微囊化兔坐骨神经组织移植对大鼠脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的 :探讨异种微囊化兔坐骨神经组织对大鼠脊髓损伤保护作用的分子机制。方法 :⑴取兔坐骨神经剪碎 ,加胰蛋白酶消化 ,滤液用 1.5 %海藻酸钠混匀 ,喷入Bacl2液混匀、收集含有神经细胞 /组织的微囊 ;⑵A正常对照组 5只 ;B空囊组 3 0只 ;C微囊化兔坐骨神经组织移植组 3 0只 ;⑶动物模型的建立 :动物麻醉后 ,咬除T9～ 11胸椎棘突椎板 ,暴露脊髓 ,左半侧脊髓洞切损伤 ;B组洞腔植入空囊 ;C组植入等量的微囊化坐骨神经组织 ,各组于术后不同时间各取 5只SD鼠 ,取损伤区脊髓组织切片。A组取相应处脊髓 ;⑷bcl-2免疫组化染色 ;⑸TUNEL染色。结果 :TUNEL检测见胞核呈棕黄颗粒状凋亡细胞 ;微囊化兔坐骨神经组织移植组出现大量bcl-2蛋白阳性细胞。结论 :微囊化兔坐骨神经组能对抗脊髓损伤后神经元凋亡 ,促进bcl-2蛋白表达 。

微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白-43表达的影响

目的 :探讨微囊化异种坐骨神经组织细胞移植对大鼠脊髓损伤后再生的促进作用。方法 :A组微囊化坐骨神经组织细胞组、B组坐骨神经组织细胞组、C组空囊组、D组明胶海绵组及E组损伤对照组。无菌条件下取家兔坐骨神经 ,过滤后加入生理盐水制成悬液。将悬液与 1.5 %海藻酸钠溶液充分混合 ,经双腔喷头喷入 2 0mmol/L的氯化钡溶液制得微囊化坐骨神经组织细胞。同法制备空囊 ,但不包被细胞。以T10为中心打开椎管 ,虹膜刀自脊髓后正中沟插入并向左半侧横向切开 ,去除约 2mm脊髓组织 ,分别将浸有微囊化坐骨神经组织细胞、坐骨神经组织细胞及空囊的明胶海绵植入A、B、C组损伤处 ,D组植入明胶海绵 ,E组不作移植。分别于术后不同时间 ,每个时相 4只大鼠 ,取出脊髓损伤平面为中心的 8mm脊髓 ,分别行Nissl及GAP -4 3组化染色。结果 :A组尼氏体恢复 ,7天时GAP -4 3阳性表达达高峰 ,以后渐下降。结论

微囊化SD大鼠周围神经组织移植促进周围神经再生的实验研究

目的 采用微囊化组织研究技术 ,研究微囊化神经组织移植对周围神经再生的影响。方法 将 12只SD大鼠随机分为实验组和空白组。切断SD大鼠左侧坐骨神经并行显微缝合 ,实验组 8只 ,加入制备好的微囊化同种异体周围神经颗粒无血清培养液 30 μl,约含微囊颗粒 30 0个 ;空白组 4只 ,加入不含微囊颗粒的无血清培养液 30 μl。术后 4周取材做组织形态学检查。结果 实验组周围神经再生明显优于空白组。

微囊化组织细胞移植的研究进展

微囊化包被组织细胞移植可发挥免疫隔离作用 ,为解决治疗疾病中的免疫排斥反应和移植物来源短缺提供了新途径。海藻酸钠 /多聚赖氨酸 /海藻酸钠 (APA)微囊是目前最成熟的微囊化技术 ,其高度的生物相容性和良好的免疫隔离作用 ,使得异种组织细胞或基因工程细胞移植成为可能 ,在神经内分泌及代谢疾病方面的研究取得了可喜的进展 ,具有广阔的应用前景。

微囊化同种异体骨髓间充质干细胞移植预防兔椎间盘退变的实验研究

目的:探讨超顺磁性氧化铁(superparamagnetic iron oxide,SPIO)磁粒子标记的微囊化同种异体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,bMMSCs)移植预防椎间盘退变的可行性。方法:选用60只健康新西兰大白兔,随机平均分为A、B、C、D、E5组,每组12只。A、B、C、D组应用髓核抽吸法制作L2/3、L3/4、L4/5椎间盘退变模型,取同种异体兔bMMSCs行体外培养,并在体外纯化扩增,用SPIO标记后行微囊化,于造模手术当时植入(A组)兔手术节段椎间盘内;B组植入未微囊化bMMSCs;C组移植空微囊;D组仅制作模型,不移植;E组为正常对照组。分别于建模后2、4、6、8周时用MRI扫描对标记干细胞在椎间盘内分布进行示踪,并于相应时间点处死动物后取L2/3、L3/4、L4/5髓核组织,用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量的变化,免疫组化法测定Ⅱ型胶原含量的变化,所得数据进行统计学分析。结果:bMMSCs能被SPIO有效标记,应用MRI扫描可观察到其在体内的分布,8周时MRI图像与4周时相比,干细胞由注射部位向周边发生了迁徙。建模后2、4、6、8周各时间点,A组髓核中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量均高于B组、C组和D组,差异有统计学意义(P<0.05);B组均高于C组及D组,差异有统计学意义(P<0.05);各时间点E组与B组、C组及D组相比差异有统计学意义(P<0.05);术后6、8周时A组与E组之间差异无统计学意义(P>0.05);各时间点C组和D组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:微囊化bMMSCs移植后能恢复兔髓核中细胞外基质含量,其效果优于单纯bMMSCs移植。

微囊化牛肾上腺嗜铬细胞植入偏侧帕金森病样猴脑的长期效应:行为和组织学观察

目的 了解微囊化牛肾上腺嗜铬细胞 (APA BCC)脑内移植对纠正偏侧帕金森病 (PD)样猴异常行为的长期效应和脑组织学变化。方法 观察 6只右侧脑尾状核及壳核接受了APA微囊、BCC或APA BCC植入的PD样猴的行为变化及移植后 14个月 ,2 8个月的脑组织形态学改变。结果 (1)植入空微囊 2 8个月猴的PD样症状始终无改善 ;植入APA BCC或BCC的PD猴 ,3d后其PD症状开始得到明显改善 ;植入BCC的改善效应持续 1个月或 2个月 ;3只植入APA BCC的PD猴的行为改善效应持续时间明显长于BCC组 ,分别超过 14个月 ,2 8个月和 4 8个月。 (2 )猴脑组织学观察显示植入APA BCC后行为改善良好的PD样猴脑移植区内存在大量形态完整的微囊 ,囊内可见存活的BCC ,移植区周边纹状体内TH阳性纤维密度明显高于对侧 ;行为改善持续时间短的猴脑内未见完整微囊及存活的BCC ;植入BCC的猴脑内未见存活的BCC ,见局灶瘢痕样组织反应 ;植入空微囊的猴脑组织内存在微囊。结论 植入PD样猴脑内的APA BCC 2 8个月时仍完好存在并可纠正异常行为 ,周围组织反应轻微。

微囊化猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝衰的免疫隔离机制

目的:探讨微囊化猪肝细胞腹腔内移植对药物性肝衰大鼠的治疗作用,观察受体存活率、肝组织病理变化及大网膜的免疫隔离作用. 方法:以海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)包裹乳猪肝细胞,体外观察APA微囊对NK细胞介导的细胞毒作用的隔离效果.D-氨基半乳糖腹腔内注射诱导大鼠急性肝衰竭,48 h后将微囊化的猪肝细胞移植于大鼠腹腔内,观察移植大鼠存活率,免疫组化法检测大鼠大网膜内CD4、CD8、IgG和IgM的表达. 结果:微囊可有效保护囊内K562细胞不受NK细胞的杀伤.与裸肝细胞移植组相比,微囊化乳猪肝细胞移植组大鼠存活率显著提高(1wk存活率78.6% vs 66.7%, P=0.0 046;2 wk存活率42.9% vs 25.0%,P=0.0027, P<0.01).大网膜CD4、CD8、IgG表达较弱(P=0.0 342、P=0.0 197及P=0.0 445,P<0.05),而IgM表达无明显差异(P>0.05). 结论:APA微囊可有效隔离抗体及淋巴细胞介导的体液和细胞免疫反应.微囊化异种肝细胞移植可治疗大鼠急性肝衰,给予肝功能代谢支持,提高移植治疗效果.

脊髓NO通路参与APA微囊化牛肾上腺嗜铬细胞蛛网膜下隙移植镇痛机理

目的 通过观察APA微囊化牛肾上腺嗜铬细胞 (BCCs)移植对坐骨神经慢性挤压伤(CCI)大鼠脊髓神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)的影响 ,探讨脊髓NO通路是否参与APA微囊化BCCs蛛网膜下隙移植镇痛机理。方法 SD大鼠分为四组 ,每组 5只 ,即对照组 (C组 ) ,正常大鼠 ;CCI组 ,右侧坐骨神经结扎 ;APA组 ,CCI模型后 1周 ,蛛网膜下隙移植 5 0 0～ 6 0 0个APA空囊 ;APA BCCs组 ,CCI模型后 1周蛛网膜下隙移植 5× 10 6个APA微囊化BCCs。测定各组移植后 1周的感觉异常和痛觉过敏阈值 ,感觉异常以VonFrey细丝触诱发痛阈值 (g)表示 ,痛觉过敏阈值用CO2 激光刺激痛阈值(ms)表示。动物处死后取脊髓冰冻切片 ,按照标准免疫组化法检测各组脊髓中nNOS的表达变化。结果 CCI组、APA组脊髓中nNOS活性较C组明显升高 (P <0 0 1) ,但CCI组和APA组间无显著差异 (P >0 0 5 ) ;APA BCCs组结扎侧触诱发痛阈值和CO2 痛阈值高于CCI组和APA组结扎侧 (P <0 0 1) ,同时脊髓中nNOS活性较CCI组和APA组明显降低 (P <0 0 1) ,与C组基本相同 (P >0 0 5 )。结论 CCI大鼠脊髓nNOS表达增加 ,APA微囊化BCCs蛛网膜下隙移植缓解CCI大鼠的触诱发痛和痛觉过敏 ,同时降低CCI大鼠脊髓nNOS表达 。

海藻酸钠纯度对微囊纤维化及囊内甲状旁腺组织功能的影响

目的研究海藻酸纯度对移植微囊及囊内人胚胎甲状旁腺组织功能的影响。方法将纯化及未纯化海藻酸微囊及微囊化人胚胎甲状旁腺组织分 4组异种移植于小鼠腹腔内 ,设立空囊对照组。测定人甲状旁腺素数值 ,通过测定具有特异性的人甲状旁腺素 ,以明确微囊内甲状旁腺组织的分泌功能 ,组织学检测微囊形态。结果移植后 2个月纯化组及未纯化组人甲状旁腺组织分泌功能有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,分别为 (38.8± 13.7) pg/ml和(1.2± 0 .7) pg/ml,纯化及未纯化海藻酸钠制备空囊移植组 ,植入 1个月时微囊冲洗回收率分别为 (72± 18) %和(2 4± 13) % ,植入 2个月时为 (6 5± 2 1) %和 0。结论纯化的海藻酸制备微囊具有良好的生物相容性 。

微囊化细胞移植治疗疼痛的研究进展

疼痛是与已然发生或可能发生的组织损伤相关的一种不愉快的感觉和情感经历,可存在于各类疾病的病程中。疼痛的发病机制相当复杂,是目前临床治疗的焦点问题之一。细胞移植治疗疼痛的概念最早由美国的Sagen研究小组提出,其得自于对炎症性疼痛的研究。

微囊化大鼠肝细胞移植的组织学研究

目的 研究微囊化大鼠肝细胞腹腔移植后的存活情况以及组织学改变。方法 用二步法胶原酶门 腔静脉灌注法分离Wistar大鼠肝细胞 ,用Percoll梯度分离液纯化、海藻酸钠 氯化钡法微囊化包裹肝细胞 ,分别行腹腔注射移植 ,将纯化的肝细胞移植至SD大鼠体内 (第 1组 )、微囊化包裹的肝细胞移植至SD大鼠体内 (第 2组 )及Wistar大鼠体内 (第 3组 ) ,观察移植后各组不同时间肝细胞存活率及其组织学变化。结果 (1)移植后第 4、7d ,各组间肝细胞存活率的差异均有显著性 (P <0 .0 1) ;移植后第 14d ,第 2组与第 3组间肝细胞存活率的差异无显著性 ;(2 )移植后第 4d开始 ,微囊周围出现纤维增生现象 ,第 2组较第 3组明显。结论 微囊化可为移植的肝细胞提供免疫屏蔽作用 ,从而提高肝细胞移植的存活率 ;

微囊化转基因BMSCs移植修复兔早期激素性股骨头坏死实验研究

目的探讨微囊化转基因BMSCs移植修复兔早期激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of femoral head,SONFH)的疗效。方法采用高压静电法制备海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(sodium alginatepoly-L-lysine-sodium alginate,APA)微囊化高表达Foxc2转基因BMSCs,取部分细胞成骨诱导培养,2、3周时茜素红染色观察。取40只新西兰大白兔,采用激素加内毒素方法制备SONFH模型,经MRI筛选造模成功32只,将其随机分为A、B、C、D 4组(n=8);另取6只正常兔作为正常对照组(E组)。A组模型动物不作任何处理;B、C、D组动物双侧后肢股骨头行髓芯减压后,分别于减压区注入生理盐水、同种异体BMSCs、APA微囊化转基因BMSCs。术后6、12周取股骨头标本行HE染色,观察骨长入情况;免疫组织化学染色观察骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、过氧化酶体增殖剂激活受体γ2(peroxisome proliferative activated receptorγ2,PPARγ-2)和VEGF蛋白表达;术后12周透射电镜观察骨微结构,生物力学测定松质骨及软骨下骨最大压缩强度及平均弹性模量。结果诱导培养2、3周,茜素红染色后均可见钙结节形成,且3周时数量较2周时增加。各组实验动物均存活至实验完成。组织学及透射电镜观察示,与A、B、C组比较,D组骨小梁排列较整齐,骨空骨陷窝较少,有丰富的功能细胞器,可见明显成骨,且12周时坏死区被完全修复。免疫组织化学染色示,术后6、12周,A、B、C组OCN及VEGF表达均低于D、E组,B、C组高于A组,E组高于D组,差异均有统计学意义(P<0.05)。A、B、C组PPARγ-2表达高于D、E组,A组高于B、C组,D组高于E组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后12周生物力学测试显示,D、E组股骨头松质骨、软骨下骨平均弹性模量和最大压缩强度均高于A、B、C组(P<0.05);A、B、C组间及D、E组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论微囊化转基因BMSCs体内移植可修复兔早期SONFH。

组织胚胎学

人胚胎小肠CgA-IR细胞的形态学研究；成人房窒结的超微结构；几丁质多孔体联合培养大鼠胎脑神经细胞脑内移植的实验研究；胎盘异铁蛋白对小鼠胚胎生长发育影响的研究；大鼠腰髓内Calbindin D-28K样、SP受体样及Fos阳性神经元向臂旁外侧核的投射；重组睫状神经营养因子对受损周围神经施万细胞相关基因表达的作用；中枢神经系统损伤过程中Nogo-A降解片段的检测；激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α对大鼠离子型谷氨酸受体1表达的影响；体外培养脊髓神经元损伤后c-Jun蛋白表达；施万细胞和L-NNA对脊髓半横断后脑干红核神经元存活的影响；氯化锂促进不同年龄成年小鼠齿状回细胞增殖与神经发生；不同浓度的银杏内酯B对培养的神经干细胞分化的影响；微囊化牛肾上腺嗜铬细胞多巴胺含量的检测；高压力对体外培养动脉中膜平滑肌细胞凋亡及其相关蛋白的影响；app／psl双转基因阿尔茨海默病模型小鼠脑内胶质细胞的激活及iNOS的表达；成人与新生儿心脏连接蛋白43表达差异；神经垂体多肽激素分泌颗粒释放形式和转运途径的形态学研究；信号转导子与转录激活子3和细胞因子信号转导抑制因子-3蛋白在成年大鼠脊髓内的表达与定位；短暂性前脑缺血后大鼠海马各区NMDA受体亚单位1 mRNA的表达变化；增强型绿色荧光蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞及其无血清神经细朐诱导；绿色荧光蛋白小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及成骨诱导。

微囊化猪胰岛肝动脉内移植治疗犬Ⅰ型糖尿病

目的 观察放射介入方法行微囊化猪胰岛细胞肝动脉肝内移植的可行性及有效性。方法 采用放射介入技术经股动脉穿刺将微囊猪胰岛经肝动脉植入糖尿病模型犬肝内 ,术后监测空腹血糖、C肽、胰岛素用量变化 ,行肝功能、肝脏组织病理学检查。结果 移植后糖尿病犬血清C肽水平升高 2～ 6倍 ,胰岛素用量逐步减少 ,3只犬停用胰岛素并维持空腹血糖正常 ;移植后肝转氨酶一过性升高 ,2周后降至正常。结论 经肝动脉肝内微囊猪胰岛素异种移植治疗移植Ⅰ型糖尿病犬安全、可行。

玻璃化法保存血管异体移植的免疫反应

目的评价玻璃化法保存异体血管移植后的免疫反应。方法对玻璃化法保存14d的新西兰兔股动脉进行异体移植,在4周时对移植动脉进行组织学观察,分别于0、2、4、6、8、12、16和24周采血测定血清抗体滴度和抗体细胞毒作用,并与新鲜新西兰兔股动脉和低温冷冻法保存的新西兰兔股动脉进行比较。结果异体血管移植后在局部和全身均产生了免疫排斥反应。血清抗体滴度的峰值出现于术后第4周,玻璃化法保存的异体血管组织匀浆抗体滴液为0.120±0.023,和新鲜异体血管(0.198±0.020)的差异有统计学意义(P<0.01),和低温冷冻法保存的异体血管(0.130±0.024)的差异无统计学意义(P>0.05)。结论经玻璃化法和低温冷冻法保存的血管免疫原性降低。