的NFP阳性细胞,细胞大,且着色深,突起多,丛中只见少量NFP阳性纤维。HD的扩张段和HAD的扩张段分别与正常结肠比较,NFP的表达无统计学意义(P>0.05);HD狭窄段分别与HAD狭窄段和正常结肠比较,NFP的表达均有差异(P<0.01);HAD狭窄段和正常结肠比较,差异也有显著性意义(P<0.01)。结论NFP可能与HD和HAD的发生均有关系,但NFP在HD和HAD的表达有差异。

微丝相关蛋白hHBRK1突变体的构建、表达及纯化

目的:构建微丝相关蛋白hHBRK1截短体和突变体原核表达载体,并表达及纯化融合蛋白。方法:采用常规PCR并结合定点突变技术,对hHB rk1基因进行缺失和点突变;利用限制性内切酶将PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-4T;IPTG诱导融合蛋白表达,通过谷胱甘肽-琼脂糖纯化技术分离纯化GST融合蛋白。结果与结论:构建了包括氨基端缺失截短体hHBRK1-ΔN、羧基端缺失截短体hHBRK1-ΔC和点突变蛋白hHBRK1-S56G57在内的原核表达质粒,分离获得较高纯度的重组hHBRK1突变体融合蛋白,W estern杂交证实纯化蛋白为GST融合蛋白。本实验为进一步研究hHBRK1的相互作用蛋白及其可能的结合位点提供了基础。

尿液AD7c-NTP表达变化对痴呆诊断价值的探讨

目的探讨尿液阿尔茨海默病相关神经丝蛋白（AD7c-NTP）表达变化对不同类型痴呆的诊断价值。方法分别采用简易智能状态检查量表（MMSE）和蒙特利尔认知评价量表（Mo CA）评价阿尔茨海默病（AD）、遗忘型轻度认知损害（a MCI）、额颞叶痴呆（FTD）和血管性痴呆（Va D）患者认知功能,酶联免疫吸附试验检测尿液AD7c-NTP表达变化,Spearman秩相关分析评价不同类型痴呆患者尿液AD7c-NTP水平与MMSE和Mo CA评分的相关性,受试者工作特征曲线（ROC曲线）计算尿液AD7c-NTP诊断痴呆之灵敏度、特异度和准确率。结果不同类型痴呆患者尿液AD7c-NTP水平差异有统计学意义（P=0.000）,其中AD组、a MCI组、FTD组均高于对照组（P=0.000,0.029,0.005）,中至重度AD组患者尿液AD7c-NTP水平高于轻度AD组,但未达到统计学意义（P=0.359）。相关分析显示,仅轻度AD组患者尿液AD7c-NTP水平与Mo CA评分呈负相关（rs=-0.506,P=0.016）。ROC曲线下面积为0.838（95%CI：0.732~0.945,P=0.000）,诊断阿尔茨海默病的灵敏度和特异度分别为70.20%和90%,所对应的尿液AD7c-NTP临界值为2.32 ng/ml。约70.18%（40/57）的AD组、63.33%（19/30）的a MCI组和45.95%（17/37）的FTD组患者尿液AD7c-NTP表达异常（〉2.32 ng/ml）。结论尿液AD7c-NTP表达变化在痴呆患者早期诊断和病情评价中具有重要临床参考价值。

神经丝蛋白轻链在视神经脊髓炎谱系疾病诊断和预后中的意义

目的研究脑脊液中轴索损伤标志物神经丝蛋白轻链（NFL）检测对视神经脊髓炎谱系疾病（NMOSD）诊断及预后的意义。方法收集2014年1月至2016年8月就诊于海军总医院的NMOSD患者61例作为试验组（NMOSD组），同期就诊的因其他疾病如神经症、偏头痛等行腰椎穿刺者24例作为正常对照组。收集NMOSD组临床、影像学资料及两组脑脊液标本，以酶联免疫吸附实验方法检测两组脑脊液中NFL浓度并进行比较。比较不同亚型的NMOSD患者脑脊液NFL水平，采用多元线性回归方法分析患者脑脊液中NFL浓度的影响因素。结果NMOSD组脑脊液NFL浓度[2 729.00（14 862.00） pg/ml]较正常对照组[299.50（308.00） pg/ml]明显升高，差异有统计学意义（进行以10为底的对数转换后行t检验，t＝8.588, P＝0.000）。NMOSD患者年龄（b＝0.017, P〈0.01）、扩展残疾状况量表评分（b＝0.078, P〈0.05）、病灶强化与否（b＝0.478, P〈0.01）对lg（NFL）有影响。性别、病程、血水通道蛋白抗体阳性率对NMOSD患者脑脊液中NFL浓度高低无明显影响。结论脑脊液NFL水平有助于评估NMOSD患者病情轻重及有无进展趋势。

甲状腺癌中MCM7和p27的表达及临床意义

目的探讨MCM7和p27蛋白的表达与甲状腺癌发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学S-P法检测50例甲状腺癌、30例甲状腺腺瘤、30例结节性甲状腺肿及20例正常甲状腺组织中MCM7和p27蛋白的表达。结果甲状腺癌组织中MCM7蛋白的阳性表达率为100.0%(50/50),均显著高于甲状腺腺瘤20.0%(6/30)、结节性甲状腺肿23.3%(7/30)及正常甲状腺组织20.0%(4/20)(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。甲状腺癌组织中p27蛋白的阳性表达率为22.0%(11/50),均显著低于甲状腺腺瘤100.0%(30/30)、结节性甲状腺肿100.0%(30/30)及正常甲状腺组织100.0%(20/20)(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。甲状腺癌中MCM7与p27蛋白的表达呈负相关关系(r=-0.326,P<0.05)。结论 MCM7蛋白的高表达和p27蛋白的低表达可能涉及了甲状腺癌的发生过程。二者联合检测,可能可作为临床早期诊断和判断甲状腺肿瘤细胞增殖活性的生物学指标。